正交試驗法優選杧果葉中芒果苷的閃式提取工藝*

龔云麒，高小惠，李 瑩，張 偉，楊兆祥

(昆明制藥集團股份有限公司藥物研究院，云南 昆明 650100)

正交試驗法優選杧果葉中芒果苷的閃式提取工藝*

龔云麒，高小惠，李 瑩，張 偉△，楊兆祥

(昆明制藥集團股份有限公司藥物研究院，云南 昆明 650100)

目的 研究杧果葉中芒果苷的閃式提取工藝。方法 以芒果苷的提取轉移率為指標，采用正交試驗設計，對閃式提取的影響因素進行考察。結果 閃式提取的最佳工藝是10倍70%乙醇、提取3次、每次提取8 min。結論 該方法操作簡單，速度快，提取率高，可為杧果葉的開發利用提供參考。

杧果葉；芒果苷；閃式提取；正交試驗

杧果葉為漆樹科植物芒果(MangiferaindicaL.)的葉，具有止咳、化滯、止癢的功效，主治消渴，疳積，濕疹瘙癢，疣[1]。現代研究表明芒果葉提取物具有平喘、止咳、祛痰、抗炎、鎮痛、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用[2]。芒果苷(mangiferin)又名芒果素，知母寧，為杧果葉中的有效成分。研究發現，芒果苷具有廣泛的藥理活性，包括抗糖尿病、抗腫瘤、抗氧化、抗炎、免疫調節、解熱、鎮咳、平喘等作用[3]。此外，還有研究表明芒果苷可顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸、肌酐和尿素氮水平，具有促進腎臟尿酸排泄和保護腎功能作用[4]。可見芒果苷具有廣泛的開發前景。

芒果苷提取，傳統的提取方法多為有機溶劑回流提取，存在提取時間長、能耗高等問題。近幾年發展的閃式提取技術是依據組織破碎提取的原理，利用適當溶劑在閃式提取器里將物料快速破碎至適當粒度，同時具有高速攪拌、超強振動、負壓滲濾等功能來達到提取目的，具有省時、節能、有利環保等優勢[5]。本實驗以芒果苷含量為指標成分，應用正交試驗，對閃式提取杧果葉中有效成分的工藝條件進行優選，以期為提取杧果葉中芒果苷提供新的思路和數據支持。

1 儀器和試劑

JHBE-50T型閃式提取器(河南智晶科技有限公司)；步琦R-215型旋轉蒸發儀(瑞士步琦公司)；賽多利斯BP-221S型電子天平(德國賽多利斯公司)；Aglient1260高效液相色譜系統(美國安捷倫公司)。干燥杧果葉，購自西雙版納。經中科院劉恩德博士鑒定為漆樹科植物芒果Mangifera indica L.的干燥葉。乙腈(美國Fisher公司，色譜純)；乙醇為分析純，水為純化水。

2 方法和結果

2.1 色譜條件 色譜柱為 PhenomenexGimin C18(150 mm × 4.6 mm，5μm)；流動相：以0.2%磷酸水溶液-甲醇(70∶30)為流動相；檢測波長為240 nm；流速為1.0mL·min-1；柱溫為30℃[6]。理論塔板數按芒果苷峰計算應不低于5000，結果見圖1、圖2。

圖1 芒果苷對照品色譜圖

圖2 杧果葉藥材色譜圖

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取芒果苷對照品適量，加80%甲醇溶解，并稀釋制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率35kHz)30 min，放冷，稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 標準曲線的制備 精密稱取芒果苷對照品適量，加80%甲醇制成0.354 mg·mL-1的濃溶液，分別精密量取濃溶液適量，用80%甲醇分別稀釋成0.354、0.295、0.236、0.177、0.118、0.0886、0.0591、0.0295 mg·mL-1的對照品溶液，按照確定的色譜條件，分別取10 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以芒果苷濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，的回歸方程為y=31133x-12.824，r=0.9999。

2.5 精密度、穩定性、加樣回收率實驗 取芒果苷對照品溶液，重復進樣6 次，記錄芒果苷峰面積，其RSD為0.28%。結果表明儀器精密度良好。

分別精密吸取同一份供試品溶液于制備后0、1、2、4、6、8、10、12 h進樣，測定芒果苷的峰面積，其RSD為0.24%，說明芒果苷對照品溶液在常溫下12 h內穩定。

取已知芒果苷質量分數的藥材9份，加入相應對照品溶液適量，制備供試品溶液，并按上述色譜條件進行測定，結果芒果苷平均回收率為102.4%，RSD%為2.55%，符合實驗要求。

2.6 正交試驗設計 參考文獻及相關報道，選用乙醇作溶劑設計正交試驗。選擇提取次數、提取時間、溶劑濃度、溶劑倍數為考察因素，每個因素設計4 個水平，采用(L1644)進行正交試驗。因素水平見表1。

表1 杧果葉閃式提取工藝研究正交試驗因素水平表

2.7 試驗方法和結果 分別稱取已知芒果苷質量分數的杧果葉藥材粗粉50 g，根據因素水平表進行閃式提取，提取器轉速固定為2000r/min，提取后減壓抽濾，取濾渣，置干燥箱中干燥，測定濾渣中芒果苷的含量后計算芒果苷的轉移率。結果見表2。將數據進行方差分析，結果見表3。

表2 芒果苷閃式提取表

表3 方差分析表

F0.05(2，2)=19.00

由上述結果可看知，以提取轉移率為指標，各因素影響的大小依次為A>D>C>B。通過方差分析可知，4個因素中，A具有顯著性影響(P<0.05)，其他因素均不具有顯著影響。經正交試驗得出的最佳組合是A3B2C3D1，即10倍70%乙醇、提取3次每次提取8min。

2.8 驗證試驗 稱取杧果葉藥材粗粉3份，每份50 g，按A3B2C3D1提取條件進行3次平行操作，測定芒果苷含量，計算轉移率，分別為97.86%，99.23%，98.49%，表明該方法穩定可行。

3 討論

從試驗結果來看，運用閃式提取法對杧果葉中芒果苷進行提取，有效成分幾乎能夠完全被提取，試驗過程使用的溶劑全部為食用乙醇，無毒、廉價且易于回收。閃式提取與傳統加熱回流法相較，不需要加熱，降低了能耗，也減小了資源的浪費，而且保護了有效成分不受溫度的影響。

[1]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海：上海科學技術出版社，1999：(5)80-81.

[2]胡彥君，劉燊，王定勇.芒果葉的化學成分研究[J].亞太傳統醫藥，2010，6(3)：18-19.

[3]姚風艷，孫連娜.芒果苷藥理作用及其結構修飾的研究進展[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20(12)：248-252.

[4]胡慶華，張憲，王玨，等.芒果苷促進高尿酸血癥小鼠尿酸排泄和腎功能改善以及調節相關腎臟轉運體的作用[J].藥學學報，2010，45(10)：1239-1246.

[5]劉延澤.植物組織破碎提取法及閃式提取器的創制與實踐[J].中國天然藥物，2007，5(6)：401-407.

Flash Extraction Process of Mangiferin in Mango Leaves by Orthogonal Test

GONG Yun-qi, GAO Xiao-hui, LI Ying, ZHANG Wei, YANG Zhao-xiang

(DrugInstitute,KunmingPharmaceuticalGroupCo.,Ltd.,Kunming650100,Yunnan)

Objective: To study the flash extraction process of mangiferin in mango leaves. Methods: By taking mangiferin extraction transfer rate as an index, orthogonal experiment was designed to investigate the influence factors of the flash extraction. Results: The optimal process of the flash extraction was 10 times of 70% ethanol, extracted three times and extracted 8 min each time. Conclusion: The method is simple and fast with high extraction rate and can provide a reference for the development and utilization of mango leaves.

mango leaves, mangiferin, flash extraction, orthogonal test

云南省科技計劃(NO：2012BC008).

龔云麒(1981.8-)，男，漢族，云南安寧人，工程師，從事植物有效成分提取分離研究，E-mail：gongyun911@163.com

△通信作者:張偉，Tel：0871-68183902，E-mail：wzhangkm@sohu.com

R284.2

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1007-2349(2015)07-0061-03

2015-03-04)