芪柴煎劑對變應性鼻炎大鼠血清IL-4,IFN-γ影響的實驗研究

胥彪，胡文健

（達州市中西醫結合醫院耳鼻咽喉頭頸外科，四川達州635000；1瀘州醫學院附屬中醫醫院耳鼻咽喉科，四川瀘州646000）

芪柴煎劑對變應性鼻炎大鼠血清IL-4,IFN-γ影響的實驗研究

胥彪，胡文健1

（達州市中西醫結合醫院耳鼻咽喉頭頸外科，四川達州635000；1瀘州醫學院附屬中醫醫院耳鼻咽喉科，四川瀘州646000）

目的：研究芪柴煎劑（自擬方）對變應性鼻炎大鼠模型血清IL-4、IFN-γ的影響，探討其對變應性鼻炎大鼠的作用療效。方法：應用卵清蛋白將實驗大鼠制作成變應性鼻炎模型，隨機分為正常對照組（A組）、芪柴煎劑低劑量組（B組）、高劑量組（C組）、地氯雷他定組（D組）、模型對照組（E組）各8只。連續14 d分別給予對應的藥物，A組、E組以蒸餾水替代。用雙抗體夾心ELISA法檢測血清IL-4、IFN-γ的含量。結果：各實驗組血清IL-4含量較模型對照組明顯偏低，差異均有統計學意義（P＜0.05）；芪柴煎劑低劑量組IL-4含量高于芪柴煎劑高劑量組，差異有統計學意義（P＜0.05）。各實驗組血清IFN-γ含量高于模型對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；芪柴煎劑低劑量組、地氯雷他定組IFN-γ含量低于高劑量組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論：芪柴煎劑能夠下調變應性鼻炎大鼠血清IL-4水平；上調IFN-γ水平。

IL-4；IFN-γ；變應性鼻炎大鼠模型；芪柴煎劑

變應性鼻炎作為一種臨床常見病，嚴重影響了患者的生活質量[1]。臨床應用芪柴煎劑方，治療肺脾氣虛、肝郁氣滯證型鼻鼽，獲得了肯定的臨床療效[2]。但其有效的作用機制和途徑不甚明確，因此我們試圖運用現代醫學的方法揭示其治療變應性鼻炎的作用機制，旨在為臨床使用芪柴煎劑治療變應性鼻炎提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 主要藥物和試劑

1.1.1 主要藥物

芪柴煎劑，其主要組成藥物為：黃芪、防風、白術、石菖蒲、細辛、蒼耳子、五味子、白芍、桂枝、辛夷、薄荷、柴胡。由達州市中西醫結合醫院制劑室制備。

地氯雷他定片，5 mg×7片，國藥準字：H20020091，深圳市海濱制藥有限公司。

1.1.2 主要試劑

IFN-γ試劑盒：美國RD公司產品，批號201308；IL-4試劑盒：美國RD公司產品，批號201308；氫氧化鋁粉末：天津津海化學試劑廠，貨號H12020766；雞卵白蛋白：美國sigma公司，貨號A5253。

1.2 造模方法和模型評價標準

40只清潔健康級SD大鼠，雌雄各半，體重200士20 g，鼠齡6～7月。適應性喂養實驗大鼠1周后，依據文獻3建立變應性鼻炎動物模型的方法[3]。基礎致敏：以9.6 mg卵清蛋白為抗原材料，佐以960 mg氫氧化鋁粉末，加入32 mL生理鹽水制成3%均勻混懸液，將混懸液注入實驗大鼠腹腔，劑量為1 mL/只，隔日一次，共8次。鼻腔激發：基礎致敏結束后第2 d用生理鹽水配制成0.5%卵清蛋白溶液，以加樣槍滴鼻行雙側鼻腔攻擊，每側50 μL，每日1次，連續7 d。空白對照組大鼠予以等量蒸餾水替代卵清蛋白溶液進行實驗。末次鼻腔激發后，立刻觀察30 min，記錄大鼠鼻分泌物量、噴嚏及搔鼻次數，采用疊加量化記分法記分[4]。鼻癢：輕抓鼻幾次1分，兩者之間為2分，四處摩擦為3分。噴嚏：打1～3個噴嚏為1分，4～10個為2分，10個以上為3分。清涕：清涕少量為1分，涕過前鼻孔為2分，涕流滿面為3分。總分超過5分為模型復制成功。1.3實驗動物分組給藥

造模成功后，按隨機數字表法將造模成功后的大鼠分為空白對照組（A組）、芪柴煎劑低劑量組（B組）、芪柴煎劑高劑量組（C組）、地氯雷他定組（D組）、模型對照組（E組）。從實驗第23 d開始，用制劑室預先制備好的芪柴煎劑（濃縮后5 mL煎劑相當于5 g生藥）對實驗大鼠灌胃，劑量參考按照《藥理實驗方法學》人與動物等效劑量換算方法[5]，人與大鼠藥物按每公斤體重劑量之比約為1∶10，灌胃時間為兩周。各組大鼠藥物用量如下：A組（正常對照組）給予蒸餾水每鼠2 mL/d，B組（低劑量組）予以芪柴煎劑每只大鼠4 g/（kg/d）(生藥量)，約相當于正常劑量的一半；C組（高劑量組）給予芪柴煎劑每鼠8 g/( kg/d)，約相當于常規劑量；D組（地氯雷他定對照組）給予地氯雷他定1 mg/(kg/d)，E組給予蒸餾水每鼠2 mL/d。

1.4 實驗動物標本制備

給藥2周后，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉實驗大鼠，用量為0.3～0.4 mL/100 g，麻醉成功后，仰臥位固定于動物手術臺，酒精消毒，打開胸腔，暴露大鼠心臟，用注射器取全血約2～3 mL于抗凝管中，保存于-20℃冰箱中，待行ELISA檢測。

1.5 統計學方法

數據采用x±s表示，實驗所得數據采用SPSS 19.0軟件，組間均數應用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 實驗結果

給藥后大鼠癥狀明顯改善，搔鼻、噴嚏次數減少，鼻腔清水樣分泌物減少。高劑量、地氯雷他定組大鼠尤為明顯，僅偶見個別大鼠鼻癢、噴嚏，均無清涕從前鼻孔流出，和正常對照組比較無明顯的統計學意義（P＞0.05）。與模型對照組比較,各組大鼠鼻部癥狀積分偏低，差異明顯，有統計學意義（P＜0.01），表1。

表1 給藥后實驗大鼠鼻部癥狀積分

2.2 大鼠血清IL-4含量比較

芪柴煎劑低劑量組（P＜0.05）、高劑量組（P＜0.01）、地氯雷他定組（P＜0.01）血清IL-4含量明顯低于模型對照組，差異有統計學意義；芪柴煎劑低劑量組與芪柴煎劑高劑量組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），表2。

表2 實驗大鼠血清IL-4含量比較

正常對照組（A）芪柴煎劑低劑量（B）芪柴煎劑高劑量（C）

地氯雷他定（D）模型對照組（E） 88888 55.34±15.77 218.65±45.03ab136.36±42.22ac173.44±49.47a262.64±32.11a

33.48

0.00

2.3 大鼠血清IFN-γ含量比較

芪柴煎劑低劑量組血清IFN-γ含量（P＜0.05）；芪柴煎劑高劑量組（P＜0.01）、地氯雷他定組（P＜0.01）血清IFN-γ含量明顯高于模型對照組，差異有統計學意義；芪柴煎劑低劑量組與芪柴煎劑高劑量組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；芪柴煎劑高劑量組血清IFN-γ含量明顯高于地氯雷他定組，差異有統計學意義（P＜0.05），表3。

表3 實驗大鼠血清IFN-γ含量比較

3 討論

大量研究表明導致變應性鼻炎的免疫學基礎是Th1/Th2細胞間免疫反應失衡[6]。Th2分泌的主要特征因子IL-4，其主要功能為刺激B細胞，在體液免疫過程中引起速發（Ⅰ型）變態反應。從有癥狀到無癥狀的變應性鼻炎患者獲取標本，于體外暴露變應原，可以觀察到表達IL-4的mRNA明顯增加，B細胞同類轉換產生IgE，但這一現象在非變應性鼻炎中并不存在[7]。IFN-γ為Th1型細胞因子的一種,可通過增加IFN-γ可以影響CD+T細胞分化所處的微環境,使Th1/Th2漂移并向Th1型轉化,以阻斷Th2型細胞因子的分化。IFN-γ可顯著抑制IL-4mRNA的轉錄水平,抑制IL-4誘導的B細胞表達IgE受體,從而抑制IgE的生成[8]。

鼻鼽屬本虛標實之證，芪柴煎劑組方以益氣健脾為主，輔以疏肝解郁、祛風通竅。黃芪健脾補氣、益衛固表為君藥。白術、石菖蒲利濕健脾，且白術兼有健脾，石菖蒲兼能通竅為臣，薄荷、柴胡能疏風解表，調肝以解土虛木乘，亦為臣藥。防風解表驅風，蒼耳子、辛夷、細辛辛溫，入肺經，為鼻科要藥，功善通竅。桂枝長于助陽化氣，溫經通脈，氣行則涕消。白芍與桂枝配伍有調和營衛之妙，和五味子合用有柔肝斂涕之效。以上藥均為佐使，為溫陽止涕、祛風通竅而設。全方投之，能實肺脾之氣，散風寒之邪，解肝經之郁；則正氣扶、邪氣除病自愈之。

芪柴煎劑能夠顯著改善變應性鼻炎大鼠鼻部癥狀，低劑量組IL-4含量高于芪柴煎劑高劑量組，呈現劑量相關性。地氯雷他定組IFN-γ含量低于高劑量組，說明芪柴煎劑可能對IFN-γ調節作用優于地氯雷他定。其防治變應性鼻炎大鼠有效作用機制可能與下調血清IL-4水平和上調IFN-γ水平有關；但其有效作用機制還有待進一步的臨床研究。

1.Amizadeh M,Safizadeh H,Bazargan N,et al.Survey on the prevalence of allergic rhinitis and its effect on the quality of high school students'life[J].Iran J Otorhinolaryngol,2013,25(71):79-84.

2.胡文健，胥彪,王敏,等.芪柴煎劑治療肺脾氣虛肝氣郁結證型的臨床觀察[J].瀘州醫學院學報,2013,36(5): 489-490.

3.Ayoub M,Lallouette P,Sutterlin Bw,et al.Modulation of the TH1/TH2 bias by an immunoglobulin histamine complex in the ovalbumin allergy mouse modle[J].Int immunopharmacol,2003,3(4):523-539.

4.趙秀杰，董震，楊占泉,等.鼻超敏反應實驗模型的建立[J].中華耳鼻咽喉科雜志1993,28(3):17-18.

5.徐叔云.藥理實驗方法學[M].北京:人民衛生出社,2002:13.

6.Baars EW，Savelkoul HF.Citrus/Cydonia compcan restorethe immunological balancein seasonal allergic rhinitis-related immunolo-gical parameters in vitro[J]. Mediators Inflamm，2008,30(1):496-497.

7.成麗蘭，王珍，姜翠菊,等，濱蒿內酯對大鼠血清Th1/ Th2細胞因子及IgE表達的影響[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志.2013,27(23):1310-1312.

8.Rudack C,Sachse F,Alberty J.Chronic rhinosinusitisneed for further classification[J]?Inflamm Res,2004,53: 111-117.

（2014-10-31收稿）

作者投稿系統http∶//xb.lzmc.edu.cn/

Effect of Qi Chai decoction on serum IL-4,IFN-γ level in allergic rhinitis rats

Xu Biao，Hu Wenjian1
Departmene of ENT Head and Neck Surgery，the Dazhou Hospital of Integrated TCM and Western Medicine；1Departmene of ENT，the Affiliated Chinese Traditional and Medicine Hospital of Luzhou Medical college

Objective:To study the influence of Qi Chai decoction on serum IL-4,IFN-γ level of allergic rhinitis model of rats so as to explore its role and efficacy in treating allergic rhinitis.Methods:Rats with allergic rhinitis were made by ovalbumin as sensitizing agent.40 healthy adult SD rats were randomly divided into five groups(8 rats each)∶normal control group low-dose and high dose Qi Chai decoction groups，loratadine group,and model control group.Corresponding mjodel control given for 14 consecutive days in each group.Then the serum IL-4 and IFN-γ contents were tested by ELISA.Results:Compared with model control group,the serum IL-4 levels of low dose and high dose Qi Chai decoction groups and desloratadine group were significantly lower,and there were significant differences(P＜0.05),and IL-4 level of low dose Qi Chai decoction group was higher than that of high dose group(P＜0.05).Compared with model control group,the serum IFN-γ level of low dose and high dose Qi Chai decoction groups,and the desloratadine group were significantly higher(P＜0.05).Compared with high dose group,the serum IFN-γ level of low dose Qi Chai decoction group and loratadine group were significantly lower(P＜0.05).Conclusion:The Qi Chai decoction can down-regulate the serum IL-4 levels and up-regulate the serum IFN-γ levels of the rats with allergic rhinitis.

IL-4;IFN-γ Allergic rhinitis rat model;Qi Chai decoction

R246.81

A

10.3969/j.issn.1000-2669.2015.02.003

胥彪（1985-），男，碩士研究生，E-mail：xbxubiao@126.com

胡文健（1966-），男，副教授，本科