“膚敏膏”對濕疹皮炎模型的影響

李靜平，起榮林

1云南中醫學院，云南昆明650500；2昆明滇虹藥業股份有限公司

“膚敏膏”對濕疹皮炎模型的影響

李靜平1，起榮林2

1云南中醫學院，云南昆明650500；2昆明滇虹藥業股份有限公司

目的：研究“膚敏膏”對豚鼠濕疹皮炎模型皮膚組織病理學的影響，探討其治療作用及機理。方法：以2，4-二硝基氯苯(DNFB)建立豚鼠濕疹皮炎模型，采用HE常規病理及透射電鏡超微病理學檢測方法，觀察“膚敏”膏對實驗性豚鼠濕疹皮炎的治療作用。結果：“膚敏膏”能改善動物濕疹皮炎模型皮膚組織病變，減少炎性細胞浸潤。結論：“膚敏膏”對Th1/Th2細胞平衡失調所引起的后續皮膚炎癥反應和組織損傷有明顯抑制作用，從而間接調節Th1/Th2細胞動態平衡，改善過敏癥狀。

濕疹皮炎；豚鼠；膚敏膏

“膚敏膏”由云南省名中醫李慶生教授在長期臨床實踐和科研工作中總結、結合文獻篩選確定，前期各項臨床研究已證實“膚敏膏”為療效確切、主要用于治療濕疹等過敏性皮膚病的有效復方制劑。

輔助細胞亞群(Th1/Th2)功能失調是誘發過敏性皮膚病的關鍵因素，是決定過敏性皮膚病炎癥反應和組織損傷發生的前提［1］。Th細胞分泌多種Th1和Th2型細胞因子如白細胞介素(IL-2、4、5、13)，IFN-γ，TNF-β、CSF等，既可刺激B細胞合成大量IgE，介導經典Ⅰ型超敏反應；又能趨化嗜酸性粒細胞、中性粒細胞等炎性細胞浸潤，或直接殺傷靶細胞，激發Th2細胞主導的Ⅳ型超敏反應，從而引起皮膚炎癥反應和組織損傷［2］。因此，本研究從病理形態學角度探索“膚敏”對Thl/Th2細胞的干預調節作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級豚鼠，體質量200～400 g，雌雄兼用，由四川醫科大學實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(川)2011-0007。

1.2 實驗用藥與試劑“膚敏膏”浸膏(總提物)，褐色粉末，提取率為29.8%，由云南省藥物研究所科研科提供；人用量口服7.7g/次，3次/d，共23g (相當于77 g生藥)。實驗時用電子天平稱取適量膚敏浸膏粉，加蒸餾水稀釋后配制成適當濃度的溶液供動物灌胃用；2，4二硝基-1-氟苯(DNCB，上海化學試劑公司)；丙酮、橄欖油等其他常用試劑均市購；分析純。

1.3 儀器 TGL-20M高速臺式離心機(上海第三儀器廠生產)；XSP-18A型生物顯微鏡(江南光學儀器廠生產)；JEDL-100CE透射電子顯微鏡(南京皓海儀器儀表有限公司生產)；PL403型Sar to-rius電子天平(上海第二天平儀器廠生產)。

1.4 方法

1.4.1 豚鼠濕疹皮炎模型的建立［3-4］采用2，4-二硝基氯苯(DNCB)一次大劑量致敏，多次小劑量激發的方法誘發豚鼠濕疹皮炎模型。豚鼠背部去毛，用5%DNCB-丙酮溶液50μL涂于去毛皮膚上致敏，2周后豚鼠右耳內測涂0.1%DNCB-丙酮溶液100μL激發，每周1次，連續4周。第4次激發后48小時，即造成豚鼠變應性濕疹皮炎模型。模型評判標準：豚鼠右耳出現明顯腫脹、充血，表皮角化并伴有一定量丘疹或紅斑，少許滲液，出現血痂、脫皮等。

1.4.2 實驗分組 豚鼠30只，雌雄各半，隨機分為3組，每組10只，分別為“膚敏膏”組、模型組和正常組。于致敏當天灌胃給藥。劑量為6.45 g/kg,模型組和正常組予同體積生理鹽水。灌胃每日1次，連續灌胃30天(至末次激發后第2天止)。然后處死豚鼠，用直徑8mm打孔器沿左右耳廓相同部位打孔取材，制作切片。

1.4.3 觀測項目

1.4.3.1 常規病理學檢測［5］取耳組織，10%福爾馬林液固定，石蠟包埋、切片、HE(蘇木精-伊紅)染色，光鏡下觀察組織學改變。

1.4.3.2 超微病理學檢測［6］取耳組織，2.5%戊二醛多聚甲醛固定，再由1%四氧化鋨固定，乙醇逐級脫水，Epon812環氧樹脂包埋，超薄切片約50～70nm厚，醋酸鈾、檸檬酸鉛染色，在JEDL-100CX透射電子顯微鏡下觀察組織學改變。

2 結果

2.1 光鏡觀察 與正常組比較，模型組動物表皮增厚、角化過度或灶性角化不全及淺表結痂、表皮突延長增厚，棘層細胞水腫肥厚、顆粒層肥厚等情況；真皮血管擴張充血、內皮細胞腫脹，細胞間水腫，炎性細胞浸潤(淋巴細胞、嗜酸性細胞、肥大細胞)等。與模型組比較，用藥后“膚敏膏”組豚鼠以上皮膚病變情況不同程度地減輕或抑制。表皮輕度角化，角化不全呈小灶性，且僅偶見，表皮稍增厚或增厚不明顯，水腫細胞偶見；真皮內少數炎性細胞浸潤，偶見嗜酸性粒細胞，血管內皮細胞未見或僅輕度腫脹，見圖1。

圖1 豚鼠常規病理學圖片

2.2 電鏡觀察 與正常組比較，模型組動物表皮病變：炎性細胞(如淋巴細胞)變形、細胞漿突起及細胞間橋粒變性或高度增生，表皮基底板彌漫性增厚、表皮漿內可見邊緣不規則塊狀角質顆粒，細胞間可見團塊狀蛋白質沉著，細胞內張力原纖維束增生等。真皮病變：早期膠原間質水腫，后期間質纖維增生等。

活化的免疫應答細胞如淋巴細胞長胞漿突起、細胞核變大、核仁增大，肥大細胞胞漿突起、顆粒溶解或排出，巨噬細胞胞漿豐富及不規則突起等。另觀察到淋巴細胞與肥大細胞或巨噬細胞等相互吻合，細胞膜相插的細胞接觸現象。用藥后，與模型組比較，“膚敏膏”組以上皮膚病變情況不同程度減輕或改善。如淋巴細胞胞漿稍突起，細胞間橋粒偶有變性或輕度增生，表皮基底板偶見增厚；少見膠原間質水腫；淋巴細胞、肥大細胞和巨噬細胞的細胞核核仁增大、胞漿突起、顆粒溶解或排出情況明顯減輕，各種炎性細胞間的吻合接觸現象顯著改善，見圖2。

3 討論

通過常規病理和超微病理學觀察發現，“膚敏膏”不同程度減輕或改善了動物濕疹皮炎模型皮膚組織病變，減少炎性細胞數量。提示“膚敏膏”對Th1/Th2細胞平衡失調所引起的后續皮膚炎癥反應和組織損傷有明顯的抑制作用，從而間接調節Th1/Th2細胞動態平衡［7-8］。

［1］ 張玉環，沈偉，紀華安，等.異位性皮炎超微病理、免疫病理改變及臨床意義［J］.中國中西醫結合皮膚病性病學雜志，2003，2(3)：158-161.

［2］ 張玉環，紀華安，張峻玲，等.免疫反應致異位性皮炎病理形態學改變［J］.現代診斷與治療，2000，11(6)：358-360.

［3］ 許宗嚴，吳鐵，吳志華.鼠皮炎濕疹模型建立的研究進展［J］.中國臨床藥理學與治療學，2005，10(7)：730-733.

［4］Tang A，Judge TA，Nickolof f BJ，et al.Suppression of murine al lergic contact dermatitis by CTLA4Ig tolerance induction of Th2 responses requires additional blockade of CD40-l igand［J］.J Immunol，1996，157:117-125.

［5］Hopkins JE，Naisbitt DJ，Kit teringham NR，et al.Selective haptenation of cel lular or extracel lular protein by chemical al lergens:association with cytokine polarization［J］.Chem Res Toxicol，2005，18(2)：375-381.

［6］Mosmann TR，Cherwinski H，Bond MW，et al.Two types of murine helper T cel l clone:def inition according to prof iles of Lymphokine activites and secreted proteins［J］.J Immunal，1986，136(7):2348-2357.

［7］ 李光武.現代生命科學研究與中藥研發模式轉變［J］.中醫藥學刊，2004，22(12)：2231-2232.

［8］ 李慶生，陳子君，田芳.從學科特點論臨床中藥學與中藥臨床藥學［J］.中藥材，2002，25(1)：49-53.

Effectof FuMin Cream on theModelw ith EczematousDermatitis

LIJingping1,QIRonglin2
1 Yunnan University of Chinese Medicine,Kunming 650500,China
2 Kunming Dianhong Pharmaceutical Co.,Ltd

Objective:To investigate the influence of FuMin cream on skin pathology of guinea pigs suffering from eczematous dermatitis,explore its therapeutic function and the pathogenesis.Methods:Modelswere prepared by DNFB,curative effects of FuMin cream on themodelswere observed by HE stainingmethod and ultrastructural pathological detection of transm ission electronm icroscope.Results:FuM in cream could improve skin pathological changes of the animals w ith eczematous dermatitis and reduce inflammatory cells infiltration.Conclusion:FuMin cream could inhibit inflammatory reaction and tissue damage significantly induced by the imbalance of TH1/Th2 cells,consequently,regulate dynamic balanceof TH1/Th2 cells indirectly and improveallergic symptoms.

eczematous dermatitis;guinea pig;FuMin cream

R275

A

1004-6852(2015)01-0013-03

2013-12-27

李靜平(1979—)，女，博士學位，講師。研究方向：臨床中藥學。