胃癌組織CDK7和SKP2的表達(dá)變化及意義

劉慶濱，陳艷昕，黃江梅

(秦皇島市第一醫(yī)院，河北秦皇島066000)

細(xì)胞周期素依賴(lài)性激酶7(CDK7)是細(xì)胞周期素活化激酶(CAK)的重要組成部分，調(diào)控細(xì)胞周期，影響細(xì)胞增殖。S期激酶相關(guān)蛋白2(SKP2)是人類(lèi)F-box蛋白家族中成員之一，DNA復(fù)制所必需，介導(dǎo)底物的泛素化降解，亦參與細(xì)胞周期的調(diào)控。本文中，我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CDK7與SKP2在胃癌中的表達(dá)，并探討其表達(dá)變化與胃癌進(jìn)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2009年1月～2010年12月秦皇島市第一醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)、臨床資料完整的胃腺癌組織120份，患者男87例、女33例，年齡39～82歲、中位年齡63.5歲。術(shù)前均未經(jīng)放療和化療，均行胃癌根治術(shù)。另取30份正常胃黏膜組織，患者男22例、女8例，年齡35～79歲、中位年齡59.6歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法 試劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司，所有標(biāo)本采用免疫組織化學(xué)通用型二步法。主要步驟:石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水;切片置于檸檬酸緩沖液(pH 6.0)中修復(fù)，中低溫微波修復(fù)20min，自然冷卻;3%H2O2室溫孵育10min，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶;滴加一抗:CDK7濃度1∶200，SKP2濃度1∶200，4℃冰箱過(guò)夜;滴加通用型IgG抗體(Fab段)-HRP多聚體，37℃溫箱孵育0.5 h;增敏二氨基聯(lián)苯胺顯色，顯微鏡下控制反應(yīng)時(shí)間5～20min;蘇木精復(fù)染，二甲苯透明，封片。用PBS代替一抗作空白對(duì)照。

1.2.2 結(jié)果判定方法 盲法判定結(jié)果，每張切片分別由兩位高年資病理醫(yī)師獨(dú)立閱片，一致肯定為陽(yáng)性者視為陽(yáng)性。二者免疫組化結(jié)果均以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞，每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比，以＜10%為(-)，10%～25%為(+)，26%～50%為(++)，＞50%為(+++)。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)以率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CDK7、SKP2在胃癌組織中的表達(dá) CDK7在正常胃黏膜組織中8份(26.7%)表達(dá)陽(yáng)性，胃腺癌組織中109份(90.8%)表達(dá)陽(yáng)性，其在胃癌中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常胃黏膜組織(P＜0.05)。SKP2在正常胃黏膜組織中僅1例(3.3%)表達(dá)陽(yáng)性，胃腺癌組織中有81份(67.5%)表達(dá)陽(yáng)性，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。

2.2 CDK7、SKP2的表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表1。

2.3 CDK7與SKP2的相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，CDK7與SKP2在胃癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.832，P ＜0.05)。

3 討論

細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制是由復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)組成，其調(diào)控紊亂是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要分子事件。參與細(xì)胞周期調(diào)控的主要因子有細(xì)胞周期素(cyclin)、CDK、細(xì)胞周期素依賴(lài)性激酶抑制劑及諸多調(diào)節(jié)因子。

表1 CDK7、SKP2的陽(yáng)性表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系［例(%)］

CDK7是細(xì)胞周期進(jìn)展和細(xì)胞發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子［1］，相對(duì)分子質(zhì)量為40 kD，可與 cyclin H 及MAT 1構(gòu)成三聚體，即細(xì)胞周期素激酶活化激酶(CAK)，通過(guò)CAK調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的各個(gè)時(shí)相。據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)推測(cè)，CDK7可以通過(guò)以下環(huán)節(jié)參與細(xì)胞周期的調(diào)控過(guò)程，如催化CDK磷酸化，從而進(jìn)一步參與cyclin-CDK復(fù)合物活性的調(diào)控;調(diào)節(jié)總轉(zhuǎn)錄因子ⅡH的活性，影響RNA轉(zhuǎn)錄的起始和延長(zhǎng);可能與p27、p53等基因協(xié)同作用。其過(guò)表達(dá)會(huì)引起細(xì)胞周期紊亂，促進(jìn)DNA復(fù)制與有絲分裂進(jìn)行，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖與分化異常。CDK7從基因水平上與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)，其陽(yáng)性表達(dá)的基因節(jié)段之一與CDK7具有高度的同源性(99%相同)［2］。本研究結(jié)果顯示，CDK7在胃癌組織中表達(dá)明顯高于正常胃組織，且在胃癌中的陽(yáng)性表達(dá)率與患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，而與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期呈正相關(guān)，提示CDK7可能參與胃癌的發(fā)生和進(jìn)展，可能成為胃癌預(yù)后的評(píng)估指標(biāo)和治療的新靶點(diǎn)。

SKP2基因定位于人染色體5p13.2，作為一種新的癌基因，其異常表達(dá)與許多惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)［3］。SKP2 由 F-Box序列、“Linker”序列、蛋白—蛋白相互作用模塊如亮氨酸重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域依次連接構(gòu)成。SKP2是人類(lèi)F-Box蛋白家族中成員之一，DNA復(fù)制所必需，在許多細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的泛素依賴(lài)性蛋白水解途徑中起到特異性識(shí)別底物的作用，介導(dǎo)底物的泛素化降解，從而參與細(xì)胞周期的調(diào)控，與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，包括cyclinD1、p27kipl在內(nèi)的許多細(xì)胞周期調(diào)控因子都是SKP2作用的底物，通過(guò)作用底物來(lái)影響細(xì)胞周期。本研究結(jié)果顯示，在胃癌中SKP2高表達(dá)與胃癌的分化程度相關(guān)，與性別、年齡、腫瘤大小、部位、浸潤(rùn)深度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間均無(wú)相關(guān)性，與趙勇等［4］研究結(jié)果基本一致，提示SKP2表達(dá)增加可能促進(jìn)腫瘤分化，與腫瘤的發(fā)生相關(guān)。

本研究結(jié)果還顯示，CDK7與SKP2在胃癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，提示二者可能協(xié)同作用于細(xì)胞周期，共同影響胃癌的發(fā)生發(fā)展，具體機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。

［1］Malumbres M，Barbacid M.Cell cycle，CDKs and cancer:a changing paradigm［J］.Nat Rev Cancer，2009，9(3):153-166.

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［3］Rodier G，Makria C，Coukombe P，et al.P107 inhibits G1 to S phase progresson by down-regulaton expresson of F-box protein SKP2［J］.J Cell Bol，2005，168(1):55-66.

［4］趙勇，高建飛，章必成，等.胃癌中Cks1，P27Kip1和SKP2蛋白的表達(dá)［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，27(2):168-169.