離子色譜法測定托吡酯中氨基磺酸鹽和硫酸鹽的含量

劉家勝，孫建合

(魯南制藥集團股份有限公司，國家手性制藥工程技術研究中心，山東 臨沂 276006)

托吡酯(Topiramate)是一個由氨基磺酸酯取代單糖的新型、安全的廣譜抗癲癇藥物，具有多重抗癲癇作用機制［1，2］，在臨床上已經得到廣泛的認可和使用，取得了較好的臨床療效［3，4］。托吡酯由美國強生制藥公司(Johnson＆Johnson)開發，于1995年在英國首次上市，美國食品藥品監督管理局(FDA)于1996年批準用于治療成人原發性部分性癲癇，于2000年批準用于兒童癲癇治療［5］。氨基磺酸鹽和硫酸鹽為托吡酯原料的無機降解產物，《美國藥典》USP35版中采用高效液相色譜聯合電導檢測器的方法對托吡酯原料中氨基磺酸鹽和硫酸鹽進行測定，并規定二者的限度均為0.1%。而馮金元等［6］采用間接紫外檢測離子色譜法對托吡酯片中氨基磺酸鹽和硫酸鈉進行了測定，但靈敏度較低。離子色譜法(IC)是一種主要用于陰、陽離子的新型分析技術，具有選擇性好［7］，靈敏、快速、簡便、環保，近年來也被應用于藥物及合成中間體的分析等方面［8］。但國內尚未見到采用離子色譜法測定托吡酯中氨基磺酸鹽和硫酸鹽的相關報道。本文采用離子色譜法，建立了托吡酯原料中氨基磺酸鹽和硫酸鹽含量的測定方法，經方法學驗證，該法靈敏度高、專屬性強、精密度好、回收率高，可準確測定托吡酯原料中氨基磺酸鹽和硫酸鹽的含量，有效控制托吡酯原料的質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Dionex ICS－1100型離子色譜儀;DS6電導檢測器;Dionex AS－DV自動進樣器;Chromeleon色譜工作站;Hamilton PRP－X100陰離子交換色譜柱(4.6mm × 150mm，5μm);Thermo Asrstm 3004mm抑制器;Cascadatm LS MK2超純水系統(PALL公司);梅特勒XS205DU型電子天平。

1.2 試藥 氨基磺酸對照品(含量:99.99%，Alfa Aesar公司);硫酸鈉對照品(含量:100%，國家標準物質，國防科技工業應用化學一級計量站);對羥基苯甲酸(優級純，ACROS公司);硫酸、氫氧化鈉均為分析純，試驗用水均為電阻率為18.2 MΩ·cm的超純水;甲醇(色譜純，MERCK公司);托吡酯原料藥(山東新時代藥業有限公司，批號:121202、121203、121204)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 淋洗液:甲醇－0.8 g·L－1對羥基苯甲酸緩沖液(2.5∶97.5)(用氫氧化鈉溶液調 pH值至 10.0 ±0.1);再生液:5mmol·L－1硫酸溶液;檢測器溫度:30℃;流速:1.5mL·min－1;進樣量:100μL。

2.2 標準曲線 精密稱取氨基磺酸對照品15.22mg和硫酸鈉對照品22.56mg，置50mL量瓶中，加淋洗液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液;精密量取 20、50、80、100、120、150 和 200μL，分別置10mL量瓶中，用淋洗液稀釋至刻度，搖勻，依法測定，以濃度(C)對峰面積(A)進行線性回歸，得氨基磺酸鹽的回歸方程A=0.0987C+0.018，r=0.9993(n=7);得硫酸鹽的回歸方程A=0.1641C+0.0152，r=0.9994(n=7)。結果表明，氨基磺酸鹽(以NH2SO3－計)在 0.61 ～6.09 μg·mL－1濃度范圍內線性關系良好;硫酸鹽(以SO42－計)在 0.90～9.02 μg·mL－1濃度范圍內線性關系良好。

2.3 供試品溶液和對照品溶液的制備 取托吡酯適量，精密稱定，用淋洗液溶解并稀釋制成每1mL中含托吡酯6.0mg的溶液，作為供試品溶液;另取無水硫酸鈉和氨基磺酸對照品各適量，精密稱定，用淋洗液溶解并稀釋成每1mL中含氨基磺酸3.0 μg、硫酸鈉4.5 μg的溶液，作為對照品溶液。

2.4 專屬性試驗 取空白溶液(淋洗液)、對照品溶液和供試品溶液各100μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，色譜圖見圖1。

圖1 托吡酯IC譜圖

2.5 重復性試驗 取托吡酯(批號:121202)，依法制備供試品溶液6份，分別進樣測定，結果氨基磺酸的平均含量為0.0039%，RSD=5.37%;硫酸鈉的平均含量為0.0027%，RSD=6.51%。表明本法的重復性良好。

2.6 精密度試驗 取托吡酯(批號:121202)，依法制備供試品溶液，重復測定6次，結果氨基磺酸峰面積的 RSD為2.55%，硫酸鈉峰面積的 RSD為1.86%，精密度良好。

2.7 加樣回收率試驗 取已知氨基磺酸鹽和硫酸鹽含量的托吡酯60mg，精密稱定，共6份，分別置10mL量瓶中，再精密加入標準曲線項下的對照品儲備液96μL，加淋洗液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按“2.3”項下配制對照品溶液。按“2.1”項下的色譜條件進行測定，結果氨基磺酸鹽的回收率為97.21% ～106.27%，平均回收率為103.22%，RSD為 6.60%;硫酸鹽的回收率為96.88%～105.05%，RSD為5.39%。說明此法測定托吡酯中的氨基磺酸鹽和硫酸鹽含量回收率良好。

2.8 穩定性試驗 將供試品溶液在室溫條件下放置，分別于 0、1、2、4、6、8、10、12、24 h 取樣測定，記錄色譜圖。結果氨基磺酸鹽峰面 積的 RSD為2.57%，硫酸鹽峰面積的 RSD為3.48%，表明供試品溶液在室溫下24 h內穩定性良好。

2.9 檢測限 取對照品溶液逐級定量稀釋，以信噪比(S/N)=3時，氨基磺酸鹽的檢測限濃度為0.07 μg·mL－1，硫酸鹽的檢測限濃度為0.06 μg·mL－1。

2.10 樣品測定 取3批托吡酯原料藥(批號:121202、121203、121204)，精密稱定，按“2.3”項下方法制備供試品溶液和對照品溶液，依法測定，結果見表1。

表1 樣品測定結果

3 討論

對淋洗液的pH值進行了考察，結果淋洗液pH=10時，峰形較好，靈敏度較高，通過試驗摸索，淋洗液pH值在(10.0±0.1)范圍內，均能達到靈敏度要求。為消除溶液干擾，外部連接抑制器，選擇硫酸溶液作為再生液，當硫酸濃度為5mmol·L－1，獲得理想色譜圖，靈敏度高，溶液無干擾。通過試驗摸索建立的離子色譜法測定托吡酯原料中氨基磺酸鹽和硫酸鹽的含量，該方法快速、方便，靈敏度高、重現性好，氨基磺酸鹽峰和硫酸鹽峰形較好，溶液干擾較小，可準確測定托吡酯原料中氨基磺酸鹽和硫酸鹽的含量，有效控制托吡酯原料的質量。

［1］趙忠新，黃堅.抗癲癇新藥托吡酯臨床應用研究進展［J］.中國新藥與臨床雜志，2001，20(1):65 －67.

［2］王薇薇，吳遜.托吡酯(Topiramate)－一種新型抗癲癇藥［J］.中國臨床藥理學雜志，1999，15(3):212 －215.

［3］劉鳳英，王學峰.托吡酯單藥治療新診斷的癲癇［J］.中國新藥雜志，2007，16(2):107 －111.

［4］周克英，張蔚，陳霆，等.托吡酯長期治療癲癇的耐受性與安全性［J］.實用兒科臨床雜志，2004，19(7):579－581.

［5］郁金泰，歐江榮，譚蘭.托吡酯治療癲癰的現況及前景［J］.中國新藥與臨床雜志，2008，27(10):791 －794.

［6］馮金元.間接紫外檢測離子色譜法測定托吡酯片的無機降解產物［J］.中國藥業，2012，21(14):53－55.

［7］吳燕，米亞嫻.離子色譜法及其在藥物分析中的應用［J］.天津藥學，2011，23(4):50 －53.

［8］牟世芬，劉克納.離子色譜方法及應用［M］.北京:化學工業出版社，2000:1－3.