WISP-2及FGFBP1在非小細胞肺癌中的表達①

閻紅娥，秦 越，鮑文華，孫云暉

(佳木斯大學附屬第一醫院呼吸內科，黑龍江 佳木斯 154003)

WISP-2及FGFBP1在非小細胞肺癌中的表達①

閻紅娥，秦 越，鮑文華，孫云暉

(佳木斯大學附屬第一醫院呼吸內科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：研究WISP-2及FGFBP1在非小細胞肺癌中的表達情況，并剖析兩者之間的相互關系，及評估兩種因子與非小細胞肺癌患者在相關的臨床參數之間的關系。方法：采用IHC-P法對經病理證實為NSCLC患者40例，取其癌組織標本及遠離癌腫5cm的組織標本40例作為對照組。所有患者在術前未經經放、化療、激素的應用及其它抗癌治療。結果：①NSCLC中WISP-2的陽性表達率25例(62.5%)明顯低于對照組的陽性表達率33例(82.5%)，NSCLC中FGFBP1的陽性表達率30例(75%)明顯高于對照組的陽性表達率12例(30%)。②WISP-2(+)FGFBP1(+)13例、WISP-2(-)FGFBP1(+)12例、WISP-2(+)FGFBP1(-)13例、WISP-2(-)FGFBP1(-)2例，兩因子表達呈負相關，差異具有統計學意義(χ2=4.95，P<0.05)。③WISP-2與FGFBP1在年齡及性別的陽性表達率不具有統計學意義(P>0.05)，而其他臨床參數均具有統計學意義(P<0.05)。結論：在NSCLC中，WISP-2呈低表達而FGFBP1則相反，兩者呈負相關，且WISP-2與FGFBP1在年齡及性別的陽性表達無相關性而在其他臨床參數之間關系密切，可以作為臨床診斷的參考指標，也可以為NSCLC的臨床治療提供新的思路。

WISP-2；FGFBP1;非小細胞肺癌

WISP-2(CCN5)是CCN家族就在近年來發現的一個新成員，即Wnt-1有道分泌蛋白2，其具體作用尚未明確及生物學相關特征報道較少，但近年來的相關研究發現，WISP-2基因與某些腫瘤的發生發展有著緊密的關系，因此組織學類型不同表達也不相同。有數據相關研究表明WISP-2基因具有雙向調節的作用，因此近年來成為CCN家族的主要研究熱點。FGFBP1最初是在表皮的鱗狀細胞癌株(A431)的培養基液中分離出來得到的,目前認為它與成纖維細胞生長因子家族(FGFs)有著密切的關系。FGFBP1的作用即是結合未活化的FGFs至細胞外基質(ECM)中，使其從ECM上解離并活化后提呈至FGFs受體，從而發揮其生物學的功能。近年來的研究發現，在人類不同癌組織中，均發現FGFBP1呈現高表達，其對腫瘤細胞的增殖及血管組織的生成具有正向調控的作用，充分的證實了FGFBP1可能在惡性腫瘤的發生發展過程中起到了非常重要的作用。 本實驗應用了IHC-P原理來檢測兩因子在NSCLC中的表達研究，并分析兩者之間的相互關系，及評估兩因子與NSCLC患者在相關的臨床參數之間的關系，從而為NSCLC提供新的臨床診斷及治療。

1 材料與方法

1.1 材料采集

隨機選取2013-12～2014-05佳木斯大學附屬第一醫院病理科經病理診斷證實共40例NSCLC病人的石蠟標本，并以遠離癌腫5cm的組織標本40例作為對照組。其中腺癌20例，鱗癌17例，其它3例，患者平均年齡45～70歲(男26例女14例)，根據臨床分期Ⅰ～Ⅱ期22例Ⅲa期18例及組織高分化7例中分化12例低分化21例伴有淋巴轉移24例無轉移16例，以及個人因素吸煙23例不吸煙17例。排除所有患者在術前未經經放、化療、激素的應用及其它抗癌治療。

1.2 診斷依據

NSCLC2014年NCCN指南采用了根據WHO肺癌組織學分類及國際抗癌聯盟(UICC)2009年第七版肺癌最新的TNM分期。依據腫瘤大小、附近淋巴結及遠處轉移的信息進行標準分期。

1.3 實驗方法

嚴格應用IHC-P檢測法，將腫物及正常肺組織做石蠟包埋且切片5μm厚，脫蠟、水化、修復等常規操作，最后在光鏡下觀察。同時用已知組織切片在同條件下染色作為陽性對照，方法嚴格參照產品說明。

1.4 實驗試劑

WISP-2抗體、FGFBP1抗體、化學超敏SP試劑盒、DAB顯色劑，均以已知陽性片做陽性對照。(以上試劑均擬夠于北京博奧森生物技術有限公司)。

1.5 統計學方法

采用SPSS18.0軟件對數據進行χ2檢驗行顯著性分析，校驗水準以P<0.05為有統計學意義。

2 結果

見表1～3。

表1 WISP-2和FGFBP1在40例NSCLC組織中的表達(n=40)

注：在NACLC中WISP-2的陽性表達率明顯低于對照組(χ2=4.01，P<0.05),而FGFBP1則相反(χ2=16.24，P<0.05)，差異均具有統計學意義。

表3 WISP-2和FGFBP1在40例NSCLC組織中臨床參數之間的關系

注：WISP-2與FGFBP1的陽性表達率在年齡及性別不具有統計學意義(P>0.05)，其他臨床參數均具有統計學意義(P<0.05)。

表2 WISP-2和FGFBP1在NSCLC組織中表達的相關性

注：兩者表達呈負相關，差異具有統計學意義(χ2=4.95，P<0.05)。

3 討論

人類腫瘤一般是經過一個多階段的過程形成的，而這個過程大約需數十年之久。腫瘤的形成首先由正常細胞在外界及自身等因素的刺激下逐漸變異并獲得成具有腫瘤特性的細胞，這種獨具特性導致了正常細胞增殖失控，最終演變為惡性的腫瘤細胞[1]。腫瘤細胞具有侵入正常組織及遠處轉移器官的能力，通過自身豐富的血管以獲得足夠的氧氣及營養物質[1]。近年來除腫瘤經典的特征外還發現了一些新的特征[1]，因此，梁珊珊等證實腫瘤的形成是一個復雜的過程，腫瘤細胞所具有的特征性的機制及時序取決于亞型及類型的不同而變化[1]。近年來隨著肺癌的發病率逐漸增高，已成為威脅了人類生命健康的最常見的惡性腫瘤[2]，而非小細胞肺癌是肺癌最為常見的腫瘤，它按組織學類型分為腺癌、鱗癌﹑大細胞未分化癌﹑鱗腺癌(較少見)。越來越多的數據顯示肺癌的發生發展不僅與外界環境、吸煙等因素相關[3]且重要的是與自身基因因素即原癌基因的過度激活和(或)抑癌基因的失活等有著緊密的關系。

WISP-2又名-2/CCN5，是CCN家族在近年來發現的一個新成員，CCN家族間在基因及蛋白上有著相似的生物學功能即細胞的增殖、分化、遷移及黏附等過程[4]。因WISP-2在基因即核苷酸序列結構上因缺少C′末端的結構模塊并且僅含有半胱氨基酸28個，所以可編碼多種多樣重要的病理生理過程。研究顯示WISP-2在人及小鼠的不同組織類型中幾乎均有表達，說明WISP-2可能具有多功能的調控作用。且相關研究結果闡明了在某些癌組織中呈低表達，表現為抑癌基因，是腫瘤增殖的負性調節因子[5]。因此在某些腫瘤細胞中WISP-2的表達下調與腫瘤的進展有重要關系，WISP-2的缺失可能是導致腫瘤細胞增長失控的原因[6]。

FGFBP1即FGF-BP，是腫瘤細胞近年研究的熱點之一，可作為FGFs(成纖維細胞生長因子)的載體蛋白而發揮其生物學功能且有著密切的關系。劉愛環等證實FGFs在細胞的生理與生物學過程中發揮著重要的功能及在腫瘤的生長過程中也起著特別重要的調節作用[7]，因此此推測FGFBP1的表達與腫瘤的發生發展有著緊密的關系，且相關研究結果闡明了[8]在某些癌組織中呈高表達，具有中致癌基因，是腫瘤增殖的正性調節因子。

本實驗應用IHC-P的原理，組織標本采用石蠟切片，以利于染色及對照觀察，結果顯示：在NSCLC中WISP-2陽性表達率明顯低于對照組的陽性表達率 ，而FGFBP1則相反，說明WISP-2呈低表達而FGFBP1則相反。國外學者JiHyangKim[9]等利用DNA芯片研究膽囊癌的差異基因結果證實了差異基因的分類涉及細胞周期蛋白、細胞增殖(FGFBP1)、細胞黏附(WISP-2)等，其中FGFBP1屬于上調基因，WISP-2屬于下調基因，同時楊智[10]利用PT-PCR及Westernblot對膽囊癌研究證實了兩因子表達呈負相關性，符合本實驗研究的結果。WISP-2與FGFBP1臨床參數的表達中顯示WISP-2在高分化的腺癌，臨床Ⅰ-Ⅱ期伴有淋巴轉移的病例中明顯增高，而FGFBP1在低分化的鱗癌，臨床Ⅲa期伴有淋巴轉移的病例中明顯增高，且兩者吸煙的陽性表達率明顯相反，有相關研究結果顯示FGFBP1的表達具有組織特異性，在大多數不同來源的鱗癌細胞株及頭頸部的鱗癌患者的組織中均有表達，而在正常成熟的組織中幾乎未見表達[11]。而本實驗所有結果同時證實了以上相關的研究結果。總而言之，本次實驗研究證明了NSCLC中WISP-2呈低表達而FGFBP1則相反，兩者呈負相關，且WISP-2與FGFBP1在年齡及性別的陽性表達無相關性而在其他臨床參數之間關系密切，提示我們WISP-2與FGFBP1可能能夠作為非小細胞肺癌臨床診斷及治療中的新靶點。

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Expressions of WISP-2 and FGFBP1 in non-small cell lung cancer

YANHong-e,QINYue,BAOWen-hua,SUNYun-hui

(Respiratory Department of Internal Medicine, the First Affiliated Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154003, China)

Objective: To investigate the expression of WISP-2 1 and FGFBP1 in NSCLC (non-small cell lung cancer); and to analyze the relationship between them and their relationship with NSCLC patients in relevant clinical parameters. Methods: 40 NSCLC patients with heart surgery resection of thoracic operation of the First Affiliated Hospital of Jiamusi University from 2013 December -2014 year in May were selected. The cancer tissue specimens and 5cm away from the tumor tissue specimens of 40 cases were chosen as control group. All patients didn’t apply chemotherapy, hormone and other anti-cancer treatment before operation. Results: ①The positive expression of WISP-2 in non small cell lung cancer rates in 25 cases (62.5%) was significantly lower than that of normal tissues in 33 cases (82.5%). The positive expression of FGFBP1 in non small cell lung cancer rates in 30 cases (75%) was significantly higher than that of the positive expression rate of normal tissues in 12 cases (30%). The Difference between these two groups in positive rate were statistically significant(P<0.05). ②Therewere13casesWISP-2 (+)FGFBP1 (+), 12casesWISP-2 (-)FGFBP1 (+)，13casesWISP-2 (+)FGFBP1 (-), 2casesWISP-2 (-)FGFBP1 (-).Theexpressionsofthetwofactorwerenegativelycorrelated,withsignificantdifference(χ2=4.95,P<0.05). ③WISP-2andFGFBP1hadnostatisticalsignificanceinageandsex(P>0.05).Otherclinicalparameterswerestatisticallysignificant(P<0.05). Conclusion: In NSCLC, the expression of WISP-2 is low, but FGFBP1 is on the contrary. They were negatively correlated. The positive expressions of WISP-2 and FGFBP1 in age and sex were irrelevant, but are closely related among other clinical parameters, which can be used as reference index for clinical diagnosis, also can provide new ideas for clinical treatment.

WISP-2；FGFBP1; non small cell lung cancer

閻紅餓(1956～)女，黑龍江佳木斯人，學士，主任醫師，碩士研究生導師，主要研究方向：肺癌的分子發病機制。

秦越(1986～)女，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生。E-mail：qinyue0416@163.com。

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1008-0104(2015)02-0099-03

2014-11-18)