HPLC法同時測定利膽排石片中4種蒽醌類成分的含量探索

秦黎明 李啟彬

·實驗研究·

HPLC法同時測定利膽排石片中4種蒽醌類成分的含量探索

秦黎明 李啟彬

目的探討高效液相色譜法(HPLC)同時對利膽排石片中4種蒽醌類成分含量測定情況。方法 指定具有豐富經驗及專業知識的實驗室檢驗人員完成各批次利膽排石片中4種蒽醌類成分含量檢測工作, 將所得數據經專業分析后獲得結論。結果 各批次利膽排石片中大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚等4種蒽醌類成分含量經HPLC測定后對比, 差異無統計學意義(P＞0.05)。結論 利膽排石片經HPLC可同時對其4種蒽醌類成分含量進行準確測定, 有利于提高藥品質量控制效果, 保障患者療效及預后。

利膽排石片；高效液相色譜法；蒽醌類；含量測定

利膽排石片是臨床常用的膽囊炎、膽結石治療藥物, 屬于純中藥制劑。本文將探討HPLC同時對利膽排石片中4種蒽醌類成分含量測定情況, 為提高利膽排石片質量控制效果提供可靠依據, 現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器 ①試劑：廣州白云山和記黃埔中藥有限公司提供利膽排石片(批號20140521、20140809、20141217)、中國藥品生物制品檢定所提供4種蒽醌類成分對照品(大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、大黃酚)、超純水、色譜純(甲醇)；②儀器：美國惠普公司(Hewlett-Packard Development Company, L.P., 簡稱HP)提供1100型高效液相色譜儀、美國沃特世公司(Waters)提供紫外檢測器及Empower色譜工作站、德國賽多利斯集團(sartorius)提供cp 225D 電子天平, 大連依利特分析儀器有限公司提供SinoChron ODS-BP色譜柱(規格5 μm, 4.6 mm×200 mm)。

1.2 方法［1］指定具有豐富經驗及專業知識的實驗室檢驗人員完成各批次利膽排石片中4種蒽醌類成分含量檢測工作。具體操作為：①制備對照品溶液：取對照品精密稱量后放置于量瓶中(規格10 ml)并加入1 ml三氯甲烷, 震蕩溶解并稀釋定容后即得對照品儲備液, 取適量稀釋并制成對照品混合溶液, 其中大黃素甲醚、大黃酚、大黃素、大黃酸濃度分別為81.30、112.0、303.0、70.70 μg/ml；②制備供試品溶液：精密稱定0.15 g利膽排石片(粉末)并加入25 ml甲醇定量, 給予1 h加熱回流處理后自然冷卻, 稱重后利用甲醇補足失去重量, 搖晃使之混合均勻后過濾, 精密稱取5 ml濾液并放置于燒瓶中, 將溶劑揮發后加入8%、10 ml鹽酸溶液(分析純)并給予2 min超聲處理, 之后加入10 ml三氯甲烷并再次給予1 h加熱回流, 待自然冷卻后放置于分液漏斗中, 將容器經三氯甲烷洗滌后洗滌液放入同一分液漏斗,將三氯甲烷層分取并對酸液給予3次三氯甲烷提取(10 ml/次), 將提取液混合后減壓回收, 殘渣中加入1 ml三氯甲烷使之溶解并將其置于量瓶中(規格10 ml), 甲醇定容并搖勻,取濾液即得供試品溶液；③含量檢測：波長調整為254 nm,色譜柱溫度設定為試問, 進樣量10 μl, 流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液(分析純)(80∶20, 流速1.0 ml/min)回歸方程分別為大黃素甲醚Y=5.774×104X-4.083×103(r=0.9996)、大黃酚Y=8.145×104X-2.212×104(r=0.9997)、大黃素Y=5.698× 104X-8.351×103(r=0.9998)、大黃酸Y=3.515× 104X-3.809×103 (r=0.9999)。記錄各批次利膽排石片中4種蒽醌類成分含量檢測結果, 將所得數據經專業分析后獲得結論。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差(-x±s)表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

各批次利膽排石片中大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚等4種蒽醌類成分含量經高效液相色譜法測定后對比,差異無統計學意義(P＞0.05), 提示各批次利膽排石片質量控制效果良好。見表1。

表1 各批次利膽排石片4種蒽醌類成分含量測定情況分析

3 討論

利膽排石片組成成分包括木香、大黃、茵陳、黃芩、金錢草等十味中藥, 諸藥合用可達消積導滯、破氣除脹、清熱利濕、和胃利膽之功效, 臨床主要用于治療因濕熱蘊毒、腑氣不通引起的膽脹、脅痛等證(如膽石癥、膽囊炎等)［2］。有研究顯示, 藥物質量將直接影響疾病治療及預后效果。近年來由于人們自我保護意識逐漸增強, 對藥物質量關注度也不斷提高, 如何有效控制藥物質量已成為廣大醫務工作者共同關心的熱點問題。

研究表明, 以往利膽排石片質量標準主要涉及黃芩含量測定, 不利于全面掌握該藥物有效成分及獲得滿意質量控制效果。HPLC操作簡單、方便快捷, 將色譜條件設置合理后出峰時間快且峰形較好, 是臨床常用的藥品含量檢測方法［3］。本文中利用HPLC對利膽排石片中4種蒽醌類成分含量實施同時測定可知, 其各批次檢測結果對比并無顯著差異, 提示利膽排石片質量控制效果較為理想。

綜上所述, 利膽排石片經HPLC可同時對其4種蒽醌類成分含量進行準確測定, 有利于提高藥品質量控制效果, 保障患者療效及預后, 值得今后推廣。

［1］ 張秋蓉, 王麗芳, 劉文燕.HPLC法同時測定膽寧片中5種蒽醌類衍生物含量.中國藥物警戒, 2012, 9(1):3-6.

［2］ 徐冬艷, 劉斌.HPLC法測定降脂寧調脂抗氧化有效部位中4種蒽醌類成分的含量.北京中醫藥大學學報, 2010(3):203-206.

［3］ 肖晶, 楊杰, 高尚偉.HPLC法測定保健食品中蒽醌類成分的含量.中國食品衛生雜志, 2010, 22(1):27-30.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.31.211

2015-04-02］

463000 河南省駐馬店市食品藥品檢驗所