血液學初篩表型陰性的孕婦地中海貧血基因檢測結果分析

李愛敏，唐曙明，陳海霞，劉彩艷

(深圳市人民醫院，廣東 深圳518020)

地中海貧血(thalassemia，簡稱地貧)是一種臨床常見的遺傳性溶血性疾病，是由于調控珠蛋白合成的基因缺失或突變引起α鏈和β鏈合成數量不平衡而造成的[1]。在我國南方地區發病廣泛。廣東省人群中α及β地貧總的基因攜帶率高達11.07%，其中α地貧的基因攜帶率為8.53%，β地貧的基因攜帶率為2.54%[2]。血液學表型分析法是國內外地貧篩查和診斷指南推薦的方法，國際地貧篩查標準為MCH<27pg和MCV<78fl，其缺陷是存在部分輕型β地貧，靜止型α地貧的漏檢[3，4]。國內對于MCV、MCH篩查陽性的地貧基因型分布報道很多，對于MCV、MCH篩查陰性的地貧基因攜帶者基因型分布報道不多。本研究為提高地貧篩查的靈敏度，取MCV82fl或MCH27pg作為截斷點，通過對2013年1月至2015年4月在我院產檢的地貧基因攜帶者的基因檢測結果進行回顧性分析，探討MCV、MCH篩查陰性時主要漏檢的地貧基因類型，為優化地貧診斷流程提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2013年1月至2015年4月在深圳市人民醫院龍華分院產檢自愿進行α、β地貧基因檢測的孕婦2681名，年齡19～45歲。參照2012年我國衛生部行業標準(WS/T405-2012)《血細胞分析參考區間》提供的MCV和MCH參考區間值[5]，選取 MCV<82fl、MCH<27pg作為截斷值,則 MCV≥82fl、MCH≥27pg為地貧初篩表型陰性。

1.2 儀器與試劑 hema9600 PCR擴增儀 (珠海黑馬公司)，Combi-H12 分子雜交儀(韓國)，LH 780 全自動血細胞分析(美國貝克曼公司)；α-地中海貧血基因診斷試劑盒(gap-PCR法)檢測α-地貧基因3種缺失(--SEA、-α3.7、-α4.2)和 β 地中海貧基因檢測試劑盒(膜反向雜交法)，檢測17種位點突變CD41-42(-TTCT)，CD17(A →T)，CD43(G→T)，CD71-72(+A)，IVS-2-654(C→T)，-28(A→G)，-29(A→G)，CD26(G→A),CAP+40-+43(-AAAC),CD14-15(+G),CD27/28(+C),-32(C→A),-30(T→C),CD31(-C),Int(ATG→AGG),IVS-I-1(G→T)和 IVS-I-5(G→C)),均為深圳益生堂生物企業有限公司產品。

1.3 檢測方法 采集患者靜脈血2～3ml，EDTA-K2抗凝。當天用全自動血液分析儀檢測紅細胞參數；剩余標本于2～8℃冰箱保存集中進行基因檢測，用全血基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA，經PCR擴增后進行3種缺失型α-地貧基因和17種β地貧基因突變檢測。具體步驟嚴格按試劑說明書操作。

2 結果

2681例孕婦中，地貧初篩陽性的孕婦894例，地貧初篩陰性的孕婦1787例。共檢出地貧基因攜帶者366例，其中檢出α-地貧235例，β地貧115例，α合并β復合型地貧16例。在1787例地貧初篩表型陰性的孕婦中，檢出地貧基因攜帶者52例，占總檢出地貧的14.21%(52/366)，其中αα/-α3.746 例、-α4.2/αα3例、β 地貧 (均為 CAP 雜合子)2例、α復合β地貧(基因型-α3.7/CD26)1例，分別占檢出的88.46%、5.77%、3.85%、1.92%。見表1。

表1 地貧初篩表型陰性地貧基因攜帶情況

3 討論

地中海貧血臨床上分布最廣和最嚴重的主要是α鏈珠蛋白地貧及β鏈珠蛋白地貧。正常人含有4個正常α珠蛋白基因(αα/αα)及2個正常的β珠蛋白基因(β/β)。根據α地貧基因缺失的數量，臨床上分為 α 地中海貧血靜止型(－α/αα)、標準型(－－/αα)、HbH 病(－－/－α)及 Bart胎兒水腫(－－/－－)。 β 地貧分為單雜合子地貧(β0/＋/β)及雙重雜合子或純合子地貧(β0/＋/β0/＋)及 αβ 復合型地貧[6]。

本研究數據顯示，在初篩陰性 (MCV≥82fl、MCH≥27pg)的孕婦人群中，主要檢出的是αα/-α3.7和 -α4.2/αα，提示在 MCV≥82fl、MCH≥27pg 的孕婦中，仍有可能是靜止型α地貧基因的攜帶者。α珠蛋白基因缺陷的數目是引起α-地貧不同血液學表型的直接原因。--SEA/αα是兩個α基因異常，故MCH、MCV改變較為明顯，因此該基因出現在MCV≥82fl、MCH≥27pg的人群中的報道較為罕見。一般來說，α2基因的轉錄活性略高于α1基因,-α4.2/αα 是 α2 基因完全缺失，αα/-α3.7是 α2基因部分缺失，因此-α4.2/αα的血液學指標改變程度比 αα/-α3.7略為明顯[7]，導致在 MCV≥82fl、MCH≥27pg的人群中 αα/-α3.7檢出率要大于-α4.2/αα；同時，在我國南方五省αα/-α3.7的檢出率高于-α4.2/αα[8-12]，也可能造成兩者的構成比差異。這與本研究結果(αα/-α3.7占 88.46%，α4.2/αα 占 5.77%)一致。

在檢出的115例β-地貧中，17種β突變基因共檢測出9種突變類型，從高到低依次是IVS-2-654、CD41-42、、CD17、 -28、CD71-72、INS-1-1、CAP 、-29、βEM 。 本 研究中 ， 在 MCV≥82fl、MCH≥27pg的孕婦人群中僅檢出CAP雜合子2例，在β-地貧基因中的比率為1.74%(2/115)。結果說明MCV≥82fl、MCH≥27pg時不能排除個別輕型β地貧基因型。本研究還發現1例靜止型α地貧合并輕型β地貧基因者，可能是α地貧合并β地貧時，在β肽鏈合成減少的同時,α肽鏈亦合成減少,使二者不平衡的狀態得以平衡。亦有蔡永林等[13]報道過--SEA/CD41-42復合型1例(MCV：84fl MCH：28.3pg)。由于本研究收集到的α復合β地貧型例數較少，是否在該人群中還有其他復合基因攜帶者，有待后續探討。

本研究結果表明，在血液型表型陰性的孕婦人群中，漏檢的主要是靜止型α地貧、少部分輕型β地貧和α合并β地貧，由于他們的MCH、MCV區間與健康人群間有較大的重疊區，故很難通過血液表型篩查來發現。而漏檢率最高的是靜止型α地貧，其危害在于它與HbH病密切相關，HbH病雖非致死性疾病，但它嚴重影響患者的生存質量。強制婚檢取消后，孕前或孕后檢查就尤顯重要。目前國內地貧篩查的方法主要有血常規、紅細胞脆性試驗、血紅蛋白電泳等[14]，這些方法操作簡單，價格較低，雖能篩出絕大多數典型的地貧基因攜帶者，但輕型地貧攜帶者易漏檢。也不能區分血液學表型特征類似但基因型不同的個體。地貧攜帶者個體的確診、地貧的遺傳咨詢和產前診斷均有賴于基于DNA分析的基因分型[15]。

因此，建議對于地貧高發區人群，夫妻雙方均需做血液學初篩，若一方確定為α地貧，另一方無論MCV、MCH是否正常，都建議進行相應的地貧基因檢測，為孕產婦考慮是否選擇終止妊娠，減少HbH胎兒、甚至Bart胎兒水腫的出生提供了可靠的科學參考。對指導優生優育，提高人口素質有重要意義。

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