戊型肝炎病毒檢測方法學評價

孫俊紅 李雷花

戊型肝炎病毒檢測方法學評價

孫俊紅 李雷花

目的 為戊型肝炎病毒檢測選擇適當的方法。方法 使用抗-戊型肝炎病毒-IgG(HEV IgG)和抗-戊型肝炎病毒-IgM(HEV IgM)檢測方法對200份急性非甲非乙非丙型肝炎患者血清和200份健康人血清及50例散發性戊型肝炎患者血清進行檢測。結果 在急性非甲非乙型肝炎患者血清中,抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和HEV RNA陽性率分別25.50%、18.50%和16.50%。在戊肝系列血清檢測中,抗-HEV IgG陽性率發病1個月內為74.0%, 發病3個月94.0%, 6個月38.0%, 12個月35.4%, 24個月8.6%。抗-HEV IgM陽性率發病1個月內為92.0%, 發病3個月34.0%, 6個月4.0%, 12個月1.0%。抗-HEV IgM在發病初期產生, 多數在3個月陰轉, 即抗HEV IgM陽性是近期HEV感染的標志。而HEV IgG持續時間相對較長, 多數于發病后6～12個月轉陰, 但亦有持續幾年者。盡管大部分抗-HEV IgM陽性血清抗-HEV IgG也呈陽性, 但也確有少數抗-HEV IgG為陰性的。結論 抗-HEV IgM檢測是診斷戊肝近期感染最重要的方法, 抗-HEV IgG檢測對戊肝感染長期鑒別診斷最為重要。

戊型肝炎病毒；戊肝病毒-IgG；戊肝病毒-IgM

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(HEV)引起, 是一種單股正鏈RNA病毒, 既往認為戊肝主要經消化道傳播, 由飲用被戊肝污染的水源或食用被污染的食物所致［1］。近年來, 隨著對戊肝傳播途徑的研究不斷深入, 經血液傳播的直接和間接證據不斷積累, 為戊型肝炎病毒不同時期檢測尋找合適的方法也至關重要。作者利用酶聯免疫試驗(ELISA)和逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)分別檢測了急性散發性戊肝血清中抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 血清標本 患者血清來自濮陽市各醫院住院患者, 健康人血清來自濮陽正常人群。

1.2 抗-HEV IgG及IgM檢測方法［2］用抗-人IgGu鏈、抗人IgMu鏈包被反應板, 每個樣本待測孔加入樣品稀釋液100 μl, 再加入待測樣本10 μl。置37℃水浴30 min；洗板5次,每孔加入酶結合物100 μl, 封板, 置37℃水浴30 min；洗板5次,每孔加入顯色劑A、B液各50 μl, 封板, 置37℃顯色10 min,每孔加終止液50 μl, 終止反應。在450 nm波長處測吸光度A值, ≥Cut off值為陽性, 反之為陰性。根據對200份健康人群血清檢測, 將Cut off 值定為0.25+陰性對照平均值。

2 結果

2.1 急性非甲非乙非丙型肝炎血清抗-HEV IgG、IgM及HEVRNA檢測結果 急性非甲非乙非丙型肝炎血清抗-HEV IgG、IgM和HEV RNA檢測共檢測急性非甲非乙非丙型肝炎血清200份, 健康人血清200份, 結果見表1。在抗-HEV IgM和HEV RNA均為陽性的血清中, 有4份抗-HEV IgG為陰性, 其余均為抗-HEV IgG也陽性。而在51份抗-HEV IgG陽性的血清中, 抗-HEV IgM陽性者占70.6%(36/51), HEV RNA陽性者僅占62.7%(32/51)。結果表明用抗-HEV IgG檢測戊肝高危人群, 陽性率明顯高于抗-HEV IgM及HEV RNA。

2.2 戊型肝炎患者抗-HEV IgG和IgM抗體檢測的比較分析55例HEV抗體陽性的患者血清, 抗-HEV IgG和IgM同時陽性的33份, 兩者一致率為60.0%；單獨IgG抗體陽性的22份, 占40.0%；單獨IgM抗體陽性的4份, 占7.3%。

2.3 戊型肝炎患者血清抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA動態檢測結果 對50例散發性戊型肝炎患者的系列血清檢測結果, 見表2。在發病1個月內, 46例抗-HEV IgM陽性者中, 37例抗-HEV IgG同時陽性, 9例抗-HEV IgG陰性；而37例抗-HEV IgG陽性中, 有35例抗-HEV IgM同時陽性, 2例抗-HEV IgM及HEV RNA陰性。50例戊肝患者血清中,抗-HEV IgG陽性和抗-HEV IgM陽性累計為97.5%。

結果表明, 抗-HEV IgM抗體出現時間早, 發病后1個月內陽性率為92.0%(46/50), 2～4個月內逐漸轉陰, 個別患者可持續1年。抗-HEV IgG檢出率在1個月后逐漸升高, 2～6個月陽性檢出率達到高峰, 且持續時間較長, 6～12個月逐漸轉陰, 個別持續時間較長, 達2～3年。而HEV RNA檢出率和存在時間均比抗-HEV IgM和抗-HEV IgG低, 但HEV RNA檢測結果陽性, 即可判定為HEV感染, 為HEV感染的確證試驗。

表1 急性非甲非乙非丙肝炎血清抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA檢測［n(%)］

表2 戊肝患者血清抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA動態檢測結果［n(%)］

3 討論

抗-HEV IgG、抗-HEV IgM、HEV RNA這三項指標在戊肝診斷中, 抗-HEV IgG檢測價值較大, 因其檢出率高, 所以較適用于戊肝篩查, 而抗-HEV IgM和HEV RNA較適用于HEV早期診斷。但抗-HEV IgG不足之處在于:多數患者抗-HEV IgG持續時間較長, 因此抗-HEV IgG陽性無法區別是急性HEV感染還是既往感染。對于抗-HEV IgG陽性病例還應輔以抗-HEV IgM或HEV RNA檢測, 有助于區分急性和既往感染。抗-HEV IgM或HEV RNA陽性可診斷為急性感染, 但陰性不能排除戊型肝炎病毒感染, 對于戊型肝炎診斷, 國內外雖有不少研究報導, 但本研究可以看出, 三種檢測方法均有其優點和局限, 尚需繼續深入研究。抗-HEV的檢測, 應發展檢出率高、抗體出現早、抗體持續時間更短的試劑。HEV RNA在血中存在時間短, 其結果受抽血時間限制很大, 操作相對復雜, 費用也高, 對于戊肝常規診斷價值不大。就目前的研究結果, 作者認為對于戊肝診斷早期應以抗-HEV IgM檢測為主, 以抗-HEV IgG檢測為輔, 對于發展期則應抗-HEV IgG為主, 抗-HEV IgM為輔。

［1］ 阮冰, 馬亦林, 莊輝, 等.戊型肝炎患者病毒血癥的研究.中華預防雜志, 1997, 31(6):352-354.

［2］ 鄭英杰, 姜慶五, 張軍, 等.三種戊型肝炎診斷試劑可靠性的研究.中國肝臟病雜志, 2004, 12(1):16-17.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.052

2015-02-09］

457000 濮陽市人民醫院檢驗科