艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的治療及炎性細(xì)胞因子表達(dá)影響①

顏 玉，任秀英，鮑秀琦，姜 威，羅 蘭，鄭 強(qiáng)，王 雪，薛 勇

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化一科，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的治療及炎性細(xì)胞因子表達(dá)影響①

顏 玉1，任秀英1，鮑秀琦1，姜 威1，羅 蘭1，鄭 強(qiáng)1，王 雪1，薛 勇2

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化一科，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：觀察艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸組織中白細(xì)胞介素-8(IL-8)與腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達(dá)情況及結(jié)腸粘膜病理學(xué)檢查比較。方法：清潔級健康Wistar大鼠60只隨機(jī)分為Ⅰ(對照組)、Ⅱ(模型組)、Ⅲ(艾迪莎組)、Ⅳ(益生菌膠囊組)、Ⅴ(艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊組)，每組12只。將60只清潔級健康Wistar大鼠在48h內(nèi)禁食不禁水，然后將其麻醉，麻醉藥用乙醚，其中將Ⅰ(對照組)組大鼠用2mL生理鹽水進(jìn)行灌腸，其余各組用5%乙酸1.0mL灌腸制備潰瘍性結(jié)腸炎的模型。應(yīng)用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附法和雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法觀察各組大鼠腸組織中IL-8和TNF-α的表達(dá)情況。結(jié)果：①大鼠各個治療組IL-8、TNF-α表達(dá)均低于模型組，差異性顯著(P<0.05)。②聯(lián)合用藥組與艾迪莎組和益生菌膠囊組相比差異性顯著(P<0.05)，與對照組相比差異性不顯著(P>0.05)，表明聯(lián)合用藥治療效果好于單獨(dú)用藥。③益生菌膠囊組與艾迪莎組相比IL-8和TNF-α表達(dá)差異性不顯(P>0.05)，表明治療效果相當(dāng)。結(jié)論：說明益生菌膠囊和艾迪莎均有抑制IL-8和TNF-α活性抗炎治療作用, 聯(lián)合用藥有更佳效果。

艾迪莎；益生菌膠囊；潰瘍性結(jié)腸炎；細(xì)胞因子

潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerativecolitis，UC)是炎癥性腸病(Inflammatoryboweldisease，IBD)中的一種，潰瘍性結(jié)腸炎在結(jié)腸黏膜與黏膜下層發(fā)病，乙狀結(jié)腸及直腸多病變，還可以延至降結(jié)腸甚至全結(jié)腸，潰瘍性結(jié)腸炎病程非常漫長且反復(fù)發(fā)作[1]。目前潰瘍性結(jié)腸炎病因不明，認(rèn)為主要是遺傳與環(huán)境及細(xì)菌協(xié)同作用，而腸道細(xì)菌是引起潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病主要原因[2]。本研究通過觀察艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠治療和白細(xì)胞介素-8(IL-8)與腫瘤壞死因子-α(TNF-α)變化，探討艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊治療潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠效果和細(xì)胞因子變化。

1 材料與方法

1.1 試驗動物模型的制備

選用清潔級健康Wistar大鼠60只，體重(200±20)g，雌雄各30只，由佳木斯大學(xué)動物實驗中心提供,隨機(jī)將60只大鼠分為5組，其中Ⅰ(對照組)、Ⅱ(模型組)、Ⅲ(艾迪莎組)、Ⅳ(益生菌膠囊組)、Ⅴ(艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊組)，每組12只。試驗Wistar大鼠全部48h禁食不禁水，然后用乙醚進(jìn)行麻醉，Ⅰ組(對照組)大鼠用2mL生理鹽水進(jìn)行灌腸，其余4組實驗組用5%乙酸1.0mL灌腸。Ⅰ(對照組)和Ⅱ(模型組)試驗大鼠48h后用生理鹽水2mL/d灌胃；Ⅲ(艾迪莎組)用艾迪莎溶液2.5mL灌胃1次/d濃度0.5g/kg體重；Ⅳ(益生菌膠囊組)用益生菌膠囊溶液2.5mL灌胃1次/d濃度12.5g/kg體重；Ⅴ(艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊組)用相同濃度艾迪莎和益生菌膠囊溶液灌胃1次/d，正常喂養(yǎng)7d后禁食24h，將試驗大鼠抽取血清后處死，剖開大鼠腹部選取結(jié)腸部分病變最嚴(yán)重部位作為標(biāo)本，置入福爾馬林溶液中固定待檢。

1.2 白細(xì)胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)檢測

雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附法檢測白細(xì)胞介素-8(IL-8)，樣品收集：血清和紅細(xì)胞分離→取血漿→取細(xì)胞上清液(去除顆粒和聚合物)→組織勻漿→保存，大鼠白細(xì)胞介素8(IL-8)ELISA檢測試劑盒按說明書進(jìn)行，實驗中使用ELISA檢測試劑盒購自上海逸峰生物科技有限公司。雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，試劑盒定量檢測大鼠血清或血漿中TNF-a濃度操作步驟嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，實驗中使用大鼠TNF-aELISA試劑盒檢測試劑盒購自上海富眾生物科技發(fā)展有限公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 大鼠Ⅰ(對照組)、Ⅱ(模型組)、Ⅲ(艾迪莎組)、Ⅳ(益生菌膠囊組)、Ⅴ(艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊組)五組一般狀況

大鼠Ⅰ(對照組)、Ⅱ(模型組)、Ⅲ(艾迪莎組)、Ⅳ(益生菌膠囊組)、Ⅴ(艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊組)五組一般狀況，見表1。

2.2 白細(xì)胞介素-8(IL-8)與腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平變化

大鼠Ⅰ(對照組)、Ⅱ(模型組)、Ⅲ(艾迪莎組)、Ⅳ(益生菌膠囊組)、Ⅴ(艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊組)五組大鼠白細(xì)胞介素-8(IL-8)與腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平變化，見表2。

表1 五組大鼠一般狀況比較

表2 五組大鼠IL-8及TNF-α的變化

注：與正常組比較△P<0.05；與模型組比較☆P<0.05。

①3個治療組IL-8、TNF-α表達(dá)均低于模型組，差異性顯著(P<0.05)，說明艾迪莎、益生菌膠囊及聯(lián)合用藥IL-8和TNF-α表達(dá)均有效降低。②聯(lián)合用藥組與艾迪莎組和益生菌膠囊組相比差異性顯著(P<0.05)，與對照組相比差異性不顯著(P>0.05)，表明聯(lián)合用藥治療效果好于單獨(dú)用藥。③益生菌膠囊組與艾迪莎組相比IL-8和TNF-α表達(dá)差異性不顯著(P>0.05)，表明治療效果相當(dāng)。

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerativecolitis，UC) 發(fā)病機(jī)制主要由免疫反應(yīng)介導(dǎo)引起是目前普遍認(rèn)可的原因，認(rèn)為主要是遺傳與環(huán)境及細(xì)菌協(xié)同作用，而腸道細(xì)菌是引起潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病主要原因。潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerativecolitis，UC)中細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-8(IL-8)與腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的功能主要表現(xiàn)在對中性粒細(xì)胞有細(xì)胞趨化作用與很強(qiáng)的促血管生成作用而實現(xiàn)其對炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。此次實驗研究發(fā)現(xiàn)患了潰瘍性結(jié)腸炎的試驗大鼠體內(nèi)的IL-8及TNF-α表達(dá)顯著增加，與對照組相比較具有顯著性差異(P<0.05)，這就表明IL-8可以引起腸道炎癥，多年來在潰瘍性結(jié)腸炎研究過程中，研究人員已經(jīng)注意到腸道菌群在發(fā)病中的重要作用。因此腸道黏膜的共生菌群的改變也將備受廣大醫(yī)務(wù)人員的重視，甚至有一些學(xué)者大膽地提出臨床用藥可以用益生菌及其產(chǎn)物來治療潰瘍性結(jié)腸炎。 本實驗結(jié)果論證了試驗大鼠應(yīng)用益生菌膠囊后，大鼠的一般狀況發(fā)生了明顯的改變，試驗大鼠的腸黏膜發(fā)生的炎癥水腫與充血及潰瘍得到了顯著的減輕，大鼠體內(nèi)的IL-8及血清中TNF-α表達(dá)減少明顯，與對照組大鼠比較具有性顯著差異(P<0.05)，經(jīng)艾迪莎聯(lián)合益生菌膠囊用藥治療后，試驗大鼠腹瀉癥狀改善明顯，腸黏膜病理損害減輕明顯，腸黏膜IL-8及血清中TNF-α表達(dá)減少明顯，與對照組相比差異性不顯著，說明益生菌膠囊和艾迪莎對潰瘍性結(jié)腸炎治療均有效，聯(lián)合用藥有更佳效果。

[1]姜威，顏玉，鄭強(qiáng)，等. 潰瘍性結(jié)腸炎Toll樣受體表達(dá)和NF-κB變化及益生菌的作用研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2013，36(5)：34-35

[2]顏玉，鄭強(qiáng)，姜威，等.潰瘍性結(jié)腸炎大鼠NF-B及TNF-α的變化及益生菌的作用研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2012，35(6)：5-6

[3]劉卓勛，顏玉，薛宇，等.貝飛達(dá)聯(lián)合美沙拉嗪對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠IL-10表達(dá)的影響[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2012，35(1)：38-39

[4]薛宇，顏玉. 益生菌對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎作用的實驗研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2011，34(5)：7-8

[6]姜威，顏玉. 生長抑素對重癥胰腺炎的療效及TNF-α的影響[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，49(8)：34-36

[7]羅南，顏玉. 美沙拉嗪對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎NF-κB和TGF-β表達(dá)和影響[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2010，33(4)：11-12

[8]姜威，任秀英，顏玉，等. 潰瘍性結(jié)腸炎的藥物灌腸的臨床療效觀察 [J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2005，28(3)：113-113

佳木斯大學(xué)科學(xué)技術(shù)重點(diǎn)課題，編號：Sjz2012-15。

顏玉(1963～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師。

薛勇(1962～)男，黑龍江佳木斯人，學(xué)士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:hljxueyong@163.com。

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1008-0104(2015)02-0056-02

2014-12-02)