化學法和免疫法檢測消化道出血的價值與互補關系

陳曉紅，朱學濤

(1、連云港市社會福利中心，江蘇 連云港222003；2、連云港市第一人民醫院檢驗科，江蘇 連云港222002)

糞便潛血試驗(fecal occult blood test,FOBT)是消化道出血的一個重要篩選指標，當消化道有少量出血時，因消化道的作用可使紅細胞溶解破壞，肉眼或顯微鏡檢測不到，采用化學法或免疫法等方法方能證實出血的試驗。糞便潛血試驗是測定消化道出血的一種方法，篩檢消化道腫瘤的有效手段[1]。血紅蛋白單克隆抗體測定的免疫法與傳統的化學法相比，靈敏度、特異性都有了很大的提高，且不受飲食或相關藥物(鐵劑)等影響，已被廣泛地應用于臨床。化學法對人血紅蛋白的特異性差，受其它動物血紅蛋白和其它因素的干擾，強調試驗前三天內禁食動物血、肉、肝臟及富含葉綠素食物鐵劑、中藥以免假陽性的產生。但在實際工作中，有時臨床有消化道出血現象，而免疫法檢測結果出現陰性結果，文獻報道不同的檢測潛血試驗的方法在臨床上存在著差異[2,3]，為了探討免疫法和化學法檢測消化道出血的應用價值，選擇了2014年9月-2015年4月本院108例經內窺鏡檢查診斷有消化道出血疾病的患者，112例健康體檢者。18例嘔吐伴胃出血患者。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料與檢測方法

1.1.1 免疫法 金標層析法為免疫法中的代表方法，單克隆Hb免疫夾心法檢測人Hb金標試紙條，杭州艾博生物醫藥有限公司生產，批號：2014050016。

1.1.2 化學法 匹拉米洞法為化學法中的代表方法，珠海貝索生物技術有限公司生產，批號：215011。

1.1.3 免疫法和化學法同時檢測為雙聯法，也稱序貫法。

1.2 對象

1.2.1 112例健康體檢者，血常規檢查無貧血和血小板減少，癌胚抗原(CEA)正常，無痔瘡。

1.2.2 經內窺鏡檢查確診有消化道出血的139例患者(包括胃腸潰瘍、出血、腫瘤、息肉)。

1.2.3 121例嘔吐胃黏膜損傷出血患者的胃內容物。患者主要為重癥監護患者、腦外傷、腦梗死、肺部嚴重感染，化療患者化療藥物副作用引起腸胃反應。

2 結果

2.1 健康體檢者與消化道出血患者糞便免疫法和化學法潛血試驗檢測結果比較 上消化道出血樣本中62例陽性樣本，有8例患者的樣本呈現黑色柏油樣，用免疫法檢測為陰性，而化學法為強陽性。見表1。

表1 糞便免疫法和化學法潛血試驗檢測結果比較(%)

2.2 胃內容物免疫法和化學法潛血試驗檢測結果比較 121例樣本中有75例為黏液包裹的咖啡色樣本。見表2。

表2 胃內容物免疫法和化學法潛血試驗檢測結果比較(%)

3 討論

從表1可以看出健康人對照組在正常飲食情況下留取糞便樣本，免疫法和化學法的檢測結果一樣均檢測出2例陽性標本，且2例陽性重疊，檢出率為1.8%。

經隨訪得知，1例體檢者留取糞便前一天曾出現鼻出血現象，1例體檢者近幾日早刷牙有較為嚴重的牙齦出血現象，均是由于部分血液被吞咽，進入消化道。

使用免疫法檢測Hb，上消化道出血患者糞便樣本中，免疫法Hb檢出率43.2%，化學法Hb檢出率53.2%；下消化道出血患者糞便樣本中，免疫法Hb檢出率50.0%，化學法Hb檢出率64.3%，免疫法和化學法同時測定，以其中一項陽性即診斷為陽性，上消化道出血患者陽性檢出率55.9%，下消化道出血患者陽性檢出率67.9%。上消化道出血患者免疫法的陽性檢出率低，是因為Hb在消化道中，受腸內細菌和消化酶的作用而變性，導致其抗原性降低，由于體液中的蛋白成分阻礙抗原抗體反應，而出現假陰性結果[4]。張錫蓮報道胃酸對胃液匹拉米洞法潛血試驗有一定的影響[5]，但紅細胞破裂釋放的Hb，經胃酸作用的血基質仍然可與匹拉米洞反應，結果為陽性，本文上消化道出血患者化學法的陽性檢出率為53.2%，免疫法的陽性檢出率為43.2%，為了解決此差別，國內外學者對Hb以外的血液成分也作出了深入研究，如轉鐵蛋白、結合膽紅素、纖維蛋白原、卟啉鐵、卟啉衍生物等。有研究報道，糖化血紅蛋白以及觸珠蛋白對膠體金單克隆抗體法檢測Hb也有一定的影響[6,7]。

免疫法和化學法同時檢測結果與內窺鏡檢查確定有消化道出血者進行比較可以看出，其符合率較低，分別為55.9%和67.9%。一方面可能受腸內細菌作用的影響，有些Hb被分解或在上消化道被胃液消化。另一方面與糞便的采集方法關系密切相關，糞便中混有的血液與尿液中混有的血液不同，尿液中的血液是在溶液中的均勻體，而糞便中是不均勻地分布在固體糞便內，檢測的樣本只是整個樣本的很少一部分。因此潛血試驗檢查應嚴格按照操作規程執行[8]，連續檢查3d，并挑取外表及內層糞便，收集后應迅速檢查，避免時間過長造成靈敏度降低。

另外與患者的疾病的特點也有重要關聯，如潰瘍病患者呈間斷性陽性，也是造成與臨床符合率降低的原因之一。

從表2還可以看出121例胃內容物的檢測結果，121例樣本中有75例為黏液包裹的咖啡色樣本，免疫法和化學法同時測定95例(78.5%)陽性，92例(76.0%)化學法呈現陽性，而免疫法只有71例(58.7%)呈現陽性。出現此種現象主要是由于胃內容物樣本本身的特點造成的，由于胃內容物往往夾雜著許多胃黏液，樣本呈現黏稠狀，將紅細胞包裹在黏液中，使用免疫法很難挑取到黏液內部樣本，操作者的不同挑取部位也有著很大的差別。化學法使用的試劑是液體的，可以和樣本很好地和樣本混合，使夾雜在黏液內的標本呈現陽性結果。

化學法在對上消化道出血樣本檢測時，62例陽性樣本中，有8例患者的樣本呈現黑色柏油樣，用免疫法檢測為陰性，而化學法為強陽性。這種現象可能是大量的出血由于抗原過高，反應呈現帶現象，而出現假陰性結果，雖然可以稀釋樣本可以再次檢測，并且要求使用低滲緩沖液稀釋，操作過程繁瑣，且稀釋的比例難以控制。使用化學法作為消化道出血檢測的有效補充，特別是上消化道出血造成的顏色深的糞便有實用價值，與免疫法起到互補作用。

潛血試驗對于判別消化道是否有出血有重要意義，免疫法檢測Hb特異性好、靈敏度高、干擾因素少、操作簡便、污染小，但由于大量出血造成帶現象，而出現假陰性結果，黏稠的樣本檢出陽性率低。化學法的靈敏度較高，但特異性較差，可以彌補免疫法中對特殊樣本的不足，特別是上消化道大量出血黑色柏油樣糞便，在胃內容物黏稠樣本檢測也可得到較好結果，因此免疫法還不能夠完全取代化學法檢測。總之，化學法和免疫法檢測Hb均具有獨特的臨床意義，在臨床應用中應了解互補關系，正確選用，合理分析和科學選擇不同的檢測方法，對疾病診斷至關重要。

[1]姜佳麗,萬曉萍.糞便潛血試驗的臨床應用[J].中華內科雜志,2012,51(2):93-94.

[2]胡冬華,劉瓊,李琴.單克隆抗體法檢測糞便隱血的臨床應用探討[J].實驗與檢驗醫學,2008,26(4):453-454.

[3]黃勝,梁華英,何艷,等.三種糞便隱血試驗的臨床應用評價[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(1):69-70.

[4]內田夫,他.關于免疫學便潛血反應的基礎研究[J].臨床檢查儀器.試劑,1998,11(2):167-172.

[5]張錫蓮.胃酸對胃液匹拉米洞法潛血試驗的影響[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(3):305.

[6]馬金霞,劉秀華,潘世揚.糖化血紅蛋白對金免疫隱血試驗的干擾分析[J].臨床檢驗雜志,2001,19(5):315-316.

[7]仇祝強,宮凌娟,劉雪芹.觸珠蛋白對便潛血單克隆抗體法檢測的影響[J].上海醫學檢驗雜志,2000,15(1):25.

[8]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第3版.南京:東南大學出版社,2006:302.