經典毒株PRRSV弱毒疫苗對高致病性PRRSV的臨床控制報告

祖海濤　蘇良科　朱連德

(勃林格殷格翰國際貿易(上海）有限公司動物保健部，北京100010）

經典毒株PRRSV弱毒疫苗
對高致病性PRRSV的臨床控制報告

祖海濤蘇良科朱連德

(勃林格殷格翰國際貿易(上海）有限公司動物保健部，北京100010）

摘要：本文介紹了某確診為HP-PRRS的規模豬場豬只的臨床癥狀，鑒別診斷，實驗室血清、分子生物學和基因測序的檢測，發現發病的主要原因是HP-PRRS的感染并伴有PCV2感染。豬場通過更換疫苗和改變措施，防控效果有所改善。通過分析后發現，針對中國目前的藍耳病毒株，“經典株”PRRS疫苗對高致病性PRRSV變異藍耳病也具有良好的免疫保護效果。總之，在合理使用弱毒疫苗的同時，科學的豬場管理和嚴格的生物安全對于藍耳病的防控也是至關重要的。

關鍵詞：藍耳病；發病情況；檢測；防控

藍耳病即豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS），是目前危害全球養豬業的主要傳染病之一，在全球大部分地區流行[1]。該病在我國普遍存在，特別是2006—2007年高致病性藍耳病（HP-PRRS）暴發后，給我國養豬生產造成巨大損失[2-4]。

2007年至今，我國相繼問世NVDC-JXA1株高致病性藍耳病滅活疫苗，CH-1R株、R98株、JXA1-R株、HuN4F112株、TJMF92株等經典和高致病性藍耳病弱毒活疫苗，以及較早的CH-1a株經典藍耳病滅活疫苗和進口的Ingelvac PRRS MLV VR2332株減毒活疫苗，這些疫苗的推廣和應用對控制和減緩疫情蔓延起到了積極的作用[5,6]。但是近年來，由于養豬場對高致病性藍耳病病原認識不清，加之獸醫人員對藍耳病弱毒活疫苗特性了解不足，濫用疫苗現象普遍，再加上各豬場豬群的疾病背景不同，免疫程序更是千差萬別，臨床上暴發高致病性藍耳病豬場病例有抬頭趨勢[7]。許多豬場出現過免疫HPPRRS疫苗但還是發生HP-PRRS的現象，導致很多豬場對是否要進行藍耳病疫苗免疫處在觀望或迷茫狀態。

1　豬場背景

湖北某規模化商品豬場，現存欄經產母豬500頭。母豬品種為長大二元，公豬品種為杜洛克，生產杜長大三元雜交商品豬。單點式飼養管理模式，自繁自養，全進全出。仔豬在21日齡斷奶，斷奶當天轉入保育舍，70日齡從保育舍轉入育肥舍。

豬場主要疫苗的免疫程序如下。

母豬：高致病性藍耳病疫苗（TJM-F92株）普免4次/年；豬瘟高效細胞疫苗普免3次/年；偽狂犬疫苗普免4次/年；

仔豬：仔豬出生后3日齡內滴鼻偽狂犬疫苗、55日齡二免（肌肉注射）；15日齡免疫高致病性藍耳病疫苗（TJM-F92株）活疫苗和全病毒滅活圓環病毒疫苗各1頭份；豬瘟高效細胞疫苗35日齡首免，65日齡二免。

豬場遠離養殖高密度區，自然防疫條件較好。在藍耳病的防控方面，后備種豬一直是定點引種，引入時采取嚴格隔離，生產成績一直很好而且穩定。

2　豬場發病情況

自2014年4月開始，產房存活率下降，仔豬轉入保育舍后10天左右（即在30日齡）陸續出現發病癥狀，主要表現為慢性消瘦、厭食、精神沉郁、打噴嚏、流鼻涕，部分豬發高燒。急性死亡豬皮膚發紺，慢性經過豬表現被毛粗亂，貧血、皮膚蒼白、衰竭無力，后腿關節腫大。到55日齡進入發病高峰，豬呼吸道病癥狀較嚴重，進入圈舍明顯聽到育成豬咳嗽、打噴嚏；20%左右育成豬被毛長，脊椎骨突出，消瘦，死淘率可達10%，經濟損失巨大。發病豬只的臨床表現為體溫41℃以上，腹式呼吸，采食量下降，腹瀉。

在發病豬群，豬場加強了欄舍消毒、病豬隔離等生物安全措施，并在飼料和飲水中加入阿莫西林、氟苯尼考等多種抗生素和中藥制劑進行治療，但效果不佳。

病死保育豬解剖后主要以肺臟病變為主，肺臟充血、出血、肺小葉間質增寬，局灶性肺實變，肺臟肉變，肺門淋巴結水腫呈棕黃色；腹股溝淋巴結水腫，切面多汁。個別豬心包積液并有纖維滲出物，心肌表面呈“絨毛心”。

母豬群的健康一直沒有受到影響，產后配種率、分娩率都維持在原來正常水平。

2014年7月豬場采集了日齡都在60左右的發病豬及健康豬的血樣各10份，送正大集團實驗室做抗體檢測，同時采集3份病料送到華中農業大學進行病原學檢查。

3　實驗室檢測

3.1血清抗體檢測

將采集的血液樣品分別進行藍耳病抗體和豬瘟抗體的檢測。

PRRSV抗體監測試劑盒使用美國愛德士（IDEXX）公司產品，生產批號為40959-V931。操作方法按照說明書進行，PRRSV抗體檢測成立條件是陽性對照OD值-陰性對照OD值≥0.15；陰性對照OD值≤0.15。陽性判斷標準是S/P值≥0.40；陰性判斷標準是S/P值＜0.40。

CSFV抗體檢測試劑盒也是美國愛德士（IDEXX）公司產品，生產批號A651。操作方法按照說明書進行，CSFV抗體檢測成立條件是陰性對照OD值＞0.500，陽性對照的阻斷率＞50%。陽性判斷標準是阻斷率≥40%；陰性判斷標準是阻斷率≤30%；阻斷率在30%～40%之間為可疑。

3.2分子生物學檢測

豬場同時采集3份病料送往華中農業大學應用RT-PCR、PCR等方法進行高致病性和/或經典的PRRSV抗原、圓環病毒2型（PCV2）、偽狂犬病病毒（PRV）、豬瘟（CSF）的抗原檢測。

3.3PRRSV的ORF5基因測序

對RT-PCR所檢測到的藍耳病毒株，擴增ORF5基因片段、測序，并與當前流行毒株和目前常用的疫苗毒株進行比對分析。

4　實驗室檢測結果

4.1抗體檢測結果

豬瘟抗體檢測結果顯示：健康豬抗體陽性率為10%，平均阻斷率為26%；發病豬抗體陽性率為40%，平均阻斷率為32%，每頭豬的阻斷率見圖1。

藍耳病抗體的檢測結果顯示：健康豬抗體陽性率為20%，離散度為65%，S/P值為0.48；發病豬抗體陽性率為40%，離散度為72%，S/P值為1.5，其中S/P＞2的30%，S/P＞3的10%，見圖2。

圖1　CFSV抗體阻斷率分析圖

4.2病毒檢測結果

PRRSV抗原檢測的引物是根據高致病性藍耳病病毒核酸NSP2基因進行設計，擴增的產物經過凝膠電泳后如果僅有508 bp的片段，說明只有經典毒株的PRRSV感染；如果僅有418 bp的片段，說明只有高致病性PRRSV毒株感染；如果同時能擴增出這兩個片段，說明樣品同時存在經典和高致病毒株。送檢的3份病料都是只有418 bp左右的片段，說明高致病性PRRSV核酸呈陽性，而沒有檢測出經典的PRRSV（圖3）；圓環病毒2型的各樣品的PCR產品電泳后出現496 bp的特異性條帶，因此判斷為陽性（圖4）；豬瘟抗原（圖5）和偽狂犬野毒（圖6）都是陰性。詳細結果見表1。

圖2　PRRSV抗體S/P值分析圖

圖3　病料的RT-PCR結果

圖4　病料的圓環ORF2基因PCR檢測

圖5　病料的豬瘟E2基因的RT-PCR結果

圖6　病料的偽狂犬gE基因的PCR結果

表1　3份病料的抗原檢測結果

樣品中RT-PCR擴增出的PRRSV陽性條帶的陽性毒株，擴增ORF5基因序列，并對其測序，將核酸序列在NCBI上經Blast搜索，并與當前流行毒株和目前常用的疫苗毒株進行比對分析，表明該豬場的毒株與高致病性藍耳病疫苗毒株最為接近，與HuN4-F112株、TJM -F92株、JXA1-R株的同源性分別為98.83%、98.50%、98.17%。而與經典的PRRS疫苗株VR2332、R98株的同源性分別是88.17%和88.00%。測序結果表明豬場感染的是高致病性藍耳病。詳細結果見表2。

表2　藍耳病病毒主要抗原基因ORF5測序同源性比較結果((%%))

5　豬場的防控措施和效果

5.1防控措施

根據豬場的臨床癥狀和實驗室的檢測結果，判定該豬場發病的主要原因是HP-PRRS的感染并伴有PCV2的感染，而沒有經典PRRSV、豬瘟、偽狂犬野毒的感染。但該場一直使用高致病性藍耳（TJM-F92株）疫苗，經與豬場詳細溝通后，決定從2014年8月1日開始全場使用進口經典毒株PRRSV疫苗，使用方法如下。

⑴母豬群在使用疫苗前1周，飼料中添加適當藥物進行保健，主要的藥物是20%替米考星1 kg/噸料+ 20%磺胺間甲氧嘧啶1 kg/噸料，在飼料中再添加適當的電解多維。

⑵母豬群首次普免進口經典毒株PRRSV疫苗時，產前一個月的母豬暫時不免，待產完仔豬后，在產房和仔豬一同免疫。

⑶母豬群首次免疫后，一個月加強免疫一次，以后4次/年。

⑷將公豬分為2個群體，分開免疫（間隔3周），免疫后的公豬，3周內不要使用其精液。

⑸現有產房中的所有14日齡及以上仔豬免疫進口經典毒株PRRSV疫苗1頭份。以后出生的仔豬在14日齡免疫。

同時加強病豬的隔離淘汰、環境衛生管理工作，嚴格做好全進全出。

5.2防控效果

在豬場免疫經典毒株PRRSV疫苗后3個月，豬場比較了更換疫苗前后各2個月的斷奶仔豬數和保育舍的存活率。更換疫苗前由于保育豬發病，6～7月的生產成績不高，在8月初更換藍耳病疫苗后，豬場的生產成績有很大提升（表3）。到目前為止，豬場生產成績一直穩定，保育豬成活率達到97%左右。

表3　豬場更換PRRSV疫苗前后生產成績的比較

6　分析與討論

對PRRS患病豬群進行活疫苗免疫，是有效控制PRRS危害的重要措施之一，這在全世界范圍內都有大量成功的報道[8,9]。從PRRS美洲株弱毒苗的臨床使用效果可以看出，免疫能夠減輕臨床癥狀，提高生產成績，對同基因型變異株和異源毒株有保護力[10-12]。

在養豬的生產實際中，當懷疑豬群受到藍耳病感染時，首先應盡快檢測確診，然后使用疫苗進行免疫。但養殖戶在選擇使用哪種疫苗或哪個廠家的藍耳病疫苗上，往往無所適從，因為市場上既有“高致病性”藍耳病疫苗又有“經典”藍耳病疫苗。當前流行一種觀點，即對豬場的PRRS毒株進行測序，根據測序結果來確定選擇使用高致病性變異株疫苗還是使用經典毒株疫苗[6]。在PRRSV的基因組中，非結構蛋白Nsp2和結構蛋白ORF5基因由于變異大，是進行PRRSV分子流行病學研究和病毒遺傳變異分析的重要的2個靶基因。當前大部分實驗室對PRRSV進行基因序列相似性比對并區分所謂的“高致病性”或“經典”毒株，依靠的正是這兩個基因。如果檢測出的毒株在NSP2具有非連續性的30個氨基酸的缺失，便屬于是“高致病性”PRRSV毒株，若相對應部位未出現缺失的就是“經典”PRRSV毒株。豬場內流行的PRRS毒株基因與PRRS疫苗毒株的基因序列相似性越高，并不一定意味著它們之間的交叉保護越好。Tanja等研究發現PRRS疫苗毒株和野毒株之間ORF5基因序列的相似性，與疫苗的交叉保護力沒有直接關系[13]。如果存在PRRS的基因相似性越高保護性越好，那么理論上講，用本豬場分離的PRRSV毒株來免疫本場豬群，效果應當是最好的。但是美國Daniel等試驗發現，使用本場的PRRSV毒株（LVI）給本場的豬群進行免疫馴化，雖然豬群PRRSV轉陰的時間要比使用商品化的PRRS MLV疫苗快，但是使用PRRS疫苗的經濟效益要好于本場PRRSV（LVI）的免疫[14]。

本文所報道的豬場，病料中擴增出的PRRSV ORF5基因核苷酸序列與我國分離的高致病性毒株HuN4-F112株、TJM-F92株和JX A1-R株的同源性都在98%以上。在發病之前一直使用的是高致病性的藍耳病疫苗TJM-F92株，但還是在保育豬群中發生高致病性藍耳病，可見即便使用同基因型的藍耳病疫苗，也不能做到對豬群的全部保護，其原因在于PRRS的防控非常復雜，疫苗只是控制藍耳病的措施之一，需要的是綜合防控。該豬場雖然自然防疫條件較好，也非常注重藍耳病的控制，定點引種并在引入時進行隔離，但還是發生了藍耳病，而且歷經3、4個月都沒有得到理想的控制。分析發病的原因主要有兩方面：其一還是引種出了問題，因為在發病的前2個月（即2014年2月）豬場引進了一批后備母豬，這批后備母豬引入時臨床表現很健康，因條件限制引種時并沒有對這些后備豬進行檢測，它們可能帶毒或處于排毒期。其二是豬場雖然自繁自養，全進全出，但因為場地限制一直使用的是單點式飼養管理模式，所以發生藍耳病時無法切斷病毒在場內的反復循環感染，導致豬場發病的持續時間較長。

本文報告的豬場在受到高致病性藍耳病病毒感染后，應用進口經典毒株PRRSV疫苗有效控制了豬場高致病性藍耳病的野毒攻擊，降低了保育階段的損失，顯著改善了生產成績。由此案例可看出，“經典株”PRRS疫苗對高致病性PRRSV變異藍耳病，也具有良好的免疫保護效果。“高致病性”PRRSV毒株的特征是在PRRSV的NSP2基因存在30個氨基酸缺失，缺失的基因在整個PRRSV基因序列的占比不到0.6%，其本質還是北美株PRRSV，可以使用所有的北美株PRRS疫苗。國內外多個試驗也證明IngelvacPRRS MLV疫苗對多種常見異源PRRSV都是有效的[15-17]。因此當豬場發生檢測測序為“高致病性”PRRSV時既可以使用“經典株”PRRS疫苗，也可以使用安全穩定的“高致病性”PRRS疫苗。另外，此案例說明管理在藍耳病的控制上也起到重要作用。因為豬場從2014 年4月發病開始一直到同年10月，都沒有再引進后備豬，這在藍耳病的控制策略上相當于是對該豬場進行了封群。在8月開始對全場母豬

中國目前流行的藍耳病毒株，無論是經典的美洲型PRRSV，還是“高熱病”的變異PRRSV，都屬于PRRSV美洲型。進口豬藍耳病活疫苗能夠對不同毒株和同種毒株的攻毒提供交叉保護。但藍耳病的防控非常復雜，合理的使用弱毒疫苗，科學的豬場管理和嚴格的生物安全依然很重要[9,18]。

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中圖分類號：S852.65

文獻標識碼：B

文章編號：1673-4645(2015)04-0028-06

收稿日期：2015-01-21