芪冬活血飲對急性肺損傷模型大鼠caveolin-1和細胞因子的影響

洪輝華蔡宛如

芪冬活血飲對急性肺損傷模型大鼠caveolin-1和細胞因子的影響

洪輝華1蔡宛如2

目的 觀察芪冬活血飲對脂多糖所致大鼠急性肺損傷（ALI）小窩蛋白-1（Cav-1）及細胞因子的影響。方法 將50只SD大鼠隨機分為空白組、模型組、芪冬活血高、中、低組，每組10只。通過氣道內(nèi)滴注脂多糖建立大鼠急性肺損傷模型。芪冬活血高、中、低劑量組造模前24、12h及造模后12h分別以16、8、4mL/kg芪冬活血飲灌胃，空白組及模型組以8mL/kg生理鹽水灌胃。各組大鼠均在造模后24h處死，收集標本。檢測肺泡灌洗液細胞因子變化；常規(guī)HE染色，光鏡下觀察肺組織病理變化；免疫組化法檢測肺組織Cav-1表達；RT-PCR檢測Cav-1mRNA表達。結果 ①芪冬活血飲可以減少肺損傷大鼠肺泡結構破壞，肺水腫及炎性細胞浸潤。②空白組TNF-α、IL-1β、IL-10含量最低，與其余各組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.01）。模型組TNF-α、IL-1β含量均高于芪冬活血中、高劑量組[（52.59±12.78）pg/mL比（39.87±8.14）pg/mL和（27.78±10.99）pg/mL，（42.39± 11.15）pg/mL比（33.83±8.38）pg/mL和（24.90±7.06）pg/mL，P＜0.05或P＜0.01]，IL-10含量低于芪冬活血中、高劑量組[（15.63±2.13）pg/mL比（20.98±2.17）pg/mL和（22.33±2.31）pg/mL，P＜0.05或P＜0.01]。芪冬活血中、高劑量組TNF-α、IL-1β比較差異有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。③Cav-1免疫組化積分空白組（3.08±1.03）分，模型組（8.58±1.39）分。除模型組與芪冬活血低劑量組免疫組化積分（7.33± 1.16）分比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），空白組、模型組與芪冬活血中、高劑量組[（7.08±1.24）分、（5.91±1.11）分]比較P均＜0.01；Cav-1免疫組化積分及mRNA相對表達芪冬活血高劑量組低于低劑量組［（5.91±1.11）比7.33±1.16）］和（35.27±3.31比62.34±5.66），P＜0.01]。結論 芪冬活血飲對LPS誘導的大鼠ALI有保護作用，其機制可能與抑制Cav-1表達，降低促炎細胞因子TNF-α、IL-1β水平，升高抗炎細胞因子IL-10水平，糾正炎癥失衡有關。

大鼠；急性肺損傷；小窩蛋白-1；細胞因子；芪冬活血飲

空白組大鼠肺呈均勻淡粉紅色，包膜光滑，彈性好，表面未見病損灶；光鏡下肺組織結構完整，肺泡結構清晰，肺泡間隔無水腫，肺泡腔內(nèi)未見水腫液，偶見肺間質白細胞少量增加。模型組大鼠肺體積顯著增大，呈暗紅色，包膜下充血水腫明顯，彈性降低，表面可見斑片出血；光鏡下肺泡結構破壞，肺泡內(nèi)廣泛積液水腫，肺泡間隔增厚，肺泡變小伴出血。各治療組肺包膜下充血水腫較空白組減輕，鏡下肺泡結構不同程度破壞，肺泡內(nèi)有炎癥細胞侵潤，但程度均較模型組輕。

圖2 各組大鼠肺組織Cav-1表達

模型組Cav-1表達非常明顯，在氣道上皮細胞胞漿最為明顯，浸潤的炎癥細胞浸潤、組織細胞、吞噬細胞、血管的內(nèi)皮細胞甚至平滑肌細胞的胞漿和成纖維細胞等可見陽性表達；空白對照組氣道上皮細胞表達較明顯，肺泡上皮細胞也有表達，其余細胞未見明顯表達。各中藥治療組表達明顯，但均弱于模型組，也以氣道上皮細胞最為明顯，余如肺血管內(nèi)皮細胞，巨噬細胞、肺泡上皮細胞等也有較多表達，其中低劑量組表達最明顯。

急性肺損傷（acute lung injury，ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是指心源性以外的各種肺內(nèi)、外致病因素導致的急性、進行性呼吸衰竭。至今，ALI確切的發(fā)病機制尚未完全闡明，目前認為多種效應細胞如中性粒細胞、巨噬細胞、血管內(nèi)皮細胞等在肺內(nèi)聚集、激活導致氧化應激及TNF-α、IL-1β、NO等促炎介質增加，IL-10、IL-13等抗炎介質釋放不足，使肺內(nèi)炎癥介質和抗炎癥介質的失衡是ALI發(fā)生發(fā)展的關鍵環(huán)節(jié)[1-2]。近年研究發(fā)現(xiàn)小窩蛋白-1（caveolin-1，Cav-1）與炎癥介質/抗炎介質的失衡密切相關，在ALI發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮極為重要的調控作用[3]。本課題組通過長期的臨床實踐，對ALI確立了以清熱解毒、祛瘀通腑、益氣養(yǎng)陰為主的治療原則，采用虎杖、當歸、黃芪、麥冬等藥物組成“芪冬活血飲”。前期的實驗研究已經(jīng)證實“芪冬活血飲”對急性肺損傷大鼠具有良好的保護作用，其機制與“芪冬活血飲”減少促炎癥介質TNF-α、內(nèi)皮素-1、肺表面活性蛋白A分泌，增加抗炎介質IL-10分泌，糾正促炎/抗炎介質失衡有關[4-7]，但其炎癥介質的作用是否與Cav-1有關尚不明確。本研究擬觀察芪冬活血飲對急性肺損傷大鼠細胞因子及肺組織Cav-1蛋白和mRNA的影響，進一步探討其保護ALI大鼠的機制。

1 實驗材料

1.1 動 物 健康雄性SD大鼠50只，清潔級，體質量（200±20）g，由浙江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供，大鼠6只一籠，飲水瓶自由飲水，飼料為顆粒全價飼料，環(huán)境為屏障環(huán)境，12 h明暗交替。實驗動物使用許可證號：SYXK（浙）20080115。

1.2 藥 品 芪冬活血飲（黃芪、虎杖各20g，麥冬、當歸各12g）藥材由浙江省中醫(yī)院中藥房提供，由浙江中醫(yī)藥大學制劑室制成質量體積比1∶1湯劑，滅菌處理后，-4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 主要試劑 LPS coli 055:B5（批號L2880）購自Sigma公司。大鼠 TNF-αELISA試劑盒（批號RT20135528B）、大鼠IL-1βELISA試劑盒 (批號RT20138526B)、大鼠IL-10 ELISA試劑盒（批號RT20131025B）購自RND公司。免疫組化二步法Envision試劑盒（批號26F1779A）購自DAKO公司，Cav-1免疫組化試劑盒（批號SC-894 E2511）、DAB顯色液（批號08M1779A）均購自santacruz公司。Trizol Reagent（批號40950732）購自BioBasic公司；RTPCR定量試劑盒（批號DRR041A），cDNA合成反轉錄試劑盒（批號CK101D），DNA Marker（批號DL 2000）均購自TAKARA公司。

1.4 主要儀器 石蠟切片機（德國Leica公司HM340E型），熒光顯微鏡攝像機（日本OLYMPUS公司BX20型），定量PCR儀器（美國ROCHE公司ABI 7500型），臺式高速冷凍離心機（Eppendorf公司Certrifuge 5417R型），電泳系統(tǒng)（Bio-RAD公司Mini-Proten Tetra System型），凝膠成像儀（Bio-RAD公司ChemiDoc XRS+System）。

2 實驗方法

2.1 模型建立 各組大鼠均經(jīng)異氟烷霧化麻醉，分離氣管；將LPS配置成3mg/mL溶液，按1.5mg/kg劑量緩慢注射入大鼠氣管中。并將大鼠左右上下?lián)u晃，讓LPS溶液均勻分布于SD大鼠肺組織中?？瞻捉M采用等量生理鹽水氣管內(nèi)滴注。

2.2 分組及給藥 SD大鼠50只隨機數(shù)字表法分成空白組、模型組及芪冬活血低、中、高劑量組，每組10只。芪冬活血低、中、高劑量組造模前24、12h及造模后12h分別予4、8、16mL/kg芪冬活血飲灌胃，模型組和空白組各時間點予8mL/kg生理鹽水灌胃。

2.3 標本采集及檢測 造模后24h腹腔注射戊巴比妥溶液麻醉大鼠（劑量為3ml/kg），開胸取右肺，取右下肺置痰杯-80℃冰箱保存PCR測定用。余肺中性緩沖福爾馬林（pH7.4）固定24h后，石蠟包埋切片。

2.3.1 肺泡灌洗液細胞因子變化 左肺用于肺泡灌洗。結扎右主支氣管，5.5號靜脈注射針至左主支氣管，用無菌手術縫合線綁扎主氣管及注射針，使其固定并密封。注射針接5mL針筒注入3mL生理鹽水可見左肺膨起，輕輕按摩30s，再用20mL針筒緩慢回抽，反復3次，回收率在50%以上?；厥找悍盅b入離心管中，低速離心機3000r離心15min，上清液-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。ELISA法測TNF-α、IL-1β、IL-10。操作按說明書。

2.3.2 病理觀察 常規(guī)HE染色，光鏡下觀察各組肺組織病理變化。

2.3.3 肺組織Cav-1蛋白表達 采用免疫組化二步法檢測。肺組織Cav-1蛋白表達，在細胞漿內(nèi)或細胞核內(nèi)出現(xiàn)黃、棕色顆粒為陽性細胞。并參照文獻[8]計算免疫組化積分：將陽性細胞按染色強度打分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分（染色深淺需與背景比較）；再將陽性細胞所占的百分比打分，0分為陰性，1分為陽性細胞≤10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%，4分＞75%；兩者的乘積為免疫組化表達積分。

2.3.4 肺組織Cav-1mRNA表達 采用RT-PCR檢測。肺組織液氮保存，采用Trizol一步法試劑盒提取肺組織細胞總RNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定總RNA純度、完整性，紫外分光光度儀定量后，取總RNA逆轉錄為cDNA。根據(jù)美國NCBI數(shù)據(jù)庫提供的mRNA全基因序列，采用Primer 5.0引物設計軟件和引物設計原則進行PCR引物的設計，由上海生物工程有限公司合成。引物序列：Cav-1的上游引物為5'-GGACTCAACCCTGTGCTCCCTT-3'，下游引物為5'-GGCTTCGCAGCGTTACAGACTAT-3'，擴增片段長度154bp；18-s的上游引物為5'-GAATTCCCAGTAA GTGCGGGTCATA-3'，下游引物為5'-CGAGGGCCTCACTAAACCATC-3'，擴增片段長度為105bp。進行PCR反應。電泳分離、顯色成像。以DNA maker為標準，Marker為TAKARA DL 2000，根據(jù)擴增產(chǎn)物片段大小來鑒定目的基因片段，以18-s光度值為內(nèi)參析，所有數(shù)據(jù)皆以均數(shù)±標準差（±s）表示，計量資料各組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 實驗結果

3.1 各組大鼠肺組織病理學變化 空白組大鼠肺呈均勻淡粉紅色，包膜光滑，彈性好，表面未見病損灶；光鏡下肺組織結構完整，肺泡結構清晰，肺泡間隔無水腫，肺泡腔內(nèi)未見水腫液，偶見肺間質白細胞少量增加。模型組大鼠肺體積顯著增大，呈暗紅色，包膜下充血水腫明顯，彈性降低，表面可見斑片出血；光鏡下肺泡結構破壞，肺泡內(nèi)廣泛積液水腫，肺泡間隔增厚，肺泡變小伴出血。各治療組肺包膜下充血水腫較空白組減輕，鏡下肺泡結構不同程度破壞，肺泡內(nèi)有炎癥細胞浸潤，但程度均較模型組輕。見圖1（封三）。

3.2 肺泡灌洗液細胞因子變化 空白組TNF-α、IL-1β、IL-10含量最低，與其余各組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.01）。模型組TNF-α、IL-1β含量高于芪冬活血飲高、中劑量組（P＜0.01，P＜0.05），而IL-10含量低于芪冬活血飲高、中劑量組（P＜0.01，P＜0.05），與芪冬活血低劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。低劑量組TNF-α、IL-1β含量最高，中劑量組次之，高劑量組最低，三組間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或P＜0.05），低劑量組與中劑量組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。芪冬活血低劑量組IL-10含量明顯低于中、高劑量組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01），見表1?？?，以待測基因與18-s的比值為待測基因的相對表達量，目的基因的相對表達水平以相對表達量（2-△Ct×104）進行分析。PCR反應條件：95℃，1min；40個循環(huán)：95℃，10；64℃,25s（收集熒光）；熔點曲線分析55℃～95℃。

2.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分

表1 各組大鼠肺泡灌洗液細胞因子比較（pg/mL，±s）

表1 各組大鼠肺泡灌洗液細胞因子比較（pg/mL，±s）

注：與空白組比較，▲P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與芪冬活血高劑量組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與芪冬活血中劑量組比較，▽P＜0.01；TNF-α：腫瘤壞死因子；IL：白介素

組別空白組模型組芪冬活血高劑量組芪冬活血中劑量組芪冬活血低劑量組只數(shù)8 8 8 8 8 TNF-α 7.58±1.77 52.59±12.78▲27.78±10.99▲△△39.87±8.14▲△* 43.33±9.62▲** IL-1β 8.25±1.27 42.39±11.15▲24.90±7.06▲△△33.83±8.38▲△* 39.36±7.17▲** IL-10 7.71±1.77 15.63±2.13▲22.33±2.31▲△△20.98±2.17▲△16.01±2.33▲**▽

3.3 各組大鼠肺組織Cav-1表達 免疫組化結果顯示，模型組Cav-1表達非常明顯，在氣道上皮細胞胞漿最為明顯，浸潤的炎癥細胞、組織細胞、吞噬細胞、血管的內(nèi)皮細胞甚至平滑肌細胞的胞漿和成纖維細胞等也可見陽性表達；空白對照組氣道上皮細胞表達較明顯，肺泡上皮細胞也有表達，其余細胞未見明顯表達。芪冬活血各劑量組表達明顯，但均弱于模型組，也以氣道上皮細胞最為明顯，余如肺血管內(nèi)皮細胞、巨噬細胞、肺泡上皮細胞等也有較多表達，其中低劑量組表達最明顯。見圖2（封三）。

3.4 各組大鼠肺組織Cav-1表達積分比較 空白組Cav-1表達積分最低，模型組最高（P＜0.01）。芪冬活血中、高劑量組Cav-1表達積分顯著低于模型組（P＜0.01）。芪冬活血高劑量組Cav-1積分明顯低于低劑量組（P＜0.01），見表2。

表2 各組大鼠肺組織Cav-1表達積分比較（分，±s）

表2 各組大鼠肺組織Cav-1表達積分比較（分，±s）

注：與空白組比較，▲P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與芪冬活血高劑量組比較，*P＜0.01；Cav-1：小窩蛋白-1

組別空白組模型組芪冬活血高劑量組芪冬活血中劑量組芪冬活血低劑量組鼠數(shù)6 6 6 6 6 Cav-1表達積分3.08±1.03 8.58±1.39▲5.91±1.11▲△7.08±1.24▲△△7.33±1.16▲*

3.5 各組大鼠肺組織Cav-1mRNA表達量比較 空白組相對表達量最低，模型組相對表達量最高。空白組和模型組與其余各組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；三個中藥治療組Cav-1mRNA相對表達量低劑量組最高，高劑量組最低。三組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見圖3（封四），表3。

表3 各組大鼠肺組織Cav-1 mRNA表達量比較（2△Ct×104，±s）

表3 各組大鼠肺組織Cav-1 mRNA表達量比較（2△Ct×104，±s）

注：與空白組比較，▲P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.01；與芪冬活血高劑量組比較，*P＜0.01；與芪冬活血中劑量組比較，▽P＜0.01

組別空白組模型組芪冬活血高劑量組芪冬活血中劑量組芪冬活血低劑量組鼠數(shù)6 6 6 6 6 Cav-1 mRNA 22.29±6.49 98.03±11.00▲35.27±3.31▲△45.15±3.83▲△* 62.34±5.66▲△*▽

4 討論

ALI/ARDS是一種呼吸系統(tǒng)急危重癥，以肺微血管通透性增加引發(fā)的彌漫性肺間質和肺泡腔水腫及炎性細胞浸潤為主要病理改變[1]。模型組大鼠肺泡結構破壞，肺泡內(nèi)廣泛積液水腫伴出血，大量炎癥細胞浸潤，各芪冬活血飲治療組損傷程度均有不同程度減輕，其中以高劑量組效果最為明顯。表明采用LPS氣道內(nèi)滴注方法復制大鼠肺損傷模型成功，芪冬活血飲對其有保護作用，且劑量越高保護作用越強。

TNF-α、IL-1β、NO等促炎介質和IL-4、IL-10、IL-13等抗炎介質之間的平衡嚴重失調，是ALI發(fā)生發(fā)展的關鍵環(huán)節(jié)。其中TNF-α起關鍵作用，IL-1β起協(xié)同作用，兩者相互誘導刺激，啟動炎癥級聯(lián)反應導致AIL/ARDS。IL-10是重要的抗炎因子，可廣泛抑制多種炎癥介質活性，重建體內(nèi)炎癥介質及抗炎介質的平衡[2，9-11]。本研究結果顯示，各實驗組TNF-α、IL-1β、IL-10濃度均高于空白對照組，表明LPS刺激可同時促使ALI大鼠分泌TNF-α、IL-1β和IL-10。各中藥治療組TNF-α、IL-1β低于模型組，IL-10高于模型組，表明芪冬活血飲既能降低TNF-α、IL-1β等促炎介質水平，又能增加IL-10加強抗炎反應，從而減輕肺組織損傷。表明芪冬活血飲能調控ALI大鼠促炎/抗炎介質平衡，對肺損傷大鼠具有保護作用。

小窩（caveolae）屬于脂筏的一種，是50～100nm的燒瓶樣質膜內(nèi)陷,存在于絕大多數(shù)組織細胞的質膜上，小窩蛋白-1（caveolin-1，Cav-1）是Caveolae結構和功能的標志蛋白，既往研究主要集中在信號轉導、膽固醇轉運、細胞內(nèi)吞等方面。近年研究發(fā)現(xiàn)，Cav-1廣泛存在于血管內(nèi)皮細胞、I型肺泡上皮細胞及成纖維細胞的細胞膜上，在中性粒細胞和巨噬細胞上也有分布，在氧化應激，炎癥細胞遷移、活化，細胞凋亡和炎癥介導的組織損傷等方面均發(fā)揮著重要的調節(jié)作用，是ALI/ARDS發(fā)生發(fā)展的重要調節(jié)蛋白，尤其其對炎癥反應的調控作用日益受到關注[3]。

Garrean等[12]研究發(fā)現(xiàn)，和脂多糖（LPS）誘導的ALI野生型小鼠比較，Cav-1基因敲除小鼠可通過內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（eNOs）途徑抑制核轉錄因子κB（NF-κB）的活性，減少促炎細胞因子的合成與分泌，使小鼠生存率顯著提高。Wang等[13]證明，Cav-1能與TLR4相互作用并經(jīng)血紅素氧化酶-1途徑抑制TLR4相關信號傳導而減輕ALI病變程度。最近Mirza等[14]實驗結果也證實，Cav-1基因敲除小鼠受LPS刺激后，eNOS被激活、炎癥相關TLR4信號傳導及轉錄因子NF-κB活化被抑制，細胞內(nèi)前炎性細胞因子或致炎細胞因子（proinflammatory cytokines）水平呈現(xiàn)為eNOS濃度依賴性減少，從而顯著提高了ALI小鼠生存率。上述研究表明Cav-1可與TLR4相互作用，通過NF-κB及p38MAPK等信號傳導通路，上調促炎細胞因子表達，在ALI相關炎癥反應過程中發(fā)揮重要作用。

三中藥治療組間免疫組化積分比較，中劑量組低于低劑量組，但差異無統(tǒng)計學意義（P＝0.069），而mRNA比較兩組有差異，可能與免疫組化積分為陽性細胞占比和染色強度的乘積，是一種半定量指標，而mRNA為定量指標，且mRNA比較的是相對表達量（單位為2△Ct×104），放大了兩組間的差異有關。

模型組及芪冬活血飲各治療組Cav-1免疫組化表達均明顯增強。與空白組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），提示LPS刺激后肺內(nèi)Cav-1表達明顯升高。免疫組化積分及mRNA表達，芪冬活血中、高劑量組與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），提示中、高劑量芪冬活血飲可顯著減少Cav-1蛋白及mRNA的表達。三中藥治療組間Cav-1 mRNA相對表達量比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），表明芪冬活血飲抑制Cav-1mRNA表達作用與劑量相關。

以上結果表明，芪冬活血飲對LPS誘導的大鼠ALI有保護作用，其機制與抑制Cav-1表達，糾正炎癥因子失衡有關。

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（收稿：2014-11-05 修回：2015-01-05）

Effects of Qidong Huoxue Decoction on Caveolin-1 and Cytokines in Acute Lung Injury Rats

HONG Hui-hua1,CAIWanru21Department of Respiratory Diseases,the First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310006),China;2Department of Respiratory Diseases,the Second Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310005),China

Objective To observe the effects of Qidong Huoxue Decoction（QD）on caveolin-1 and cytokines in rats with acute lung injury（ALI）induced by lipopolysaccharide（LPS）.M ethods Fifty SD rats were random ly divided into 5 groups:control group,model group,and high-,medium-,and low-dose QD groups（10 in each group）.The ALImodel was established by intratracheal instillation of LPS.QD was administrated via esophagus to rats with doses of 16,8,and 4mL/kg in high-,medium-,and low-dose QD groups,respectively,at 24,12h before modeling and 12h after modeling;normal saline was used in control and model groups with dose 8mL/kg.All rats were executed at 24h after modeling to detect cytokine levels in bronchoalveolar lavage fluid（BLF）,pathological changes in pulmonary tissue with light,Cav-1 expression in plumonary tissue with immunohistochemistry and Cav-1 mRNA expression with RT-PCR.Results HE staining showed that QD reduced the damage to pulmonary alveolar structure,pulmonary edema and inflammatory cells infiltration in rats.The levels of TNF-α,IL-1β,and IL-10were the lowest in control group compared to other groups（all P＜0.01）.The levels of TNF-αand IL-1βin model group were significantly higher than those of high-/meidium-dose groups（TNF-α:52.59±12.78pg/mL vs 39.87±8.14 and 27.78±10.99pg/mL,IL-1β:42.39±11.15pg/mL vs 33.83±8.38 and 24.90±7.06pg/mL,P＜0.05 or P＜0.01）,while IL-10 was opposite（15.63±2.13pg/mL vs 20.98±2.17 and 22.33±2.31pg/mL,P＜0.05 or P＜0.01）.Significant difference in the levels of TNF-αand IL-1βwas found between high-dose QD group and medium-dose QD group（P＜0.05）.The immunohistochemistry score（IHC）and the mRNA relative expression of Cav-1 in control group was the lowest,while those in model group was the highest.Significant differences in the IHC and mRNA relative expression of Cav-1 were found among control group,model group and QD groups（P＜0.01）except the difference in the IHC between model group and low-dose group（8.58±1.39 vs 7.33±1.16,P＞0.05）.The IHC and mRNA expression of Cav-1 in high-dose QD group were significantly lower than those of low-dose QD group（IHC:5.91±1.11 vs 7.33±1.16;mRNA:35.27±3.31 vs 62.34±5.66,P＜0.01）.Conclusion QD has a protective effect on LPS-induced ALI in rats by inhibiting Cav-1,decreasing IL-10,and increasing IL-1βand TNF-α.

rats;acute lung injury;caveolin-1;cytokine;Qidong Huoxue Decoction

國家自然基金（No.81273678）；浙江省自然基金（No.LQ12H29003）

1浙江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院呼吸科（杭州 310006）；2浙江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院呼吸科（杭州 310005）

洪輝華，Tel：13867193499；E-mail：hhjoe998@sin.com