血漿循環microRNA檢測及其與冠心病關聯性探討

譚文亮 羅進 陽軍 劉震 羅義

血漿循環microRNA檢測及其與冠心病關聯性探討

譚文亮 羅進 陽軍 劉震 羅義

目的 探究血漿循環微小RNA(microRNA)在冠心病患者外周血中的表達水平以及臨床意義。方法 60例冠心病患者為觀察組, 另選取同期行體檢的60例健康人群作為對照組, 比較兩組患者血漿中microRNA的表達水平, 并對其差異進行分析。結果 冠心病患者外周血中miRNA-130a、miRNA-126與miRNA-222的表達水平與正常健康人群相比, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。結論 通過測定冠心病患者外周血中miRNA-126與miRNA-222的表達水平能初步確診患者的病情, 同時還能進一步測定冠狀動脈的狹窄情況。

冠心病；血漿循環；微小RNA；關聯

microRNA能抑制蛋白質的翻譯過程, 或是直接將蛋白質降解, 并在轉錄后臺中對蛋白質的表達進行調控。血漿中的microRNA由于穩定性較高, 比較容易測得, 同時血漿中的microRNA具有一定的組織特異性, 有望成為一種新型的生物學標志物, 對心血管疾病、肌肉損傷、腫瘤及炎癥的診斷具有一定的輔助作用。現有研究發現［1］, microRNA尤其是內皮特異性microRNA對于血管內皮損傷修復調控以及血管新生調控具有重要的作用。本文為探究microRNA在冠心病患者中的表達及意義, 對120例冠心病患者進行了調查, 旨在為今后的microRNA研究提供有力的依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2014年1月～2014年8月收治的經冠狀動脈造影檢查確診的冠心病患者60例為觀察組, 另選取同期行體檢的60例健康人群作為對照組。對照組男32例, 女28例；年齡24～52歲, 平均年齡(29.2±7.8)歲；經冠狀動脈造影檢查排除冠心病。觀察組男35例, 女25例, 年齡23～54歲, 平均年齡(30.4±7.5)歲。排除先天性心臟病患者, 急性心包炎患者, 急性心肌炎患者, 結締組織疾病患者,肺動脈栓塞患者, 自身免疫性疾病患者, 嚴重肝腎功能不全患者, 惡性腫瘤患者, 急性感染患者, 腦血管疾病患者。觀察組患者行冠狀動脈造影檢查結果提示：前降支、回旋支、左主干、右冠狀動脈及其分支的血管直徑縮小＞50%。兩組研究對象在性別、年齡等一般資料方面比較差異無統計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 microRNA檢測方法 所有研究對象均于檢測前禁食8 h, 并于清晨入院抽取6 ml外周血, 將其置入EDTA抗凝管內,并離心10 min, 將上清液取1 ml繼續離心10 min, 并將500 μl上清液取出置入新的離心管內。按照Trizol LS試劑的操作說明對各個樣本的RNA進行抽取, 并將其置于-80℃內進行集中保存, 行逆轉錄。使用TaqManmicroRNA Reverse Transcription kit(taqmanmicrorna反轉錄試劑盒)并按照操作說明在各個樣本中提取20 ng總RNA進行逆轉錄。將TaqMan microRNAssays：miRNA-130a(000454)、miRNA-126(002228)、miRNA-222(002276)作為引物, 將RNU6B(001093)作為內參。在各個樣本中提取2 μl轉錄物, 按照TaqMan universal Master MixⅡ, no UNG(國產TaqMan探針配套的熒光定量預

混液)操作說明使用ABI 7500 PCR儀器對TaqMan探針繼續擰定量熒光聚合鏈反應以及PCR雙重特異引物擴增技術檢測miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222的Ct值, 同時將RNU6B作為內參。

1.3 統計學方法 本次研究數據采用SPSS14.0統計學軟件進行數據處理。計量資料用均數±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；計數資料用率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

兩組研究對象miRNA檢測結果比較, 差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組對象miRNA檢測結果比較( x-±s)

3 討論

動脈粥樣硬化屬于慢性進行性的炎性疾病, 造成動脈粥樣硬化的始動因素是血管內皮損傷, 所以目前臨床對血管內皮損傷修復的關聯基因進行了大量的研究。既往研究指出［2］,內皮特異性microRNA在整個血管新生的過程中起到重要的調控作用, 并分為促進血管新生以及抑制血管新生兩種類型。大量研究結果指出miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222在人體的內皮細胞內高度表達, 同時具有明顯的特異性［2-4］。國外學者［5］發現miRNA-126在炎癥因子的刺激下能抑制血管細胞粘附因子-1的表達, 同時能調節炎癥因子的遷移, 促進毛細血管形成網絡并使其存活。

有研究指出［6］miRNA-126在心肌再灌注或是缺血情況下誘導的心生血管中具有明顯的促進作用。miRNA-130a能靶向作用在HOXA5與GAX上, 由此達到促進內皮細胞遷移與增殖的目的。miRNA-221或miRNA-222還能靶向作用于血管內皮細胞上的c-kit與eNOS, 以此達到改變血管通透性的目的, 同時還能抑制細胞遷移與增殖。降低人臍靜脈內皮細胞上的miRNA-221或miRNA-222表達, 能有效降低細胞的增殖。

本次研究發現, 冠心病患者外周血中的miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222表達水平與健康成年人表達水平有明顯差異, 同時其表達水平與冠狀動脈的狹窄程度具有一定的關系。所以通過檢測冠心病患者外周血中的miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222表達水平能間接的反映出患者冠狀動脈的狹窄程度以及內皮損傷的嚴重性。讓microRNA有望成為新型的心血管疾病診斷標準以及靶向治療的生物學標志物。

［1］ 聶曉敏, 蘇利霄, 周雅婧, 等.冠心病患者血漿微小RNA-221和微小RNA-222與側支循環形成的相關性研究.中國醫藥, 2014, 9(6):778-782.

［2］ 張佳菊, 王莉娜, 馮毅, 等.微小RNA-1靶基因多態性與早發冠心病發生風險的關聯研究.中華心血管病雜志, 2012, 40(5): 386-391.

［3］ 李凝詩, 楊麗霞, 郭瑞威, 等.冠心病患者外周血單個核細胞中microRNA-155及146a的表達水平.西南國防醫藥, 2014, 24(4):380-382.

［4］ 石曉鳳, 韋小未, 朱建兵, 等.microRNA 與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的相關性研究.中華臨床醫師雜志(電子版), 2013, 11(24):11140-11143.

［5］ Marraccini P, Bianchi M, Bottoni A, et al.Prevalence of thyroid dysfunction and effect of contrast medium on thyroid metabolism in cardiac patients undergoing coronary angiography.Acta Radiologica, 2013, 54(1):42-47.

［6］ 周娜, 梁軍, 騰飛, 等.糖代謝異常對冠心病相關血清微小RNA表達的影響.中華老年心腦血管病雜志, 2013, 15(1):14-17.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.10.033

2014-09-05］

510180 廣州市第一人民醫院心血管內科