奧硝唑片有關物質檢查方法建立

路勝

哈藥集團生物工程有限公司

奧硝唑片有關物質檢查方法建立

路勝

哈藥集團生物工程有限公司

目的：建立奧硝唑片有關物質檢查方法，使奧硝唑與各雜質峰可有效分離。方法采用高效液相色譜法,采用0.01mol/L的磷酸氫二鉀溶液：甲醇（70：30）為流動相，采用Allitima C18（3.5μm，4.6×200mm）為檢測色譜柱,流速為1.0ml/min,檢測波長為318nm,柱溫為30℃。結果奧硝唑與起始物料及中間體（2-甲基-5硝基咪唑，2-甲基-5-硝基-1-(2，3．二羥基丙基)咪唑）均可有效分離，主峰與各破壞條件下所產生雜質峰可有效分離，主峰純度符合規(guī)定，物料平衡。結論：所建立的有關物質檢查方法準確可行,可用于奧硝唑片的有關物質檢查，可有效控制產品質量。

奧硝唑片；有關物質；高效液相色譜法

奧硝唑在臨床上應用廣發(fā)，主要用于治療敏感厭氧菌所引起的腹部、盆腔、口腔、外科和腦部等部位的多種感染性疾病，口服固體制劑因療效確切被廣泛應用。奧硝唑片質量控制方面雖對有關物質進行考察，但并未對起始物料及中間體進行控制，這樣存在安全隱患，檢索奧硝唑國內外藥典標準，印度藥典收載奧硝唑原料及奧硝唑片標準，參照相關文獻[1-5]，結合奧硝唑合成工藝，本文采用高效液相色譜法測定奧硝唑片有關物質，所建立方法可有效控制產品質量。

1.試驗材料

奧硝唑粗品、奧硝唑原料、奧硝唑片、2-甲基-5硝基咪唑、2-甲基-5-硝基-1-(2，3．二羥基丙基)咪唑，色譜柱：AllitimaC18（3.5μm，4.6×200mm），Agilent 1260型高效液相色譜儀（DAD檢測器）。

2.方法與結果

2.1 色譜條件

采用高效液相色譜法,色譜柱為Allitima C18（3.5μm，4.6× 200mm）,流動相為0.01mol/L的磷酸氫二鉀溶液：甲醇（70：30）溶液，流速為1.0ml/min,檢測波長為318nm。理論塔板數(shù)不低于5000，雜質與主峰分離度應不低于3.5。

2.2 雜質分離情況考察

取奧硝唑粗品，加流動性制成含奧硝唑1mg/ml的溶液，按照上述色譜條件進樣，結果各雜質峰與主峰有效分離，主峰峰純度符合規(guī)定，奧硝唑粗品單一雜質約為0.1%，總雜質約為0.8%，另取奧硝唑片輔料、各已知雜質，按照所確定色譜條件進樣，結果輔料不干擾有關物質測定，各已知雜質與主峰有效分離。

2.3 樣品溶液制備

稱取奧硝唑供試品適量，用流動相制成濃度為1mg/ml的溶液，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1.0ml于100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.4 相對相應因子測定

奧硝唑制劑中主要雜質為該雜質為制劑主要降解產物，也為代謝主要產物。為方便控制該雜質量，對該雜質與奧硝唑相對響應因子進行研究。取奧硝唑對照品、2-甲基-5硝基咪唑及2-甲基-5-硝基-1-(2，3．二羥基丙基)咪唑各適量，制成系列濃度溶液，根據(jù)標準曲線斜率之比，計算二者相對響應因子，結果2-甲基-5硝基咪唑及2-甲基-5-硝基-1-(2，3．二羥基丙基)咪唑與奧硝唑的相對相應因子分別為0.81與1.57，在雜質計算時應按照相對相應因子進行計算。

2.5 方法驗證

通過二極管陣列檢測器監(jiān)測有關物質檢出情況，結果318nm為最佳檢測波長。

檢測限：取奧硝唑對照品，制成系列濃度溶液，進樣，當濃度為1.5ng/ml時信噪比為4.5：1，檢測限溶液濃度與供試品溶液濃度之比為0.00015，說明供試品溶液可行，可有效檢出雜質。

溶液穩(wěn)定性試驗：取供奧硝唑試品溶液及對照溶液，分別于0、2、4、6、8小時進樣，評價供試品溶液及供試品溶液的穩(wěn)定性，供試品溶液在8小時無新雜質峰產生，各雜質峰無明顯變化，對照品溶液峰面積無變化，說明溶液在8小時內穩(wěn)定，供試品溶液8小時內雜質個數(shù)及總雜質見表1。

表1 溶液穩(wěn)定性結果

耐用性試驗：改變檢測波長、更換相同品牌不同批號的色譜柱、改變流速及流動相比例，考察雜質檢出情況，結果在各色譜條件下有微小變化時，雜質檢出基本一致，耐用性好。

專屬性：取奧硝唑片對照品，對供試品進行酸、堿、氧化、高溫（固體及溶液）及強光破壞試驗，使用DAD檢測器，全波長監(jiān)測，考察各種破壞條件下雜質檢出情況。結果318nm為本品最佳監(jiān)測波長，確定供試品檢測波長為318nm，供試品在各條件下降解產物約為5%，雜質與主峰可有效分離，峰純度符合規(guī)定，2-甲基-5硝基咪唑為主要降解產物，各破壞條件下物料平衡。各條件下塔板數(shù)及分離度符合規(guī)定。

2.6.樣品檢查

取奧硝唑片供試品，按照確定方法進行有關物質檢查，結果2-甲基-5硝基咪唑約為0.2%，其它未知雜質小于0.1%，總雜質約為0.3%。

3.結論

所建立有關物質檢查方法可行，對已知雜質采用相對相應因子計算雜質含量，更準確可靠。2-甲基-5硝基咪唑為主要代謝產物，毒性小，制劑中該雜質為0.2%左右，較安全。

[1]奧硝唑片藥品標準（印度藥典）：1824-1825.

[2]杜加秋，何佳佳，朱培曦，鄭國鋼.奧硝唑氯化鈉注射液中有關物質的HPLC法測定.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2014年第7期：684-686.

[3]何佳佳，朱培曦，鄭國鋼.奧硝唑氯化鈉注射液主要雜質的結構鑒定[J]．藥物分析雜志，2012，32(10)：1822-1825．

[4]歐年春，彭艷梅，郭英球.高效液相色譜法測定奧硝唑片中奧硝唑和有關物質的含量.中南藥學，2011年第9卷第8期：585-586.

[5]趙雨娜.高效液相色譜法測定奧硝唑片有關物質.黑龍江科技信息，2013年第3期：1.

路勝（1981-），男，黑龍江省哈爾濱市，本科畢業(yè)，哈藥集團生物工程有限公司，化驗員，工程師。