豬圓環病毒2型分子流行病學及疫苗研究進展

趙晨辰，王敏，劉長輝，牟巍，馬阿麗，馬惠宇，張家旺，趙亞榮，王貴華?

（1.北京大北農科技集團股份有限公司動物醫學研究中心，北京100195；2.北京大北農科技集團股份有限公司，北京100080）

豬圓環病毒2型分子流行病學及疫苗研究進展

趙晨辰1，王敏1，劉長輝1，牟巍1，馬阿麗1，馬惠宇1，張家旺2，趙亞榮1，王貴華1?

（1.北京大北農科技集團股份有限公司動物醫學研究中心，北京100195；2.北京大北農科技集團股份有限公司，北京100080）

豬圓環病毒2型（PCV2）在世界范圍內廣泛分布，主要以PCV2a和PCV2b兩種基因型為主，PCV2b亞型為當前流行基因型。現有商品化疫苗主要針對PCV2a型病毒，也可對PCV2b型病毒產生部分交叉保護，但不能顯著控制PCV2b型病毒在豬群中的傳播。除此之外，由于已有的商品化疫苗以傳統疫苗為主，存在種毒增殖難、疫苗生產周期長等缺點。因此，研發PCV2b新型疫苗可能成為未來PCV2疫苗研制的主要方向。對PCV2的分子流行病學及疫苗研究現狀進行了綜述，以期為PCV2疫苗的研究提供參考。

豬圓環病毒2型；分子流行病學；PCV2b；基因型；疫苗

豬圓環病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）是近年新發現的豬病毒之一，廣泛存在于自然界中，對豬有很強的感染力，各種品種、年齡、不同性別的豬均可感染。PCV2主要侵害豬的免疫系統，降低機體的抵抗力和免疫應答反應，導致被感染豬產生免疫抑制和其它病原微生物的繼發感染。該病毒與豬群中發生的許多疾病關系密切，這些相關疾病統稱為豬圓環病毒相關疾病（PCVAD）。斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）是最早被認識和確認的由PCV2感染所致的疾病，該病于1991年被正式確診，90年代后期在全世界爆發為流行病，美洲、歐洲、亞洲、澳大利亞等均大量報道了該病的發生和流行。目前，國際上統一將PCV2分為PCV2a、PCV2b、PCV2c三個基因亞型，其中PCV2a和PCV2b是目前存在的主要基因型，PCV2a僅分離自無PMWS感染豬場，PCV2b多分離自PMWS發生的豬群，PCV2c亞型毒株僅在20世紀80年代于丹麥分離，在致病性方面未見報道［1］。PCV2在世界范圍內廣泛分布并且在豬群中存在至少有50多年［2］，血清學和病原學調查己證實全世界范圍內許多國家和地區的豬群均存在PCV2感染，幾乎100%的商品化養豬場感染過PCV2，嚴重影響世界養豬業的發展。目前對該病毒的防控主要依靠疫苗，滅活疫苗、亞單位疫苗和嵌合病毒滅活疫苗已投入使用，核酸疫苗、活載體疫苗和標記疫苗等新型疫苗已成為PCV2疫苗研究的熱點。本文就PCV2流行病學、疫苗方面的研究進展進行了綜述。

1 流行病學

1.1 國外PCV2流行情況 2008年Olvera［3］對NCBI上發表的148株PCV2序列分析發現，63.5%的毒株（95／148）屬于基因型PCV2b，在95株PCV2b中有92.5%的毒株是在2003年之后發表的，其中所分析PCV2a型基因序列中，62.2%（33／53）是2003年以前發表的，但是序列提交的時間和毒株分離的時間并不是一致的。Dupont等［1］對GenBank中1997年至2006年間上傳的218個PCV2全基因組進行遺傳進化分析，結果發現2003年前豬群中主要流行PCV2a，之后世界范圍內豬群PCV2感染存在轉型趨勢，主要以PCV2b基因型流行為主，同時PCVAD臨床表現較2003年之前更為嚴重，但是這些國家不包括韓國、日本和澳大利亞。基于以上研究，Tanja Opriessnig等［4］分析了1996－2013年間分離自美國和加拿大的750份樣品，1996－2004年間分離到的毒株均屬于PCV2a基因型，2005年出現新基因型PCV2b，2006－2013年的流行株為PCV2b基因型。2012年5月，美國在一PCV2免疫失敗豬場首次分離到毒力均強于PCV2a和PCV2b的突變毒株（Mutant porcine circovirus type 2b，mPCV2b），由于美國商品化疫苗基于PCV2a基因型，mPCV2b毒株的發現讓人們更加關注當前PCV2a型疫苗的免疫效果［5］。北美地區在2004年前僅流行PCV2a基因型，2005年爆發嚴重的PCVAD，PCV2b基因型替代PCV2a型在北美地區商業化豬場迅速蔓延，引起高發病率和死亡率。隨后在中國、泰國、韓國、丹麥、瑞士也相繼報道了PCV2b基因型的出現，并在一段時間內與PCV2a基因型循環流行。韓國研究者對2005－2007年間分離的毒株進行遺傳進化分析，發現這期間PCV2b為主要流行基因型［6］。2007年Chae等［7］在韓國分離到36株PCV2（PCVAD發病豬場分離到29株，PCVAD未發病豬場9株），29株均屬于PCV2b，PCVAD未發病豬場中有4株屬于PCV2b。2006－2007年間，日本存在PCV2a與PCV2b兩種亞型，但是以PCV2b為主要流行基因型［8］。目前，PCV2b基因型替代PCV2a型成為優勢基因型，有關PCV2流行毒株遺傳變異的報道也逐漸增多，在遺傳變異及免疫壓力下可能出現其它形式的突變毒株。2008年Hess等［9］報道了PCV2a與PCV2b重組毒株，隨后有關不同PCV2b毒株之間以及PCV1與PCV2a之間毒株發生基因重組相繼報道。同時進一步研究發現，重組毒有很高的體外繁殖能力，且抗原性發生改變，這些改變對致病性的影響有待進一步研究。

PCV2基因型的漂移最早起源于歐洲，發生于2003年或更早時間，北美洲和亞洲約發生于2005年，大洋洲發生這種優勢流行株轉變約在2006年，時間上均比歐洲PCV2基因型的改變有輕微的推遲，潛在原因還未得到證實，可能與進口處于該病潛伏期的動物有關［10］。基因型發生漂移的同時伴隨著嚴重的圓環病毒病的爆發，雖然現有數據不能直接證明這些爆發是由PCV2b毒株導致，但是時間和地點上的巧合推測PCV2主導型的變化與PCVAD的發生存在很大關系，而基因型轉變的原因與機制目前尚不清楚。相對于PCV2遺傳變異，PCV2自然重組變異的報道比較少，其重組與病毒致病性和遺傳進化的關系尚不明確。

1.2 我國PCV2流行情況 自2000年豬圓環病毒病首次在我國報道以來［11］，除西藏、新疆、澳門未見報道外，其余各省、市、自治區均有PCV2病毒分離和發生感染的報道。Wang等［12］從全國分離到49株PCV2，其中2001年分離到3株均屬于PCV2a型，2002－2006年分離到34株PCV2中PCV2b有18株，2007－2008年間分離到12株均為PCV2b型。Li［13］對2001－2009年間分離自我國東部的136株PCV2進行遺傳進化分析發現，PCV2b有127株，PCV2a僅有9株，其中8株PCV2a分離自2001－2005年間，從2005年以后，幾乎所有的分離株都是PCV2b型，PCV2a型越來越少，中國東部地區PCV2流行毒株存在由PCV2a向PCV2b漂移的現象。王佳慧［14］利用PCR方法對中國16個省市75個規模化豬場2010－2011年間的688份樣品進行檢測，被檢豬場PCV2陽性率為58.67%，共分離到53株PCV2，與GenBank下載的192株中國分離株進行遺傳變異分析，結果發現，53株PCV2中PCV2b基因型有50株，且2001年前我國優勢PCV2基因型為PCV2a型，2002年之后流行的PCV2基因型轉變為PCV2b型，但同期仍有PCV2a型毒株存在。趙英杰［15］對2011－2012年間采集自我國18個省市932份樣品分析發現，2011－2012年我國主要養豬地區規模化豬場PCV2的感染率高達67.8%，并選取具有代表性的74株PCV2進行全基因組測序，其中56株PCV2b基因型。同一時期，Wei等［16］自我國南方14個商業化豬場分離到66株PCV2，其中92.42%的毒株屬于PCV2b基因型。流行病學調查顯示，我國優勢流行基因型為PCV2b。目前，國外有很多關于PCV2流行毒株的變異的報道，但是我國對此研究比較少。2011年Cai［17］分離到了5株PCV2a和PCV2b基因型間重組毒，重組位點均位于ORF2區段內。Guo［18］對2004－2008年采集自我國10個省份疑似PCV2感染的病料中分離到19株PCV2，有4株病毒ORF2編碼基因發生突變，同時選取了2株突變株進行致病性實驗，發現突變株所造成的病理損傷、病毒血癥、淋巴組織等免疫器官損傷明顯嚴重，新出現的突變株如何增強毒力的分子機制還需進一步研究。

PCV2在我國豬群中已經廣泛存在，主要有PCV2a和PCV2b兩種基因型，自2005以來主要以PCV2b基因型流行為主，同時出現mPCV2b毒株，未發現PCV2c基因型。

2 PCV2疫苗研究進展

目前，疫苗接種是預防PCV2感染最有效的手段。疫苗免疫能降低PCV2復制水平，減輕病毒血癥和淋巴組織損傷。通過對SPF豬和斷奶仔豬的感染實驗證實現有商品化疫苗能夠對PCV2a和 PCV2b產生免疫保護，但是都無法完全清除病毒，免疫豬仍然會感染PCV2［19］。美國科研人員曾經提取已免疫PCV2疫苗的健康豬血清，進行血清學檢測，PCV2b呈陽性。2010年Shen等［20］自美國中西部屠宰場的豬血漿樣品中檢測到高比例的PCV2b DNA。國外上市疫苗有滅活疫苗、Cap亞單位疫苗和PCV1－2嵌合病毒滅活疫苗，均基于PCV2a基因型，雖然PCV2a疫苗能降低豬臨床PCVAD，減少PCV2a的流行，但是不會顯著減少PCV2b在豬群中的傳播。日本研究者發現，PCV2疫苗的免疫效果與PCV2基因型有很大關系，流行毒株與疫苗株遺傳關系越近，疫苗產生的免疫保護效力越好。為了進一步證實這一發現，Tanja Opriessniga［21］用PCV2a型疫苗和PCV2b型疫苗分別免疫豬群，PCV2進行攻毒，檢測結果發現，PCV2b型疫苗可以抵抗PCV2b、PCV2a／PCV2b共感染提供更好的免疫保護。

國內上市疫苗屬于PCV2b型滅活疫苗，雖然與流行毒株屬于同一基因型，但是傳統滅活疫苗抗原制備上病毒滴度低，生產周期長，且誘導的免疫應答主要為體液免疫，忽視了細胞免疫應答在PCV2免疫保護中的作用。雖然商品化疫苗的應用為有效防控PCV2感染發揮了重要作用，但是疫苗株與流行株分屬不同基因型，且傳統疫苗在免疫保護效力和生產制備上存在缺陷。隨著基因工程技術的發展，基于PCV2b型的活載體疫苗、核酸疫苗及標記疫苗等新型疫苗也展現出良好的研究前景。2.1 商品化疫苗 目前有很多商品化疫苗用于預防PCVAD在豬群中的發生和流行（表1），法國Merial公司的PCV2a全病毒滅活疫苗Circovac＠最先開始推向市場，用于繁育母豬和三周齡以上仔豬。該疫苗能降低仔豬病毒血癥和各組織器官中病毒載量，是唯一一種既可用于母豬又用于仔豬的疫苗。2006年，Intervet公司研制第一支利用桿狀病毒表達PCV2a Cap蛋白的基因工程亞單位疫苗Circumvent＠在美國堪薩斯州的豬場進行了測試，與對照組比較，免疫組的豬群死亡率和病毒血癥明顯降低、體重增加。Pfizer公司（2010年動物保健部門更名為Zoetis，中文名為碩騰）FosteraTMPCV疫苗（原Fort Dodge公司的Suvaxyn＠PCV2 One DoseTM）以PCV1為骨架，用PCV2的ORF2替換PCV1的部分ORF2，構建了PCV1－2嵌合病毒疫苗。免疫后豬群的臨床癥狀明顯減輕，血液和淋巴組織中PCV2的病毒載量降低，免疫豬死亡率下降，在母源抗體存在的情況下也可以達到很好的保護效果。韓國DAE SUNG公司的DSCirco Pigvac PCV2可免疫1日齡仔豬，是目前上市的唯一一款能克服高滴度母源抗體干擾的全病毒滅活疫苗。

Boehringer－Ingelheim公司研制亞單位疫苗CircoFLEX?，擁有高度免疫原性純化抗原（PCATM）與創新佐劑ImpranFLEXTM，免疫機體后產生快速、高效和持久的免疫反應，安全、穩定，疫苗粘度小，易于注射，在國外應用效果顯著，應用量超過了其它幾家疫苗的總和，占市場份額60%以上，成為全球銷量最大的豬圓環病毒疫苗。基于ImpanFLEX?水性佐劑的豬肺炎支原體疫苗MycoFLEX?與豬圓環疫苗CircoFLEX?可以靈活的混合使用，兩種疫苗，一種佐劑，混合后一針免疫更輕松，在生產上節省大量免疫操作的勞動力，也減少了免疫操作對于豬只的應激，已經在全球多個國家注冊。疫苗的組合使用，將會成為未來疫苗應用發展趨勢。免疫一針，預防多種疾病，既能降低動物應激，又能減少免疫的工作量，降低免疫相關成本。碩騰公司最新研發的產品Fostera PCV MH是全球第一種也是唯一一種單瓶、單劑量的、用于防止豬圓環病毒相關疾病和豬肺炎支原體的二聯苗。

表1 國外PCV2商品化疫苗及其特征

Boehringer－Ingelheim公司的CircoFLEX?疫苗于2010年初獲中國農業部正式批準上市，國內企業研發的豬圓環疫苗在下半年陸續上市。截至2014年10月，國內有15家企業獲得PCV2全病毒滅活疫苗新獸藥證書，14家企業批準簽發，毒株包括LG株、SH株、DBN－SX07株、ZJ／C株、WH株（表2），其中豬圓環病毒2型滅活疫苗（DBNSX07株）由大北農集團動物醫學研究中心研制，是國內第一個完全由企業自主研發獲得三類新獸藥證書的產品。全病毒滅活疫苗最大的瓶頸在于如何獲得高滴度病毒液，早期上市的產品病毒含量比較低，而ZJ／C株最晚上市，抗原含量不低于107.3TCID50／mL，在國內同類產品中病毒含量最高。在佐劑選用方面，水質佐劑比礦物油佐劑疫苗對機體的刺激性小，副反應小，WH株、SH株和DBN－SX07株3種國產疫苗應用的佐劑含有一定量的礦物油，而LG株與ZJ／C株選用水質佐劑。豬圓環病毒最大的危害對象是保育豬，對于首免日齡來說，ZJ／C株與SH株可以做到2周齡首免，這在全病毒滅活疫苗中做到了最優。2013年11月6日，青島易邦舉辦“首屆中韓國際養豬及豬病防控高層論壇暨豬圓環病毒2型基因工程亞單位疫苗研發成功交流會”，其利用大腸桿菌表達PCV2 Cap蛋白，研發PCV2基因工程疫苗產品即將上市，是國內企業中唯一能生產豬圓環基因工程疫苗的廠家。

表2 國內PCV2商品化疫苗及其特征

2.2 實驗室研制疫苗 商品化的亞單位疫苗和滅活疫苗穩定，具有較好的安全性。但是新型疫苗能夠刺激機體產生更好的免疫應答，阻止PCV2的感染。現已經證實，RNA的治療方法能夠干擾PCV2的感染和復制。經過修飾的弱毒疫苗能夠刺激機體產生更高水平的細胞免疫應答和體液免疫應答。DNA疫苗和活載體疫苗也可作為替代系統向宿主傳遞PCV2抗原，刺激機體產生免疫應答。

2.2.1 RNA抗病毒治療 根據報道，利用RNA分子可以中和感染性PCV2或干擾PCV2的復制。RNA適配子，一種RNA分子能夠與靶物質高特異性、高親和力結合，在體外阻止PCV2的感染。小干擾RNA（siRNA）已經成功用于阻斷體外PCV1和PCV2核酸復制酶蛋白的表達，干擾病毒在細胞內復制［22］。短發夾RNA（shRNA）能夠減少PCV2在體外的復制，小鼠體試驗表明shRNA能夠減少PCV2病毒載量［23］。由于RNA分子在體內不能遺傳復制和昂貴的研究成本，RNA抗病毒療法對PCV2治療的臨床意義尚需進一步探索。

2.2.2 修飾的PCV2弱毒疫苗 通常情況下，弱毒疫苗刺激機體既能產生細胞免疫應答又能產生體液免疫應答，與滅活疫苗和亞單位疫苗相比能夠產生更好的免疫保護效果。野生型PCV2在細胞內連續培養傳代，病毒毒力減弱。將PCV2分離株在PK－15細胞中連續培養120代，第1代和第120代感染SPF豬比較發現，第120代感染后的病毒血癥發生率明顯低于第1代，并且感染豬血清中PCV2基因組拷貝數降低、眼觀及組織學病變明顯要輕，表明體外傳代可提高PCV2在細胞內的繁殖能力，并能減弱其致病力，這為研制PCV2弱毒疫苗提供了科學依據［24］。但是病毒存在毒力返祖的危險。

根據PCV1對豬不致病，PCV2具有致病性，將PCV1和PCV2 ORF2替換構建的嵌合病毒PCV1－2在體內外均具有感染性，豬體試驗表明嵌合病毒毒力致弱，具有免疫原性且能穩定遺傳，能對PCV2a和PCV2b兩種基因型提供較好的免疫保護［25］，完全排除了毒力返強的可能性。開發安全有效的弱毒嵌合病毒疫苗是PCV2疫苗研究的新方向。

2.2.3 DNA疫苗 有報道稱，用PCV2 DNA疫苗免疫豬和小鼠，能產生特異的免疫應答。將表達ORF2基因的質粒注射到豬肝臟、淋巴結和肌肉，均能夠產生類似于PCV2病毒的感染效果。Sylla等［26］成功構建表達Cap蛋白的重組質粒pEGFP－Cap，共分三次免疫BALB／c小鼠，結果發現小鼠血清中存在高水平的抗Cap蛋白特異性抗體IgG和細胞因子（IFN－γ和IL－10），攻毒實驗發現，pEGFP－Cap免疫組能夠抵抗PCV2的攻擊，PCV2病毒載量明顯減少，小鼠臨床癥狀和病理變化明顯減輕。關淼等［27］構建重組核酸疫苗pIRES－ORF2免疫小鼠，結果表明該疫苗能誘小鼠產生抗PCV2特異的體液免疫和細胞免疫，并且小鼠體內T淋巴細胞CD3＋、CD8＋亞類顯著高于滅活苗免疫組。豬肌肉注射嵌合型PCV1－2全基因組線性載體，能夠誘導免疫保護。因此，攜帶有嵌合型PCV1－2全基因組的質粒可以作為弱毒疫苗誘導豬體產生免疫應答，同時質粒相對容易擴大生產，降低疫苗的生產成本，展現出良好的研究前景。現已證實，肌肉注射編碼PCV2 Cap蛋白的重組DNA質粒能誘導小鼠和豬產生免疫應答。DNA疫苗已經應用于小鼠模型，研究者用基因槍將編碼PCV2 Cap蛋白的ORF2基因（pORF2）注射到小鼠體內，在小鼠血清中能檢測到Cap特異性抗體。在小鼠模型中，注射pORF2比單獨注射Cap蛋白更能有效的刺激機體產生PCV2中和抗體。攻毒保護實驗發現，與對照組相比，免疫過pORF2的小鼠體內PCV2病毒載量降低、臨床癥狀以及組織病變明顯減輕［28］。但是外源基因在體內的表達調控可能會產生意外的免疫病理反應，目前大部分核酸疫苗的研究還僅局限于實驗室。

2.2.4 活載體疫苗 目前商品化的亞單位疫苗是利用昆蟲桿狀病毒表達系統表達Cap蛋白，其它的表達系統正處于探索中。以酵母為載體表達PCV2 Cap蛋白的口服疫苗，免疫小鼠可以產生PCV2抗體［29］。利用重組腺病毒表達PCV2 Cap蛋白，可誘導免疫豬產生一定水平的抗體，用PCV2感染后，與未免疫豬相比，免疫豬體重增加，組織損傷程度減輕，病毒血癥的發生率明顯降低［30］。

表達PCV2衣殼蛋白的重組偽狂犬病毒活載體疫苗，免疫豬后可誘導體液免疫反應，機體產生抗PCV2和PRV的特異性抗體［31］。Kim等［32］向博德特氏菌中插入ORF2基因，構建表達ORF2基因的重組博德特氏菌，然后免疫小鼠和豬，發現血清中存在高水平的抗Cap蛋白特異性IgG抗體，有效保護豬群抵抗PCV2感染。Gamage等［33］將PCV2 Cap蛋白的四個表位序列展示在λ噬菌體顆粒上，構建表達PCV2 Cap蛋白的重組λ噬菌體載體疫苗，免疫豬能引發體內體液和細胞免疫應答，刺激產生特異性抗體。活載體疫苗能有效的刺激機體產生特異性免疫應答，并且沒有PCV2病毒感染的危險。但是，也存在潛在的擔憂：載體有可能會干擾疫苗的免疫效力，影響其臨床應用。

2.2.5 PCV2標記疫苗 PCV2的感染普遍存在于飼養豬群，因此存在不能區分疫苗抗體和野毒抗體的問題。標記疫苗帶有特定的抗原表位，免疫豬群后，可通過血清學方法檢測到疫苗抗體，在自然感染豬群中將免疫豬群區分開來。最近，Intervet公司生產的BacucheckTMELISA抗體檢測試劑盒可以檢測出Porcilis?PCV免疫過豬群體內抗體，已經在德國投入使用。然而，目前沒有類似的產品用于檢測其它商品化疫苗。PCV1－2嵌合病毒和表達特異性表位的重組病毒有望作為研制標記疫苗的候選疫苗株。Beach等［34］將HA、GLU和KT3標簽定向插入致弱的嵌合病毒PCV1－2 ORF2基因的C末端，感染豬后可以在血清中檢測到Cap特異的中和抗體和標簽蛋白抗體。Huang等［35］在PCV2 Cap蛋白的C末端插入了11個氨基酸，病毒仍具有感染性，用重組病毒免疫小鼠后能誘導產生中和抗體和抗標簽的特異性抗體。因此，帶標簽的PCV1－2嵌合病毒和重組毒PCV2可以作為標記疫苗候選毒株。

3 展望

商品化疫苗能夠有效減少PCV2感染引起的臨床癥狀，顯著降低病毒血癥、系統性疾病和病毒排泄，但是不能完全阻止PCV2的感染和傳播。國外上市疫苗有滅活疫苗、亞單位疫苗和PCV1－2嵌合病毒滅活疫苗，均基于PCV2a基因型，對PCV2的防控有一定的效果，但是PCV2b基因型是當前豬群中優勢基因型，與PCV2a型疫苗相比，PCV2b型疫苗可產生更好的免疫保護效力。國內上市疫苗屬于PCV2b型滅活疫苗，但是傳統滅活疫苗抗原制備上病毒滴度低，且誘導的免疫應答主要為體液免疫，忽視了細胞免疫應答在PCV2免疫保護中的作用。新型疫苗的研究已取得長足的進展，免疫試驗證明可誘導機體產生較高的中和抗體效價，保護豬群免受強毒的攻擊，但研制費用較高、有些效果不明顯是新型疫苗的缺點。亞單位疫苗抗原產量低、生產成本高，活載體疫苗存在外源基因污染的生物安全問題，核酸疫苗由于其重組誘變等危險限制了其進一步發展。隨著分子生物學技術和基因工程技術的不斷發展，各國學者在現有的研究基礎上對這些新型疫苗進行技術改進，以期克服新型疫苗研制中遇到的困難，研發安全、高效低廉的PCV2b新型基因工程疫苗已成為疫苗研制的主要方向。

［1］ Dupont K，Nielsen E O，Larsen，et al.Genomic analysis of PCV2 isolates from Danish archives and a current PMWS casecontrol study supports a shift in genotypes with time［J］.Vet Microbiol，2008，128（1／2）：56－64.

［2］ Rose N，Opriessnig T，Grasland B，et al.Epidemiology and transmission of porcine circovirus type 2（PCV2）［J］.Virus Res，2012，164（1／2）：78－89.

［3］ Olvera A，Cortey M，Segalés J.Molecular evolution of porcine circovirus type 2 genomes：phylogeny and clonality［J］.Virology，2008，357（2）：175－185.

［4］ Tanja O，Chao T X，Patrick FG，et al.Evidence for association of emerging parvoviruses in pigs with cases of porcine circovirus associated disease［R］.IPVS，2014.

［5］ Opriessnig T，Gerber P F，Xiao C T，etal.A commercial vaccine based on PCV2a and an experimental vaccine based on a variant mPCV2b are both effective in protecting pigs against challenge with a 2013 U.S.variant mPCV2b strain［J］.Vaccine，2014，32：230－237.

［6］ Kim H H，Park S，Hyun B H，etal.Genetic diversity of porcine circovirus type 2 in Korean pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome during 2005－2007［J］.J Vet Med Sci，2009b，71（3）：349－353.

［7］ Chae JS，Choi K S.Genetic diversity of porcine circovirus type 2 from pigs in Republic of Korea［J］.Res Vet Sci，2010，88（2）：333－338.

［8］ Takahagi Y，Nishiyama Y，Toki S，et al.Genotypic change of porcine circovirus type 2 on Japanese pig farms as revealed by restriction fragment length polymorphism analysis［J］.Vet Med Sci，2008，70（6）：603－606.

［9］ Hess R，Kerrigan M，Rowland R.Evidence for recombination between PCV2a and PCV2b in the field［J］.Virus Research，2008，132：201－207.

［10］Pérez L J，De Arce H D，FriasM T.Genetic characterization and phylogenetic analysisofporcine circovirus type2 strainspresent in Cuban swine herds［J］.Res Vet Sci，2010，89（2）：301－305.

［11］郎洪武，張廣川，吳發權，等.豬斷奶后多系統衰弱綜合征血清抗體檢測［J］.中國獸醫科技，2000，30（3）：3－5.

［12］Wang F，Guo X，Ge X，et al.Genetic variation analysis of Chinese strains of porcine circovirus type 2［J］.Virus Res，2009，145（1）：151－156.

［13］LiW L，Wang X，Ma T，et al.Genetic analysis of porcine circovirus type 2（PCV2）strains isolated between 2001 and 2009：geno?type PCV2b predominate in postweaning multisystemic wasting syndrome occurrences in eastern China［J］.Virus Genes，2010，40（2）：244－251.

［14］王佳慧.2010－2011年我國主要養豬地區豬圓環病毒2型感染的監測及變異分析［D］.北京：中國農業大學，2012.

［15］趙英杰.2011－2012年我國豬圓環病毒2型感染情況調查及遺傳變異分析［D］.北京：中國農業大學，2013.

［16］Chunya Wei，Minze Zhang，Ye Chen，et al.Genetic evolution and phylogenetic analysis of porcine circovirus type 2 infections in southern China from 2011 to 2012［J］.Infect Genet Evol，2013，17：87－92.

［17］Cai L，Han X，Ni J，et al.Natural recombinants derived from different patterns of recombination between two PCV2b parental strains［J］.Virus Research，2011，158：281－288.

［18］Guo L J，Lu Y H，Wei Y W，et al.Porcine circovirus type 2（PCV2）：genetic variation and newly emerging genotypes in China［J］.Virol J，2010，19（7）：273.

［19］Zhai SL，Chen SN，Xu Z H，et al.Porcine circovirus type 2 in China：an update on and insights to its prevalence and control［J］.Virol J，2014，11：88.

［20］Shen H G，Halbur P G，Opriessnig T.Prevalence and phylogenetic analysis of the current PCV2 genotypes after implementation of widespread vaccination programmes in the USA［J］.JGen Virol，2012，93（6）：1345－1355.

［21］Opriessnig T，O’Neill K，Gerber P F，et al.A PCV2 vaccine based on genotype 2b ismore effective than a 2a－based vaccine to protect against PCV2b or combined PCV2a／2b viremia in pigs with concurrent PCV2，PRRSV and PPV infection［J］.Vaccine，2013，31（3）：487－494.

［22］Sun M，Liu X，Cao S，et al.Inhibition of porcine circovirus type 1 and type 2 production in PK－15 cells by small interfering RNA stargeting the Rep gene［J］.Vet Microbiol，2007，123（1／3）：203－209.

［23］Feng Z，Jiang P，Wang X，et al.Adenovirus－mediated shRNA interference against porcine circovirus type 2 replication both in vitro and in vivo［J］.Antiviral Res，2008，77（3）：186－194.

［24］Fenaux M，Opriessnig T，Halbur P G，et al.Two amino acid mutations in the capsid protein of type 2 porcine circovirus（PCV2）enhanced PCV2 replication in vitro and attenuated the virus in vivo［J］.JVirol，2004b，78（24）：13440－13446.

［25］Beach N，Juhan N，Cordoba L，etal.Replacementof the replication factors of porcine circovirus（PCV）type 2 with those of PCV type 1 greatly enhances viral replication in vitro［J］.Journal of Virology，2010a，84：8986－8989.

［26］Sylla S，Cong Y L，Sun Y X，et al.Protective immunity conferred by porcine circovirus 2 ORF2－based DNA vaccine in mice［J］.Microbiol Immunol，2014，58（6）：307－316.

［27］關淼，張飛，沈國順，等.表達豬圓環病毒2型遼寧分離株ORF2基因核酸疫苗的小鼠免疫試驗.廣州畜牧獸醫學會學術年會.2014－11－08.

［28］Shen H G，Zhou JY，Huang Z Y，et al.Protective immunity against porcine circovirus 2 by vaccination with ORF2－based DNA and subunit vaccines in mice［J］.JGen Virol，2008，89：1857－1865.

［29］Bucarey S A，Noriega J，Reyes P，et al.The optimized capsid gene of porcine circovirus type 2 expressed in yeast forms viruslike particles and elicits antibody responses in mice fed with recombinantyeast extracts［J］.Vaccine，2009，27（42）：5781－5790.［30］Wang X，Jiang P，Li Y，et al.Protection of pigs against postweaning multisystemic wasting syndrome by a recombinant adenovirus expressing the capsid protein of porcine circovirus type 2［J］.Vet Microbiol，2007，121（3／4）：215－224.

［31］Song Y，Jin M，Zhang S，et al.Generation and immunogenicity of a recombinant pseudorabies virus expressing cap protein of porcine circovirus type 2［J］.Vet Microbiol，2007，119（2－4）：97－104.

［32］Kim T，Toan N T，Seo J，et al.Bordetella bronchiseptica aroA mutant asa live vaccine vehicle for heterologous porcine circovirus type 2major capsid protein expression［J］.VetMicrobiol，2009，138（3／4）：318－324.

［33］Hayes S，Gamage L N，Hayes C.Dual expression system for assembling phage lambda display particle（LDP）vaccine to porcine circovirus 2（PCV2）［J］.Vaccine，2010，28（41）：6789－6799.

［34］Beach Nathan M，Smith Sara M，Ramamoorthy S，et al.Chimeric porcine circoviruses（PCV）containing amino acid epitope tags in the C terminus of the capsid gene are infectious and elicit both anti－epitope tag antibodies and anti－PCV type 2 neutralizing antibodies in pigs［J］.Virol，2011，85（9）：4591－4595.

［35］Huang L Lu，YWei Y，Guo L，etal.Construction and biological characterisation of recombinant porcine circovirus type 2 expressing the V5 epitope tag［J］.Virus Res，2010b，161（2）：115－123.

（編輯：李文平）

An Update Insights to the M olecular Epidem iology and Vaccine of Porcine Circovirus Type 2

ZHAO Chen－chen1，WANG Min1，LIU Chang－hui1，MUWei1，MA A－li1，MA Hui－yu1，ZHANG Jia－wang2，ZHAO Ya－rong1，WANG Gui－hua1?
（1.Animal Medicine Research Center ofDaBeiNong Group，Beijing 100195，China；2.Beijing DaBeiNong Science＆Technology Group Co.，Ltd，Beijing 100080，China）

Porcine circovirus type 2（PCV2）has been highly prevalent in commercial swine herds of the world，which can be classified into two major types：PCV2a and PCV2b.PCV2b is the main dominant genotype now.Although commercial vaccines mainly based on PCV2a have partially cross－protection against PCV2b，the prevalence of PCV2b could not be controlled significantly.Furthermore，traditional vaccine with disadvantages of lower cultivation titer and longer production period is themajor type of PCV2 vaccines.Therefore，novel vaccines based on PCV2b genotype will be probable themain research trend in the future.In this review，we discussed the molecular epidemiology of PCV2 and current research of PCV2 vaccines in order to provide insight of novel approaches thatwere useful in R＆D of new PCV2 vaccines.

porcine circovirus type 2；molecular epidemiology；PCV2b；genotype；vaccine

2014－09－05

A

1002－1280（2015）02－0063－07

S858.28

趙晨辰，碩士，從事動物傳染病疫苗研究工作。

王貴華。E－mail：wanggh＠im.ac.cn