病毒滅活新鮮冰凍血漿制備冷沉淀的制備研究

涂娟，何華慶，尤榕，韓玲，黃麗紅，張凱，葉美霞，龔甜

(江西省血液中心，江西 南昌330077)

冷沉淀因富含凝血因子Ⅷ(FⅧ)、纖維蛋白原(Fbg)等有效成分，被廣泛用于血友病、先天性或獲得性纖維蛋白原缺乏癥等患者的治療,也是局部止血藥纖維蛋白膠的重要成分。用病毒滅活新鮮冰凍血漿為原料提取冷沉淀凝血因子，可進一步減少因輸血傳播疾病的發生率[1-7]。我中心自2009年開始采用亞甲藍(MB)/光化學法對血漿進行病毒滅活。本課題通過比較同源新鮮冰凍血漿在滅活前后制備冷沉淀的質量評價分析血漿滅活后制備冷沉淀的可行性，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 cryofuge6000i型大容量低溫離心機(德國賀利氏公司),MBF21型低溫血漿速凍機 (深圳愛康醫療設備有限公司),HDME-1A型醫用病毒滅活箱(上海輸血技術有限公司),CA-500型血凝儀(日本希森美康公司)。

1.1.2 試劑與耗材 FⅧ、Fg含量測定試劑盒 (德國SIEMENS公司),MBPF-B型一次性使用病毒滅活輸血過濾器(上海輸血技術有限公司)。所有試劑與耗材均在有效期內使用。

1.2 方法1.2.1冷沉淀原料血漿的制備 隨機抽取400ml/袋全血制備的新鮮冰凍血漿48袋(200ml/袋)，每袋無菌操作均分為兩袋(100ml/袋)，分別作為對照組組、實驗組。對照組立即置于-50℃速凍機中速凍，-30℃保存備用，即新鮮冰凍血漿組；實驗組用MB/光化學法進行病毒滅活后，采用與對照組相同的方式速凍并保存備用，即病毒滅活冰凍血漿組。整個過程于采血后4~6h內完成。

1.2.2 冷沉淀的制備 將上述對照、實驗組冰凍血漿分批取出，在完全相同的條件下制備兩組冷沉淀，快速置于-50℃速凍機中速凍，-30℃保存備用。

1.2.3 留樣與檢測 將上述對照、實驗組冷沉淀置37℃水浴箱中融化并稱重，混勻后無菌留樣2ml，快速在血凝儀上檢測FⅧ和Fg的含量。操作過程嚴格按儀器及試劑說明書進行。

1.3 統計學處理 應用SPSS13.0統計軟件對數據進行統計處理，采用t檢驗對兩樣本均數進行比較，P<0.05具有統計學意義。

2 結果

經亞甲藍滅活的新鮮冰凍血漿制備的冷沉淀FⅧ和Fbg含量均明顯減少，保留率分別為69.5%和65.48%。見表1。

表1 兩組冷沉淀中FⅧ和Fg含量的測定結果(±s，n＝48)

表1 兩組冷沉淀中FⅧ和Fg含量的測定結果(±s，n＝48)

成分 對照組 實驗組 t P FⅧ含量(IU/袋)Fg 含量(mg/袋)54.85±18.96 87.28±23.58 38.12±13.34 57.15±17.16 5.14 5.72<0.05<0.05

3 討論

有研究表明輸注冷沉淀傳染病毒的風險高于其它血液產品如血漿、紅細胞和血小板[8]。因此，用亞甲藍病毒滅活FFP制備冷沉淀，是進一步降低輸注冷沉淀傳染病毒危險性的必要措施。大量實驗證實亞甲藍光化學法滅活血漿病毒是一種最安全、有效的血漿病毒滅活的方法。目前，亞甲藍對血漿進行病毒滅活已經被國內采供血機構普遍采用，效果良好無不良反應報道。

從本次實驗結果顯示，實驗組(病毒滅活FFP為原料)制備的冷沉淀，FⅧ和Fg含量均有顯著降低，Fg的降低程度較FⅧ更大。Fg的損失量達35%左右，FⅧ的損失量在30%左右，與國內報道相似[9-12](見表1)。亞甲藍病毒滅活對于制備冷沉淀的FFP制備前進行病毒滅活,會影響其凝血因子中不穩定因子FⅧ等的療效。分析原因是病毒滅活濾除亞甲藍時過濾器可能對凝血因子和蛋白有一定的吸附作用,造成血漿中Fg和FⅧ因子的損失。此外延遲血漿速凍時間也會對影響FⅧ活性，因為凝血因子在體外受溫度及時間的影響較大,環境溫度越高,時間越長,活性下降越明顯。

病毒滅活技術除應能有效的滅活血液成分中的病毒外,而且應對血液產品成分的功能無顯著性影響,從而保證血液產品的臨床療效。雖然目前我國的國標中尚未收錄病毒滅活冷沉淀這一制品[13]，但病毒滅活冷沉淀凝血因子作為一種新的血液成分，可降低輸血傳染的風險。采用亞甲藍光化學法病毒滅活技術對血漿進行病毒滅活處理后制備冷沉淀，會對冷沉淀產品有效成分FⅧ和Fg的含量有顯著影響，從而影響冷沉淀臨床療效，因此，盡管亞甲藍光化學法病毒滅活血漿大大降低了輸血風險，利用亞甲藍病毒滅活新鮮冰凍血漿制備滅活冷沉淀產品需進一步深入研究，盡快尋找一種安全、有效、實用的適合冷沉淀病毒滅活方法是關鍵。

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