Determ ination of Levam isole Hydrochloride in Levam isole Hydrochloride Powder by HPLC

Determ ination of Levam isole Hydrochloride in Levam isole Hydrochloride Powder by HPLC

Themethod for determination of levamisole hydrochloride in levamisole hydrochloride powder by HPLC was developed.The analyte was separated on C18 chromatographic column using a mobile phase of potassium dihydrogen phosphate（0.05 mol／L，pH value adjusted to 7.0 with triethylamine）－acetonitrile（80∶20），and detected at the wavelength of 214 nm.Themethod was validated for specificity，accuracy，linearity，precision and robustness.The results showed that a good linear relationship was accepted in the range of 0.1～2.0 mg／mL（R2＝0.9995），and the average recovery was 101.3%（n＝6），and the RSD value was 0.6%.Thismethod was suited to control the quality of levamisole hydrochloride powder.

levamisole hydrochloride powder；levamisole hydrochloride；HPLC

鹽酸左旋咪唑為廣譜驅蟲藥，對牛、羊、豬、犬和雞的大多數胃腸道線蟲具有良好驅蟲活性。獸藥中有鹽酸左旋咪唑片、鹽酸左旋咪唑注射液和鹽酸左旋咪唑粉等不同劑型，其中鹽酸左旋咪唑粉收載于《獸藥國家標準匯編—獸藥地方標準上升國家標準》第二冊［1］。標準中采用三氯甲烷萃取、高氯酸滴定法進行含量測定。檢測中試劑三氯甲烷對人體有危害，對環境污染也較嚴重，且操作步驟較繁瑣；同時高氯酸滴定液能與多種藥物反應，專屬性不高。目前相關文獻［2－6］報道測定鹽酸左旋咪唑含量的方法除高氯酸滴定法外，還有紫外分光光度法和高效液相色譜法。其中紫外分光光度法也易受其他藥物的影響，專屬性較差。劉素梅等［2］、曾建亭等［3］和陸興毅［6］分別報道采用HPLC法測定萬乳康、鹽酸左旋咪唑片和鹽酸左旋咪唑糖漿等制劑中鹽酸左旋咪唑的含量，但目前尚未有高效液相法測定鹽酸左旋咪唑粉中鹽酸左旋咪唑含量的報道。

本研究采用高效液相色潽法測定鹽酸左旋咪唑粉中鹽酸左旋咪唑的含量，試驗結果表明其方法簡便、準確可靠、重現性好，能夠有效的控制該產品的質量。

1 儀器和試藥

1.1 儀器與設備 Waters e2695高效液相色譜儀，配紫外檢測器；METILER XP205電子天平。

1.2 試藥及試劑 鹽酸左旋咪唑對照品純度為99.9%，批號100167－201203，購于中國食品藥品檢定研究院；鹽酸左旋咪唑粉（規格：5%）為市場購買；乙腈為色譜純試劑，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 檢測波長的選擇 精密稱取鹽酸左旋咪唑對照品適量，用水稀釋制成每1 mL含5μg的溶液，在200～300 nm波長范圍內進行光譜掃描，得出214 nm為鹽酸左旋咪唑最大吸收波長，所以選擇214 nm作為該方法的測定波長。結果見圖1。

圖1 鹽酸左旋咪唑的紫外光譜圖

2.2 色譜條件 Waters X－Bridge C18（5μm，4.6 mm×150 mm）色譜柱，流動相為0.05 mol／L磷酸二氫鉀（用三乙胺調節pH值為7）－乙腈（80∶20）；流速為1.0 mL／min；檢測波長為214 nm；柱溫為室溫；進樣量為10μL。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸左旋咪唑對照品100 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解稀釋至刻度，搖勻，配制成2 mg／mL的儲備液。精密量取適量，用水稀釋成0.5 mg／mL的對照品溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取樣品適量（約相當于鹽酸左旋咪唑50mg），置100mL量瓶中，用水溶解稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 陰性對照溶液的制備 取按照處方比例制備的不含鹽酸左旋咪唑的陰性樣品，按2.3.2項下方法制成陰性樣品溶液。

2.4 線性關系考察 取2.3.1項對照品儲備液，用水稀釋成濃度為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg／m L的系列對照品溶液，按2.1項下方法測定，記錄色譜圖，以對照品溶液濃度為橫坐標，相對對應的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程為：Y＝23598708X＋634363，相關系數R2＝0.9995，即在0.1～2.0 mg／mL范圍內，鹽酸左旋咪唑濃度與峰面積呈現良好的線性關系。結果見圖2。

圖2 鹽酸左旋咪唑標準曲線圖

2.5 專屬性 取對照品溶液、陰性對照溶液，按2.1項下方法測定，記錄色譜圖，結果表明陰性無干擾，結果見圖3、圖4。

圖3 鹽酸左旋咪唑對照（0.5mg／m L）色譜圖

圖4 陰性樣品色譜圖

2.6 耐用性

2.6.1 不同品牌和型號的色譜柱 分別選用Agilent ZORBAX SB－C18（5μm，3.0mm×250mm）、Agela Venusil MP C18（5μm，4.6 mm×250 mm）、Waters X－Bridge C18（5μm，4.6 mm×150 mm），按2.1項下方法測定，記錄色譜圖，結果見表1。

表1 耐用性試驗結果表（不同色譜柱）

2.6.2 不同比例流動相 流動相0.05mol／L磷酸二氫鉀（用三乙胺調節pH值為7.0）－乙腈分別以不同比例，按2.1項下方法測定，記錄色譜圖，結果見表2。

表2 耐用性試驗結果表（不同比例流動相）

2.6.3 不同pH值 將流動相0.05 mol／L磷酸二氫鉀－乙腈（80∶20）分別用三乙胺調節0.05 mol／L磷酸二氫鉀的pH值為6.8、7.0、7.2，按2.1項下方法測定，記錄色譜圖，結果見表3。

表3 耐用性試驗結果表（流動相不同pH值）

結果表明，分別在不同品牌和型號色譜柱、不同比例流動相和不同pH值流動相的條件下，各試驗結果雖略有不同，但均能滿足試驗需要。

2.7 準確度與精密度 取同一批號已知含量的鹽酸左旋咪唑粉（47.58 mg／g）0.5 g，精密稱定，共6份，分別加入鹽酸左旋咪唑對照品適量，按2.3.2項下方法處理樣品后，記錄色譜圖，外標法以峰面積計算鹽酸左旋咪唑的含量，結果表明，該方法回收率高，且重復性好。結果見表4。

表4 回收率試驗結果表

2.8 穩定性 取精密度試驗項下的一個樣品溶液，分別在0、2、4、8、12 h按2.1項下方法測定，記錄色譜圖，考察樣品配制溶液的穩定性，結果表明樣品溶液在12 h內穩定。結果見表5。

表5 穩定性試驗結果表

2.9 樣品測定 取5批樣品，按2.3.2項下方法處理樣品后，按2.1項下方法測定，記錄色譜圖，外標法以峰面積計算鹽酸左旋咪唑的含量，并將結果與非水滴定法測定結果比較，結果表明，兩種方法測定結果基本一致。結果見表6。

表6 樣品測定結果表（標示量／%，n＝5）

3 討論與小結

原標準規定的高氯酸滴定法，要求試驗條件比較苛刻，滴定時必須在非水條件下進行。試驗中需用三氯甲烷進行萃取，不但操作繁瑣而且該試劑毒性大，同時萃取時間不同，力度不同，對試驗結果均有一定的影響。弱堿性物質及鹽類也均可以與高氯酸反應，所以專屬性不高。在高氯酸滴定法檢測過程中還發現，該方法對輔料要求也很嚴格。當使用淀粉為輔料時，樣品加水溶解再加入氫氧化鈉試液后，短時間內就易產生糊化現象，使三氯甲烷不能完全萃取而影響含量測定的結果。

本研究采用水為溶劑，不但減少了有毒試劑的使用，操作簡便，專屬性強，而且也不受常用輔料的影響。試驗結果顯示高效液相色譜法與高氯酸滴定法相比，測定結果基本一致，并且方法簡便、準確可靠、重現性好。高效液相色譜法可以用于鹽酸左旋咪唑粉中鹽酸左旋咪唑的含量測定。

［1］ 獸藥國家標準匯編—獸藥地方標準上升國家標準第二冊［S］.

［2］ 劉素梅，李華岑，韓立，等.萬乳康中鹽酸左旋咪唑含量測定方法的研究［J］.中國獸藥雜志，2010，44（2）：26－28.

［3］ 曾建亭，鐘小燕.HPLC法測定鹽酸左旋咪唑片的含量及溶出度［J］.中國熱帶醫學，2010，10（5）：628－629.

［4］ 徐燦輝，何維為.高效液相色譜法測定鹽酸左旋咪唑片的含量［J］.藥物鑒定，2007，16（7）：12－13.

［5］ 王勇忠.高效液相色譜法測定鹽酸左旋咪唑搽劑的含量［J］.海峽藥學，2007，19（12）：52－53.

［6］ 陸興毅.HPLC法測定鹽酸左旋咪唑糖漿的含量［J］.藥物分析雜志，2008，28（10）：1753－1754.

（編輯：侯向輝）

WANG Li1，LIU Su－mei1，ZANG He－ying1，ZHAO Chen－yu2，HAN Li1，QIU Tian－bao1
（1.Henan Province Institute of Veterinary Drug and Feed Control，Zhengzhou 450008，China；2.Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）