撫州市2014年流感病原學監測結果分析

唐榮，王曉敏，嚴秀英

(撫州市疾病預防控制中心，江西 撫州344000)

流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，潛伏期短，傳播速度快。流感病毒分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。A型流感病毒抗原性易發生變異，曾多次引起世界大流行[1]。人群對變異株普遍易感，防控難度加大。通過流感網絡實驗室對流感病毒進行監測分析可以了解毒株流行和變異情況，科學制定流感的防控策略。本文對2014年撫州市第一人民醫院流感監測結果進行分析，了解本地區流感的流行特征。

1 材料與方法

1.1 標本來源 由國家級哨點醫院撫州市第一人民醫院采集發病3d以內的流感樣病例[2](發熱、體溫≥38℃，伴咳嗽或咽痛之一者)的咽拭子標本共1068例。每周二、四送樣。所有標本采集后4℃保存，并在48h內運送至撫州市疾控中心流感實驗室進行病毒核酸檢測及毒株分離。未能及時檢測的標本放-70℃保存。

1.2 細胞株 狗腎傳代細胞(MDCK)由江西省疾病預防控制中心疾檢所提供，本實驗室液氮保存。

1.3 主要儀器與試劑 Promega Maxwell 16核酸純化擴增儀及配套試劑盒，Bio-Rad CFX-96熒光

PCR儀，江蘇碩世流感檢測試劑盒，國家流感中心血凝和血凝抑制試驗標準抗體。所有試劑和耗材均在有效期內使用。

1.4 實驗方法

1.4.1 核酸檢測 所有標本用Promega核酸純化儀提取病毒RNA，實時熒光定量PCR先進行流感病毒A、B型核酸檢測，對A型陽性標本再進行新甲H1N1、 季節性 H3N2 和禽流感 H5、H7、H9、N9 檢測。對B型流感陽性進行B-Yamagata(BY)和BVictoria(BV)檢測。每次實驗均設立陽性對照和陰性對照。

1.4.2 病毒分離培養和鑒定 選擇生長良好的對數生長期MDCK細胞消化傳代，80%~90%成片生長時用于病毒分離。收集細胞病變液用HA和HI進行分型鑒定。

1.5 統計分析 使用SPSS 13.0統計分析，組間比對采用卡方檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 流感病毒核酸檢測結果 2014年共采集并檢測流感樣咽拭子標本1068例，陽性201例，核酸檢測陽性率為18.82%(201/1068)。其中新甲H1N1 35 例(17.42%)，季節性 H3N2 97 例(48.25%)，BY 69例(34.33%)。新甲NIN1僅出現在春季，夏季以季節性H3N2為主，11-12月份只有BY流行。陽性率最高的是1、3和7月份。各月病原學監測結果見表1。

2.2 不同性別流感核酸檢測情況 1068例咽拭子標本中男性640例，女性428例，男女比例為1.51：1。流感病毒核酸檢出陽性男性組為121例(60.20%)，女性組為80例(39.80%)。尚未發現男女兩組間流感核酸陽性檢出率有統計學差異 (χ2=0.008，P>0.05)。

表1 撫州市2014年流感核酸檢測和病毒分離表

2.3 不同年齡流感核酸檢測情況 1068例流感監測樣本中，年齡最小的1個月，最大的87歲。核酸陽性率最高的是≥15歲年齡組51.79%(58/112)，其次為≥60歲年齡組29.31%(17/58)。不同年齡組流感監測結果見表2。各年齡組流感病毒陽性分離率差異有統計學意義。 (χ2=121.73，P<0.05)。

表2 2014年撫州市流感核酸檢測年齡分布表

2.4 流感病毒分離情況 流感病毒核酸陽性樣本進行MDCK分離鑒定，共分離毒株63例，陽性分離率為5.90%(63/1068)。其中新甲H1N1 12例，占全年陽性毒株總數的19.05%；季節性H3N2 16例，占25.40%；BY 35例，占55.55%，以BY分離數量最多。1、3和7月份病毒毒株分離數較多，1月份以新甲HIN1和H3N2為主，3月份以BY為主，7月份以H3N2為主。病毒分離數量與核酸陽性檢出率相一致。流感病毒分離情況見表1。

3 討論

流感病毒包膜上主要有植物血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)二種抗原，抗原變異形成新的亞型容易造成廣泛流行[3]。流感病毒是全球監測性傳染病，是預防和控制流感的主要措施之一[4]。撫州市2014年流感監測樣本采用實時熒光定量RT-PCR方法檢測。流感病毒核酸檢測結果顯示全年各個月份均有陽性樣本的檢出。2014年撫州市有多種流感亞型在人群中流行，檢出的病毒型別主要有新甲H1N1、季節性H3N2和BY，未檢出BV，與本省其他地區過去十年優勢流行株有較大不同[5，6]。通過監測我們發現2014年撫州市流感流行主要集中在春季1至3月份和夏季7、8月份。1至3月份有新甲H1N1、季節性H3N2和BY同時流行，4至12月份沒有出現過新甲H1N1型。4至10月以季節性H3N2為主，伴有少量BY，到11、12月份只有BY流行。我國北方城市流感一般在冬春季節流行[7-9]，我市夏季7月份出現的季H3N2流行高峰，這與我國南方城市夏季是主要流行季節的觀點相一致[10-12]。從以上結果可以看出，撫州市2014年流感流行主要在春季和夏季，沒有出現冬季高發的流行特征，與本省其他地區流感流行特征也存在差異[13,14]。從流感病毒核酸檢測陽性樣本的年齡分析我們發現各個年齡組流感核酸均檢出陽性標本。核酸陽性率最高的是≥15歲年齡組，占到51.7 9%，此人群多以學生為主。校內密切接觸和空氣傳播是其主要因素，極易造成學生之間的廣泛流行。這與龐晶晶[15,16]等的報告不一致。其次為≥60歲年齡組，占29.31%，此組老年人普遍抵抗力降低，更易感染流感病毒。對不同性別流感核酸檢測我們尚未發現男女兩組間流感核酸陽性檢出率有統計學差異,這與江西省近幾年的分析結果相一致[6]。

對流感病毒核酸檢測陽性的樣本進行病毒分離，全年共分離出流感毒株63例，分離率為5.90%。全年分離出毒株最多的是BY，占全年陽性毒株總數的55.55%。我市從6月到8月份流感病毒分離數下降，這可能與夏季天氣炎熱，樣本保存和運輸等條件有關。流感病毒分離率與流感發病率、采樣液、采集方法、樣本的運送和保存以及分離技術等密切相關，各個環節共同影響流感毒株分離的效果。我們也將在以后的工作中重點從這幾個方面入手，嚴格操作程序，提高病毒分離率。

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