探討EDTA-K對雙抗原夾心ELISA檢測HIV抗體的影響

冷亞玲

(四川省涼山州昭覺縣疾病預防控制中心 四川 昭覺 616150)

探討EDTA-K對雙抗原夾心ELISA檢測HIV抗體的影響

冷亞玲

(四川省涼山州昭覺縣疾病預防控制中心 四川 昭覺 616150)

目的：探討乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K)對雙抗原夾心ELISA檢測人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體的影響。方法：采取HIV抗體的陰性及陽性這兩種靜脈血，分別制成EDTA-K濃度是1.5、2.5、5、10、15、20、25、30mg/mL的抗凝血，同時留存無抗凝劑血，把血漿與血清進行分離，對不同樣本中的HIV抗體進行測定，然后對吸光度(A)值進行讀取，分析A值和EDTA-K的濃度;再分別配成EDTA-K濃度是1.5、2.5、5、10mg/mL的HIV抗體，陽性與陰性的抗凝血各為18份，同樣留存無抗凝劑血，對血漿與血清給予分離，對各個樣本的HIV抗體進行平行測定，配對t檢驗血漿與血清的樣本。結果：EDTA-K的濃度與HIV病毒抗體中的陰性樣本A值沒有關聯性(P=0.932)，與HIV抗體中的陽性樣本A值有顯著的負相關;且當EDTA-K的濃度為≥5mg/mL時，HIV病毒抗體的陽性血漿樣本A值比血清樣本更低，比較有差異具有統計學意義(P＜0.05)當EDTA-K2濃度為≤2.5mg/mL時，血漿和血清樣本的A值沒有差異，比較沒有統計學意義(P＞0.05)。結論：EDTA-K不會干擾到HIV病毒抗體中的陰性樣本檢測;當EDTA-K≤2.5mg/mL時，不會干擾到HIV病毒抗體中的陽性樣本檢測;當EDTA-K≥5mg/mL時，會有顯著的副干擾作用于HIV病毒抗體中的陽性樣本檢測。

EDTA-K;原夾心ELISA;HIV抗體

ELISA屬于HIV病毒抗體中的用于診斷的第三代試劑，其敏感度高，具有強烈的特異性和良好的重復性，在HIV病毒抗體的初階篩選測驗中以及對獻血人員的血液進行篩查的試驗中得到了廣泛應用，血漿或血清都可以作為HIV抗體的測驗樣本［1］。值得注意的是，抗凝劑對于脫離人體的血液樣本來說，其屬于外源物質，會對物質本身或者在實驗過程中都可能出現許多的影響因素，從而影響了測驗結果的真實可靠性［2］。本文主要就EDTA-K對雙抗原夾心ELISA檢測HIV病毒抗體的影響進行分析，現作報道如下∶

1.材料與方法

1.1 材料分析

(1)HIV病毒抗體中的陰性樣本采自于某公司身體健康的體檢者; HIV病毒抗體中的強陽性樣本為一份，選自于某疾病預控中心。通過權威的疾病預控中心相關實驗室對HIV病毒抗體進行確認后，在溫度為56℃的條件下，持續30min給予滅活處理。

(2)試劑以及儀器分析∶雙抗原夾心法的診斷試劑和HIV病毒抗體的質控血清選自于蘭德克斯診斷器材(昆山)有限公司;Reader 2010型酶標儀由ANTHOS LABTEC INSTRUMENTS生產;DHP-9270B型電熱恒溫培養箱由上?，槴\實驗設備有限公司生產;DNX-9620型自動洗板機由北京普朗新技術有限公司生產。

1.2 方法

(1)EDTA-K的濃度和HIV病毒抗體的吸光度(A)值關聯性測驗∶收集4份HIV病毒抗體的陰性靜脈血液。其中，選取3份并添加不同容量的HIV病毒抗體的強陽性血清，確?；旌暇鶆?，制成3份程度不一的HIV病毒抗體的陽性樣本，A值分別為A值≥2.3、1.0≤A值＜2.3以及0.5≤A值＜1.0。此外，根據不同的比例把4份樣本分別添加到8支EDTA-K2的干粉抗凝管內。每組血液樣本中的EDTA-K的最后濃度分別是1.5、2.5、5、10、15、20、25、30mg/mL，并留存血清樣本作為對比，從而測驗4組的血漿以及血清樣本中的HIV病毒抗體。

(2)EDTA-K的抗凝血漿和血清樣本對比測驗分析∶收集HIV病毒抗體中的陰性靜脈血液50份。其中，分別選取25份添加不同容量的HIV病毒抗體的強陽性血清，并混合均勻，制成A值相異HIV病毒抗體的陽性樣本。根據不同的比例分別把50份樣本添加到4支EDTA-K的干粉抗凝管內，同時混合均勻，分別確保EDTA-K的最后濃度是1.5、2.5、5、 10mg/mL，注意留存血清樣本作為對比，對每組血漿與血清樣本中的HIV病毒抗體進行平行測定。

1.3 診斷標準

雙抗原夾心ELISA法，根據HIV病毒抗體診斷的試劑盒以及儀器的使用說明書進行嚴格操作。當波長是450nm時、參考波長是630nm，A值讀取。利用A值/臨界值(S/CO)對結果進行判斷，當S/CO≥1時為陽性;當S/CO＜1時屬于陰性。

1.4 統計學方法

所有數據均用SPSS18.0進行統計分析和處理，其中，一般資料采用標準差(ˉ±s)表示，計數資料比較采用X2檢驗，且當P＜0.05時，表示比較差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 EDTA-K濃度和HIV病毒抗體樣本的A值關聯性分析

通過對EDTA-K濃度、HIV病毒抗體A值這兩者之間關聯性的研究發現，二者沒有出現關聯性(r=-0.02，P=0.932)。

2.2 EDTA-K抗凝血漿和血清樣本中的HIV病毒抗體測驗結果分析

當EDTA-K的濃度為≤2.5mg/mL時，HIV病毒抗體的陽性血漿和血清A值無明顯差異，沒有統計學意義(P＞0.05)。當EDTA-K的濃度為≥5mg/mL時，HIV病毒抗體的陽性血漿樣本A值和血清樣本比較有明顯的差異，比較具有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 EDTA-K的抗凝血漿和血清樣本測驗HIV病毒抗體的A值對照(±s)

表1 EDTA-K的抗凝血漿和血清樣本測驗HIV病毒抗體的A值對照(±s)

注∶和血清樣本相比，*P＜0.05

樣本 HIV抗體陰性 HIV 0.0056±0.0026 1.286±0.652血漿(EDTA-K) 1.5mg/mL 0.0059±0.0038 1.307±0.636 2.5mg/mL 0.0054±0.0021 1.266±0.627 5mg/mL 0.0061±0.0030 1.111±0.593*10mg/mL 0.0055±0.0032 0.962±0.542抗體陽性血清*

3.討論

臨床實驗室要想獲得ELISA檢測結果的準確穩定性，檢驗人員必須充分考慮影響ELISA的各種因素，其中比較重要又容易被忽視的因素是抗凝劑。正確使用抗凝劑關系到檢驗結果的準確有效性，實驗人員對血液樣本進行科學正確的選擇，并對抗凝劑進行規范化使用，從而提高實驗質量。

本次研究顯示，當抗凝劑采用EDTA-K時，抗凝劑配制的最佳濃度應該在1.5～2.5mg/mL范圍內。其中，當濃度為1.4～1.6mg/mL時，屬于血細胞在分析過程中使用的抗凝劑具有的濃度。因此，針對靜脈血采集容量不足的患者，可以根據血細胞的分析樣本來測驗HIV病毒抗體。值得注意的是，隨著抗凝劑的比例增加，不僅會嚴重干擾到HIV病毒抗體的測驗，而且還會對血細胞的分析造成影響，導致粒細胞變性，單核細胞以及淋巴細胞的形態產生變化。

綜上所述，不同濃度的EDTA-K抗凝血漿會對HIV病毒抗體檢測產生不同的影響。因此，當實驗室的檢測樣本為抗凝血漿時，應該把其和血清樣本進行比較測驗。同時，生產廠家應該嚴格控制質量，確?？鼓齽┖蜐舛鹊恼鎸嵖煽啃?。

［1］張桂芳，孫永鋒，張向峰，等.EDTA-K2對雙抗原夾心ELISA檢測HIV抗體的影響［J］.檢驗醫學，2012，27(8)：676-678.

［2］楊梅，王卓婭，郝衛，等.雙抗原夾心ELISA法檢測煙曲霉Afmp1cr/ Afmp2cr抗體［J］.南方醫科大學學報，2014，34(5)：646-650.

R446.62

B

1009-6019(2015)10-0051-02