槲寄生藥材中紫丁香苷薄層鑒別方法研究

潘靜嵐

廣州白云山星群藥業(yè)(股份)有限公司，廣東 廣州 510000

槲寄生藥材中紫丁香苷薄層鑒別方法研究

潘靜嵐

廣州白云山星群藥業(yè)(股份)有限公司，廣東 廣州 510000

目的：以紫丁香苷為對(duì)照品，建立槲寄生藥材的薄層鑒別方法。方法：以紫丁香苷為對(duì)照品，根據(jù)《中國(guó)藥典》(2010版)附錄ⅥB(薄層色譜法)項(xiàng)下方法，對(duì)3個(gè)產(chǎn)地，共8批槲寄生藥材進(jìn)行薄層鑒別。考察不同提取方法、不同展開(kāi)系統(tǒng)、不同點(diǎn)樣量、不同薄層板、不同溫度、不同濕度對(duì)槲寄生藥材中紫丁香苷薄層鑒別的影響，從中選出槲寄生藥材中紫丁香苷薄層鑒別的最佳條件。結(jié)果：以紫丁香苷為對(duì)照品，三氯甲烷-甲醇-水(15∶4∶0.2)為展開(kāi)劑，10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，供試品和對(duì)照品在相同位置顯紫色斑點(diǎn)。結(jié)論：該方法可行、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，能夠作為槲寄生藥材的鑒別方法。

槲寄生藥材；薄層鑒別；紫丁香苷

槲寄生Viscum coloratum(Komar.)Na k a i為桑寄生科灌木植物，植物帶葉的莖枝可供藥用，具有補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕，安胎等功效，提取物可改善微循環(huán)，其總生物堿還具有抗腫瘤作用。《中國(guó)藥典》(2005版)收載的槲寄生質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，只有齊墩果酸的薄層鑒別和含量測(cè)定，《中國(guó)藥典》［1］(2010版)收載的標(biāo)準(zhǔn)中，取消了齊墩果酸的含量測(cè)定，增加了紫丁香苷的含量測(cè)定。但紫丁香苷的含量測(cè)定使用的是HP L C法，對(duì)儀器要求較高。本實(shí)驗(yàn)對(duì)槲寄生藥材中紫丁香苷的薄層鑒別方法進(jìn)行研究，方法簡(jiǎn)便易行，檢測(cè)成本低，為槲寄生藥材的真?zhèn)舞b別及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 分析天平 (S A R T OR I U S B P121S)、 HN-10006超聲儀(廣州市華南超聲設(shè)備有限公司提供)，半自動(dòng)點(diǎn)樣儀(C A M AG NAN OM A T3)，80-2B離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠提供)，東方-B型風(fēng)熱式電熱恒溫干燥箱(廣州東方電熱干燥設(shè)備廠提供)、薄層攝像系統(tǒng)(C A M AG R EP RO ST A R3)

1.2 試藥 紫丁香苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供，供含量測(cè)定用，111574-200603)，槲寄生藥材(廣西、新疆、吉林3個(gè)產(chǎn)地，共9批，均采購(gòu)自廣州市清平藥材市場(chǎng))，甲醇、乙醇、三氯甲烷等試劑均為分析純(西隴化工股份有限公司提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取紫丁香苷對(duì)照品10mg，加甲醇溶解，制成濃度為1mg/m L的紫丁香苷對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液制備方法的選擇 方法一：稱取槲寄生藥材粉末10 g，加30%乙醇100m L回流30分鐘，過(guò)濾，濾液蒸干后加1m L甲醇溶解。方法二：稱取粉末10 g，加乙醇100m L超聲30分鐘，離心(5 000 r/m in)15分鐘，取上清液蒸干后加1m L甲醇溶解。方法三：稱取粉末10g，加水100m L，加熱回流30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2m L，加在D101型大孔吸附樹(shù)脂柱(內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為15 cm)上，用水100m L洗脫，棄去水液，再用30%乙醇100m L洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?m L使溶解。依照《中國(guó)藥典》(2010年版)附錄ⅥB(薄層色譜法)項(xiàng)下方法，對(duì)3種方法提取的槲寄生藥材供試品溶液進(jìn)行薄層層析。結(jié)果用方法一提取的供試品溶液黏度較大，不易點(diǎn)樣，斑點(diǎn)拖尾較嚴(yán)重。方法二和方法三提取的供試品黏度較小，點(diǎn)樣容易，但方法二提取的供試品展開(kāi)后拖尾現(xiàn)象較方法三提取的供試品嚴(yán)重。方法三的展開(kāi)效果最好，斑點(diǎn)清晰，因此建議使用方法三對(duì)供試品進(jìn)行提取［2-3］。

2.3 顯色劑 10%硫酸乙醇溶液。

2.4 槲寄生藥材中紫丁香苷TLC鑒別的條件考察

2.4.1 展開(kāi)系統(tǒng)選擇 分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液點(diǎn)于同一薄層板上，參考文獻(xiàn)分別以展開(kāi)劑：1)三氯甲烷-甲醇-水(15∶4∶0.2)、展開(kāi)劑；2)三氯甲烷-甲醇-水(6∶2∶1)的下層澄清溶液、展開(kāi)劑；3)乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇(8∶6.4∶6.4)，3種不同展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，至可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示展開(kāi)劑1)和3)的展開(kāi)效果比2)好，展開(kāi)劑1)和3)的R f值分別為0.5和0.4，展開(kāi)劑2)的R F值為0.1。展開(kāi)劑1)和3)的R F值雖然相近，但展開(kāi)劑1)又比3)的拖尾現(xiàn)象要少，而且斑點(diǎn)更清晰圓整，因此選定展開(kāi)劑三氯甲烷-甲醇-水(15∶4∶0.2)為最佳展開(kāi)劑。

圖1 不同展開(kāi)系統(tǒng)的槲寄生藥材薄層色譜圖

2.4.2 點(diǎn)樣量的選擇 分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液2、4、5、6、8、10μL，點(diǎn)于同一薄層板上，放入“2.4.1”項(xiàng)選擇的展開(kāi)劑中展開(kāi)，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，至可見(jiàn)光下檢視。結(jié)果顯示槲寄生藥材中紫丁香苷含量較低，如果點(diǎn)樣量不足，斑點(diǎn)不夠清晰。供試品的點(diǎn)樣量為10μL時(shí)，斑點(diǎn)清晰而且沒(méi)有擴(kuò)散現(xiàn)象，因此把紫丁香苷對(duì)照品的點(diǎn)樣量為定為2μL，槲寄生藥材供試品的點(diǎn)樣量定為10μL。

2.4.3 溫度考察 分別吸取對(duì)照品溶液2μL和供試品溶液10μL，點(diǎn)于同一薄層板上，于10℃、室溫和30℃下(先將層析缸和展開(kāi)劑提前1小時(shí)放入實(shí)驗(yàn)溫度下)，以“2.4.1”項(xiàng)選擇的展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，均無(wú)擴(kuò)散現(xiàn)象，至可見(jiàn)光下檢視。結(jié)果顯示3種溫度下，斑點(diǎn)數(shù)目基本相同，R F值分別為0.4、0.5、0.5。可見(jiàn)在10～30℃范圍內(nèi)，槲寄生藥材的紫丁香苷薄層鑒別重現(xiàn)性較好［4-6］。

2.4.4 濕度考察 分別吸取對(duì)照品溶液2μL和供試品溶液10μL，點(diǎn)于同一薄層板上，分別在室內(nèi)環(huán)境(R H25%)、相對(duì)濕度47%和65%的條件下(先將層析缸和展開(kāi)劑提前1小時(shí)放入實(shí)驗(yàn)濕度下，展開(kāi)劑要提前30分鐘倒入層析缸預(yù)飽和)，以“2.4.1”項(xiàng)選擇的展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，至可見(jiàn)光下檢視。結(jié)果顯示3種不同濕度下，斑點(diǎn)數(shù)目和基本相同，在相對(duì)濕度65%的環(huán)境下，雖然斑點(diǎn)稍有擴(kuò)散現(xiàn)象，但并不影響結(jié)果的判斷。3種不同相對(duì)濕度的R F值基本相同。可見(jiàn)在相對(duì)濕度25%～65%的范圍內(nèi)，濕度對(duì)槲寄生藥材的紫丁香暗薄層鑒別影響較小。

2.4.5 不同薄層板的考察 分別吸取對(duì)照品溶液2μL和供試品溶液10μL，點(diǎn)于不同薄層板上，以“2.4.1”項(xiàng)選擇的展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，至可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖。結(jié)果顯示默克預(yù)制G板效果最為理想，但薄層板對(duì)槲寄生藥材的紫丁香苷薄層鑒別影響不大，重現(xiàn)性較好，見(jiàn)圖2。

圖2 不同薄層板的槲寄生藥材薄層色譜圖

2.5 槲寄生藥材中的紫丁香苷薄層鑒別系統(tǒng)驗(yàn)證

2.5.1 槲寄生藥材收集 藥材編號(hào)見(jiàn)表1。

表1 槲寄生藥材來(lái)源

2.5.2 系統(tǒng)驗(yàn)證 分別按照“2.1”項(xiàng)和“2.2”項(xiàng)確定的方法制備紫丁香苷對(duì)照品溶液和9個(gè)批次的槲寄生藥材供試品溶液，分別吸取對(duì)照品溶液2μL和供試品溶液10μL，點(diǎn)于默克預(yù)制板G板上，以“2.4.1”項(xiàng)選擇的展開(kāi)劑取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液顯色105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，至可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖。供試品色譜中，在與紫丁香苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖3。

圖3 槲寄生藥材薄層系統(tǒng)驗(yàn)證色譜圖

3 討論

在槲寄生藥材的紫丁香苷薄層鑒別試驗(yàn)中，以紫丁香苷為對(duì)照品，選擇以水加熱回流，D101型大孔吸附樹(shù)脂柱(內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為15 cm)處理槲寄生供試品藥材，采用三氯甲烷-甲醇-水(15∶4∶0.2)為展開(kāi)劑，以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑。結(jié)果斑點(diǎn)清晰，分離效果較好。

在確定展開(kāi)條件后，對(duì)不同點(diǎn)樣量、不同溫度，不同濕度，不同薄層板進(jìn)行考察，并對(duì)3個(gè)不同產(chǎn)地共8個(gè)批次的槲寄生藥材進(jìn)行薄層鑒別，結(jié)果表明，本文使用的薄層鑒別方法結(jié)果穩(wěn)定，具有良好的重現(xiàn)性。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］.2010：附錄ⅥB.

［2］ 王文永，趙仕丞，劉東新.山海螺的薄層鑒別及紫丁香苷的含量測(cè)定［J］.中藥材，2011，34(5)：702-704.

［3］ 黃劍林，周秦，馬潤(rùn)梅.薄層法對(duì)比兩種顏色槲寄生的成分［J］.陜西中藥，2006，27(10)：1286-1288.

［4］ 馮彥琳，李美萍，李俊，等.薄層色譜掃描法測(cè)定刺五加注射液中紫丁香苷的含量［J］.藥物分析雜志，2006，26(6)：853-854.

［5］ 任一杰，張華，張喜民，等.復(fù)方金銀花滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.西部中醫(yī)藥，2014，27（6）：16-17.

［6］ 張幸福，駱桂法，周燕雪.抱莖獐牙菜的生藥學(xué)研究［J］.西部中醫(yī)藥，2014，27（7）：41-43.

Study on TLCMethod for Identification of Syringin in HuJiSheng

PAN Jinglan
Guangzhou BaiYunShan XingQun Pharmaceutical Co.Ltd.,Guangzhou 510000,China

Objective:To establish TLCmethod for identifying HuJiSheng(Herba Visci)by taking syringin as the reference substance.Methods:According to themethods recorded inⅣB of appendix in Chinese Pharmacopoeia (2010),syringinwas carried out to be the reference substance to identify eightbatches of HuJiSheng from three producing areas by TLCmethods.In order to screen the best condition for identifying syringin in HuJiSheng by TLC methods,the influence for TLC identification was investigated by analyzing the differentextractionmethods,developing systems,sampling amount,thin-layer plates,temperature and humidity.Results:The purple spots of test substance and reference substance appeared in the same position w ith syringin as reference substance,chloroform-methanol-water(15∶4∶0.2)as developing solventand 10%alcoholic solution of sulfuric acid as chromogenic reagent.Conclusion:Themethod,which is feasible,highly specific and reproducible,can be used to identify Hu－JiSheng.

HuJiSheng;TLC;syringin

R284.1

A

1004-6852(2015)04-0030-03

2014-03-10

潘靜嵐(1982—)，女，中藥工程師。研究方向：中藥制劑。