奧硝唑氯化鈉注射液的含量測定方法研究

楊蓉，蔡狀

1哈爾濱譽衡藥業股份有限公司；2北京科信必成醫藥科技發展有限公司哈爾濱分公司

奧硝唑氯化鈉注射液的含量測定方法研究

楊蓉1，蔡狀2

1哈爾濱譽衡藥業股份有限公司；2北京科信必成醫藥科技發展有限公司哈爾濱分公司

目的：建立奧硝唑氯化鈉注射液中奧硝唑的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，以318 nm為檢測波長，以甲醇-水（20：80）為流動相，柱溫為30℃，流速為1ml/min。結果：奧硝唑在20～280μg/ml的范圍內線性關系良好，平均回收率為99.97%，樣品溶液在24h內穩定，且空白輔料不干擾本品的含量測定。結論：本法操作快速、準確，可作為該制劑的含量測定方法。

奧硝唑；HPLC；含量測定

1 儀器與試藥

Agilent 1200；AB135-S梅特勒-托利多電子天平。奧硝唑對照品（中國食品藥品檢定研究院）；奧硝唑氯化鈉注射液（自制，批號：141201、141202、141203）；甲醇（色譜純）；超純水。

2 方法及結果

2.1 色譜條件色譜柱：艾杰爾Venusil MP C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流動相甲醇-水（20：80）；檢測波長為318 nm；流速1 ml/min；柱溫30℃；進樣量20 μL。

2.2 樣品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備取奧硝唑對照品適量，精密稱定，加流動性溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備精密量取本品1ml（約相當于奧硝唑5mg），置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.2.3 空白輔料溶液的制備按處方比例取不含奧硝唑的其他成分，照“2.2.2”項下方法制成空白溶液。

2.3 含量測定波長選擇試驗精密稱取奧硝唑對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成約20μg/ml的溶液。取20μL注入液相色譜儀，在200～400nm波長范圍內對其進行紫外掃描。結果奧硝唑在318nm處有最大吸收，確定測定波長為318nm。

2.4 專屬性試驗精密量取對照品溶液、供試品溶液和空白輔料溶液各20μL注入液相色譜儀，照含量測定方法測定，結果表明空白輔料中在與奧硝唑對照品保留時間相應的位置無色譜峰，不干擾主峰的測定，方法專屬性良好。

2.5 耐用性試驗在“2.1”項下的色譜條件基礎上，柱溫改變（± 5℃）、流速相對值變化±20%、流動性pH變化±0.2、檢測波長改變± 2nm、改變不同批號的艾杰爾Venusil MP C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱。結果表明，測量條件微小變動時，試驗結果符合要求，各條件下的含量數據的相對標準偏差為0.98%，不大于2.0%。

2.6 方法精密度試驗取樣品按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，照含量測定方法測定，試驗結果表明平均含量為100.27%，RSD%為0.71%，方法精密度良好。

2.7 系統適用性重復性精密量取對照品溶液20μL，連續進樣6次，記錄色譜圖。結果峰面積平均值為223096，RSD%為0.59%，儀器重復性良好。

2.8 定量限取“2.2.1”項下的對照品溶液適量，逐步稀釋至信噪比約為10：1，取稀釋的溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，通過游標卡尺測量可知此時峰高為5.36nm，基線噪音為0.46nm，經計算信噪比為11.66，定量限為0.0426mg/ml。

2.9 線性試驗精密稱取奧硝唑對照品100mg，置100ml量瓶中，加流動性溶解，稀釋至刻度，得1mg/ml溶液，分別量取上述溶液適量，得每ml含奧硝唑20、60、100、160、240、280μg的流動相溶液。取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果線性方程為A= 548617C-1077.3，γ=0.9999，其響應因子的RSD為0.54%，符合線性要求。Y軸截距為1077.3遠小于100%響應值的2%（4367.39）。

2.10 準確度試驗設計3個不同濃度（即80%、100%、120%），每個濃度制備3份供試品溶液，按含量測定方法進行測定。對照品溶液配制：精密稱取奧硝唑對照品100mg，置100ml量瓶中，加流動性溶解，稀釋至刻度，得1mg/ml溶液。供試品溶液配制：取50ml量瓶9個，分別加入約相當于奧硝唑5mg時的空白輔料量，分別標號1,2,3,4,5,6,7,8,9。其中1,2,3號量瓶加入奧硝唑對照品約4mg，4,5,6號量瓶加入奧硝唑對照品約5mg，7,8,9號量瓶加入奧硝唑對照品約6mg。精密量取上述各供試品20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算奧硝唑的回收率、平均回收率及相對標準偏差。結果含量測定方法準確度回收率為99.97%，RSD為0.71%。方法準確可行。

2.11 樣品溶液穩定性試驗取“2.2.2”項下供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算奧硝唑含量，計算相對標準偏差。結果供試品在24h放置過程中，奧硝唑平均含量為99.15%，含量的RSD為1.02%，因此供試品溶液在24h內穩定性良好。

2.12 三批樣品含量測定三批樣品含量結果分別為99.98%、100.02%和100.24%，符合質量標準規定要求。

3 討論

奧硝唑氯化鈉注射液含量測定方法學驗證實驗結果表明，用HPLC法測定奧硝唑氯化鈉注射液中奧硝唑的含量具有專屬性強、重復性好、簡便、快速、準確等特點，較紫外分光光度法更加先進，結果更準確，因此本法可用于該制劑的質量控制。

[1]李全斌，喬明艷.國內奧硝唑醫院制劑的開發及臨床應用[J].海峽藥學，2005，18（5）：135-137.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[Z].北京：中國醫藥科技出版社2010.附錄194-195.

楊蓉（1988-），女，哈爾濱譽衡藥業股份有限公司，黑龍江省哈爾濱市，本科，藥師，研究方向：藥物分析。

蔡狀（1988-），男，北京科信必成醫藥科技發展有限公司哈爾濱分公司，黑龍江省哈爾濱市，本科，藥師，研究方向：藥物制劑。