復方五味子制劑中總磷量質控方法的研究

胡 青，于 泓，孟 茜，季 申

(上海市食品藥品檢驗所，上海 201203)

復方五味子制劑分為片劑和糖漿兩種劑型，均由五味子、維生素B1、甘油磷酸鐵和甘油磷酸鈉、甘油磷酸鉀(糖漿)或甘油磷酸鈣(片劑)以及其他輔料等制成的中西復方制劑，用于改善神經衰弱所致頭暈、頭痛、乏力、心悸以及失眠等癥狀［1，2］，其中甘油磷酸等具有營養中樞神經，補充人體對磷的需求，調節人體正常生理機能的作用。兩個品種現行標準均為國家藥品監督管理局國家藥品標準(試行)，標準中均僅進行五味子的鑒別檢驗，缺乏對制劑中總磷含量測定方法，總體上難以對制劑質量進行有效控制。

總磷量測定廣泛應用于水體、飼料、煙草、藥品等領域，測定前須先將樣品消化，將不同形態的磷轉化成磷酸根后檢測。消化方法一般有酸消化法［3］、微波消解法［4］、高溫熾灼［5］等。檢測方法以紫外光譜法［5］最為常見，磷酸根與鉬酸銨等顯色劑作用后檢測，專屬性強，簡單準確，易于推廣，適用于藥品常規總磷含量檢測。此外基于近紅外漫反射光譜和化學計量學的近紅外光譜法［6］，可在不破壞樣品的情況下分析總磷含量，但易受基質影響。離子色譜法［7］結果準確，靈敏度高，但對于復雜基質樣品須固相萃取柱［3］等手段凈化，檢測成本高。Szyk等［8］使用毛細管等速電泳檢測豆制品中總磷量，靈敏度更高，檢測限低(約 0.17mg·kg－1)，結果更準確(RSD≤1%，回收率99%)。本試驗參考《中國藥典》2010 年版［9］和有關文獻［10～12］，并結合中西復方藥基質復雜特點，且須適用于不同劑型檢測，選擇建立高溫熾灼后紫外分光光度法測定制劑中總磷量，以達到全面有效地對復方五味子制劑進行質量控制。

1 材料與儀器

島津UV2550紫外分光光度計;磷酸二氫鉀對照品(Merck公司，優級純，批號:104873);其余試劑均為分析純［中國醫藥(集團)上?；瘜W試劑公司］;超純水(Milli－Q純化系統);復方五味子糖漿(A廠，批號:1005101、1005102、100319;B 廠，批號:20100314、20100401、20090201;C 廠，批號:110401、110201);復方五味子片(D 廠，批號:20111201、20111202、20111203)。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液制備 對照品溶液:精密稱取105℃干燥至恒重的磷酸二氫鉀對照品0.143 g，置100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10mL，置500mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻(每1mL磷酸二氫鉀溶液相當于20 μg的磷酸根)。

樣品溶液:精密量取糖漿2mL或片劑研細后精密稱取0.3 g，加水2mL，置預先加入氫氧化鈣0.2g的坩堝中，攪拌后用小火蒸干灼燒至無煙，轉移至馬弗爐600℃熾灼3 h，至殘渣呈灰白色，放冷，用稀鹽酸10mL溶解并轉移至250mL量瓶中，坩堝用水洗凈，洗液并入量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取3mL，置50mL量瓶中，加磷顯色劑［3 mol·L－1硫酸溶液－水－2.5%鉬酸銨溶液－10%抗壞血酸溶液(1∶5∶1∶1)］10mL，搖勻，于70 ℃水浴中加熱10min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2 線性關系考察 精密量取對照品溶液0、2、3、4、5、6、7mL，分別置50mL 量瓶中，按照樣品溶液制備方法，自“2.1”項下“加入磷顯色劑10mL”起依法操作。以加入0mL顯色劑溶液作空白，在829 nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。進行回歸分析，結果表明，以磷酸根計在 0.800 ～2.800 μg·mL－1范圍內濃度與吸光度呈良好線性關系(r=1.0000)。

2.3 精密度試驗

2.3.1 重復性試驗 精密量取糖漿品(批號:110201)2mL一式6份;片劑樣品(批號:110201)0.3 g各6份照樣品溶液制備方法操作。以純水作空白，測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液的磷酸根濃度，計算含量。糖漿樣品測定結果RSD為1.18%，片劑樣品測定結果為0.58%，平均RSD=0.88%。結果表明，本方法適用于兩種劑型重復性較好，結果見表1。

表1 重復性試驗(n=6)

2.3.2 中間精密度 由不同的分析人員在不同的日期、不同儀器設備對3批樣品進行了含量測定，結果RSD在1.07% ～1.82%。結果表明，由不同的分析人員在不同的日期、不同儀器設備上測得的結果一致，方法的中間精密度良好。

2.4 穩定性試驗 精密量取糖漿品(批號:110201)2mL、片劑樣品(批號:20111201)0.3 g各2份照樣品溶液制備方法操作。分別于0、3、6、12 h測定樣品。結果表明，12 h內磷酸根與顯色劑反應后穩定性良好。

2.5 加樣回收試驗 精密量取糖漿品(批號:110201，測得含量為0.365%)1mL或片劑(批號:20111201，測得含量為21.71mg·g－1)細粉0.15 g，各一式9份，分別置預先加入氫氧化鈣0.2g的坩堝中。糖漿分別精密加入1mg·mL－1標準磷酸根溶液3、4、5mL，片劑分別精密加入600 μg·mL－1標準磷酸根溶液4、5、6mL，按照樣品處理方法操作，測定吸光度，從標準曲線上讀出的磷酸根濃度，計算加樣回收率。結果表明，擬定方法準確度較高，結果見表 2、3。

2.6 樣品測定 按照擬定的方法，對4個廠家生產的11批樣品進行測定，結果見表4。

表2 加樣回收試驗－糖漿

表3 加樣回收試驗－片劑

表4 樣品測定(n=2)

3 討論

3.1 檢測波長選擇 分別取磷酸二氫鉀對照品溶液，糖漿樣品，片劑樣品，以純水作為空白對照，照樣品溶液制備方法，自“2.5”項下“置預先加入氫氧化鈣0.2g的坩堝中”起依法操作。含磷樣品高溫灼燒后，以酸溶解生成磷酸根，在酸性條件下與鉬酸銨和抗壞血酸作用生成亮藍色的絡合物鉬藍［9］。在600～900 nm范圍內掃描溶液吸光度。829 nm處有最大吸收，且空白溶液無干擾，即確定829 nm作為本方法檢測波長。

3.2 熾灼時間考察 僅適用電熱板灼燒樣品，受熱不均勻，表層以及坩堝壁上的樣品無法消化完全，導致回收率偏低。因此需要在馬弗爐中熾灼至灰化完全，對比1、2、3、4 h熾灼效果，熾灼 3 h可將樣品中全部磷轉化成5價，回收率達到95%以上。

3.3 磷顯色劑量考察 本試驗應保證磷顯色劑加入量為過量，以保證磷顯色完全，試驗中根據磷酸根的濃度推算加入磷顯色劑遠遠超過反應需要量。

復方五味子糖漿為中西復方制劑成分復雜，采用該法熾灼后測定總磷量，操作簡單，穩定性重復性均較好，不易受基質干擾。同時，該方法還可作為其他藥品品種總磷量測定方法參考。

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