三種鼠淋巴引流特點的比較研究*

韓建紅，甘仲霖，李達兵，朱先玉，藺艷

三種鼠淋巴引流特點的比較研究*

韓建紅，甘仲霖，李達兵，朱先玉，藺艷

（四川醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)學研究所，四川瀘州646000）

目的：研究三種鼠不同部位淋巴引流的特點及差異。方法：用墨水作顯色劑，分別注射入KM小鼠、SCID Beige小鼠和SD大鼠后足掌、尾部及前掌皮下，通過觀察其后肢、腹部及腋窩等處的淋巴結染色的情況來探明該區(qū)域淋巴引流的特點及差異。結果：①SCID Beige小鼠后足的淋巴引流是從腘淋巴結引流到髂淋巴結，KM小鼠從髂淋巴結還流向腎淋巴結；SD大鼠另有少量流至腹股溝淋巴結（P＜0.05）。②KM小鼠和SCID Beige小鼠尾部的淋巴引流都沿同側腹股溝淋巴結到腋窩副淋巴結（P=1.000），SD大鼠則分別經雙側腘淋巴結和臀淋巴結流向髂淋巴結（P＜0.05）。③KM小鼠和SCID Beige小鼠前掌的淋巴都流向腋窩副淋巴結和腋窩上葉的淋巴結（P=1.000），SD大鼠是流到腋窩副淋巴結和腋窩頂部外側的淋巴結（P＜0.05）。結論：三種鼠在后足、尾部和前掌的淋巴引流各不相同。

淋巴引流；SCID Beige；KM小鼠；SD大鼠

在人和哺乳類動物中，淋巴系統在腫瘤和外來抗原的免疫反應中起重要作用，特定部位淋巴結(lymph node，LN)的增生、腫大常被用做淋巴結引流區(qū)域炎癥反應的特征描述[1]。近年來免疫缺陷小鼠和免疫抑制模型鼠在腫瘤移植及癌癥轉移研究中的應用已經越來越廣泛[2]，前哨淋巴結和腫瘤誘導的新生淋巴管、淋巴引流等也常被用來診斷各種癌癥的轉移[3-5]。移植部位的淋巴引流和前哨淋巴結的選擇往往是影響研究結果的重要因素，故而探明試驗動物不同部位的淋巴引流特點對免疫學及腫瘤淋巴道轉移的相關研究具有重要意義。本研究選用國內常用的KM小鼠、免疫缺陷鼠—SCID Beige小鼠以及SD大鼠為研究對象，以墨水作為顯色劑，著重研究其四肢及尾部淋巴引流的特點及差異。

1 材料與方法

1.1 材料

大小鼠雄雌不限，8～10周齡，各24只。KM小鼠體重為25±5 g，SD大鼠體重為（250±50）g，均由四川醫(yī)科大學實驗動物中心提供（生產合格證：SCXK(川)2013-17），SCID小鼠體重（22±3）g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司（生產合格證：SCXK(京)2012-0001）。中華牌碳素墨水，由重慶市耀輝墨水廠生產；0.2μm過濾器購于Millipore Express公司。

1.2 方法

墨水經0.2μm過濾器過濾而成。大小鼠用1%戊巴比妥鈉100 mg/kg經腹腔注射麻醉。麻醉后將墨水分別注射入后肢足墊、尾根部及前掌的皮下。后足及前掌注射的部位為皮下朝足/爪趾方向，小鼠注射量為20μL/只，大鼠為40μL/只，以皮膚隆起形成皮丘為成功注射的標準，以足/爪掌面變黑為度；尾部注射部位在距肛門1 cm處倆尾靜脈之間，針尖朝頭端方向，小鼠注射量為40μL/只，大鼠注射為200μL/只。并對隆起的皮丘略加按摩，以促進顯色劑的吸收。

1.3 觀察指標

30 min后斷頸處死動物，解剖并觀察其腘窩、腹股溝、腋窩、臀及腹腔深部等淋巴結的染色情況，淋巴結染上黑色為陽性。

1.4 統計學處理

根據鼠種將動物隨機分為三組，觀察不同部位被注射墨汁后，體內淋巴結染色的情況，用SPSS13.0軟件包中分析數據，分類資料用頻數表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher’s Exact檢驗。P＜0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 后足掌的淋巴引流及淋巴結染色情況

后足被注射墨水30 min后，8只KM小鼠均被標記出了同側的腘淋巴結（Popliteal LN，PO）（圖1A）、髂淋巴結(Iliac LN，IL)及腎淋巴結(Renal LN，RE)（圖1B），而腹股溝淋巴結(Inguinal LN，IN)及腋窩淋巴結(Axillary LN，AX)均未見著色。8只SCID小鼠的腘淋巴結和髂淋巴結的著色同KM小鼠，但未見腎淋巴結著色（圖1C）。8只SD大鼠被標記出同側腘淋巴結和髂淋巴結的同時腹股溝淋巴結也被染色，但著色明顯淺于腘淋巴結和髂淋巴結（圖1D、1E），腋窩淋巴結未見著色。統計學分析結果顯示三種鼠的后足被注射墨汁后淋巴結染色的結果互不相同（P＜0.001），差異具有統計學意義（表1）。

圖1 三種鼠后足掌皮下注射墨水后淋巴結染色情況

表1 三種鼠后足掌皮下注射墨水后淋巴結染色情況比較(n=64)

2.2 尾部的淋巴引流及淋巴結染色情況尾部注射墨水30 min后，8只KM小鼠和8只SCID小鼠的腹股溝淋巴結及腋窩副淋巴結[6-7](Subsidiary Axillary LN，SA)著色（圖2A、2B），而髂淋巴結未見著色（圖2A、2C）；8只SD大鼠是雙側腘淋巴結、雙側臀淋巴結(Gluteal LN，GL)及雙側髂淋巴結（圖2D、2E）被染色，但腹股溝及腋窩淋巴結未見著色。KM小鼠和SCID小鼠尾部被注射墨汁后淋巴結染色結果無差異（P=1.000），而SD大鼠與KM小鼠和SCID小鼠的淋巴結染色結果均不相同（P＜0.001），差異具有統計學意義（表2）。

圖2 三種鼠尾根部皮下注射墨水后淋巴結染色情況

表2 三種鼠尾根部皮下注射墨水后淋巴結染色部位比較(n=80)

2.3 前掌的淋巴引流及淋巴結染色情況

鑒于SD大鼠后足及尾部注射墨水都未能使腋窩處的淋巴結著色，本研究還比較了三種鼠前爪的淋巴引流情況。結果發(fā)現，8只SD大鼠在前爪被注射墨汁后，腋窩副淋巴結和窩頂部外側的一個腋窩淋巴結都被染色（圖3A），8只KM小鼠和8只SCID小鼠都是腋窩副淋巴結和腋窩淋巴結的上葉被染色（圖3B、3C）。KM小鼠和SCID小鼠的前掌被注射墨汁后淋巴結染色結果無差異（P=1.000），而SD大鼠與KM小鼠和SCID小鼠淋巴結染色的結果均不相同（P＜0.001），差異具有統計學意義（表3）。

圖3 三種鼠前爪皮下注射墨水后淋巴結染色情況

表3 三種鼠前爪皮下注射墨水后淋巴結染色情況比較(n=48)

3 討論

淋巴系統由淋巴管和淋巴器官（淋巴結和脾等）構成。淋巴結是淋巴管向心行程中不斷經過的淋巴器官，通過標識淋巴結可以有效判斷淋巴引流的途徑和特點。小鼠的淋巴結在正常情況下一般較小，很難與周圍組織和脂肪區(qū)分開，本研究采用由6%碳黑加85%水和一些穩(wěn)定劑制成的普通墨水作為顯色劑，經0.2μm濾器過濾后，使碳顆粒的直徑控制在0.2μm以下，經皮下注射可被吸收入淋巴管內，并在淋巴結處大量聚集，使淋巴結染上顏色，從而有效準確地標識出淋巴引流的途徑。

本研究中KM小鼠、SCID小鼠和SD大鼠后足皮下的墨汁都使腘淋巴結、髂淋巴結染色，表明它們后足的淋巴都可沿后肢經腘淋巴結朝腹部深處引流，沿途經過髂淋巴結。KM小鼠的淋巴從髂淋巴結流出后會到腎淋巴結，而SCID小鼠在本研究中，無論是延長染色時間還是增大墨汁的注射量，其腎淋巴結始終未見著色，提示SCID小鼠后肢的淋巴雖然也是朝腹部淋巴結引流，但并不引流到腎淋巴結。SD大鼠的淋巴結染色的結果則提示其后足的淋巴引流是優(yōu)先從腘淋巴結到髂淋巴結，另有少量淋巴直接引流至腹股溝淋巴結，但很難到達腋窩淋巴結。本結果中KM小鼠和SCID小鼠后足淋巴引流的結果與呂順增等人[8-9]關于小鼠后足淋巴引流的報道結果相似，但與Maria.I等人報道的C57BL/6小鼠后肢的淋巴是分別經腘淋巴結和腹股溝淋巴結引流的結果明顯不同[10]。說明不僅大、小鼠間后肢淋巴引流途徑有差異，不同小鼠間的引流途徑也可能不一樣。本研究中還發(fā)現SCID小鼠和SD大鼠淋巴經髂淋巴結向上并不流入腎淋巴結，暗示SCID小鼠和SD大鼠的腎淋巴結并不收集來自后肢及髂淋巴結的淋巴回流。

三種鼠尾部注射墨汁后淋巴結染色的結果表明KM小鼠和SCID小鼠尾部的淋巴引流均沿同側腹股溝淋巴結引流至腋窩副淋巴結，而SD大鼠尾部的淋巴是沿尾根部雙側引流，分別經腘淋巴結和臀淋巴結再到髂淋巴結。

SD大鼠后足的墨汁雖能到達腹股溝淋巴結但并不能流至腋窩副淋巴結，而兩種小鼠尾部注射的墨汁卻使得腹股溝淋巴結和腋窩副淋巴結明顯染色，暗示SD大鼠的淋巴從腹股溝淋巴結引流至腋窩副淋巴結的效率遠比KM小鼠和SCID小鼠要低。SD大鼠腋窩淋巴結及其副淋巴結僅在前爪被注射墨汁時才出現強染色，表明SD大鼠前肢與后肢及尾部皮下的淋巴引流幾乎沒有重疊，前肢主要流向腋窩淋巴結及其副淋巴結，而后肢和尾部主要經腹部淋巴結向上引流。KM小鼠和SCID小鼠的腋窩副淋巴結不僅接受前肢的淋巴引流，也收納腹股溝淋巴結向上的引流，所以KM小鼠和SCID小鼠前肢和尾部皮下的淋巴主要沿腹壁淺表淋巴道引流至腋窩副淋巴結，而后肢皮下的淋巴則沿腹部深淋巴道引流。

本研究中還發(fā)現，大小鼠腋窩淋巴結的結構并不相同。大鼠腋窩下有3個淋巴結，前爪的淋巴僅流向了窩頂部外側的一個淋巴結。KM小鼠和SCID小鼠腋窩淋巴結結構相似，分成了上下兩葉，前爪的淋巴流向腋窩淋巴結的上葉。此結果表明大小鼠腋窩淋巴結叢不僅匯集前爪的淋巴回流，還收納著更廣泛區(qū)域的淋巴回流，如軀干和背部等部位[9]。但每個或每葉腋窩淋巴結收納的淋巴回流區(qū)域是否有交叉尚待進一步證實。

綜上所述，三種鼠在后足、尾部和前掌的淋巴引流各不相同。兩種小鼠在尾部和前掌皮下的淋巴引流相似，而大鼠與小鼠間差別較大。探明不同大小鼠淋巴引流的特點將為淋巴系統相關研究提供正確的解剖位點及理論依據。

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7.虞研原，張寶昌，金審初.小白鼠淋巴系統分布之研究.杭州師范學報（自然科學版）[J]，1982，4:103-107.

8.呂順增，李超，趙婧，等.3種染料示蹤劑對鼠肢體淋巴結示蹤顯色時間和淋巴管走行途徑的比較研究[J].中國現代普通外科進展，2012，15(10):767-770.

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10.Maria.I.Harrell，Brian M，Alanna Ruddell.Lymph Node Mapping in the Mouse[J].J Immunol Methods，2008，332(1-2):170-174.

（2015-04-28收稿）

Comparative study of lymphatic drainage patterns on three species of murine

Han Jianhong，Gan Zhonglin，Li Dabing，Zhu Xianyu，Lin Yan
Institute of Medical Oncology，Sichuan Medical University

Objective：To investigate the patterns of lymphatic drainage in KM mice，SCID Beige mice and SD rats and their differences.Methods:The animals’lymphatic drainages were observed and identified through injecting ink into their hind feet，tails or forepaws subcutaneously.Results：①The lymph in hind foot went from hind leg through popliteal lymph node to iliac lymph node in SCID Beige mice，while in KM mice lymph drained through iliac lymph node to renal lymph node，and in SD rats there was a minor drainage to inguinal lymph node while mostlymph returned to popliteallymph node(P＜0.05).②In KM and SCID Beige mice lymph in tails went through inguinal lymph node to subsidiary-axillary lymph node(P=1.000)，but in SD rats，lymph drained through bilateral popliteal lymph nodes and bilateral gluteal lymph nodes into bilateral iliac lymph nodes(P＜0.05).③In two kinds of mice lymph in forepaws drained to subsidiary-axillary lymph node and up-axillary lymph node(P=1.000)，but drained to subsidiary-axillary lymph node and outside one of the three axillary lymph nodes in SD rats(P＜0.05).Conclusion：The lymphatic drainage from hind foot，tail and forepaw are differentin three species of murine.

Lymphatic drainage;SCID Beige;KM mouse;SD Rat

Q95-33

A

10.3969/j.issn.1000-2669.2015.04.018

*四川省科技廳創(chuàng)新苗子工程（2014-084）

韓建紅（1985-），女，實習研究員，碩士

藺艷，（1973-），女，副教授，碩士，E-mail:lydemail@lzmc.edu.cn