HPLC法測定奧美拉唑鎂原料藥中醋酸的殘留量

李菊平，劉效平，金永亮

(1.山東大學藥學院，山東 濟南 250012;2.壽光富康制藥有限公司，山東 濰坊 262700;3.西北農林科技大學資源環境學院，陜西 咸陽 712100)

在奧美拉唑鎂工藝合成中使用了醋酸［1～4］調節pH，醋酸殘留在文獻中一般采用氣相色譜法［5～9］測定醋酸的殘留，但在試驗過程發現氣相色譜GCFID色譜條件下方法的冰醋酸的響應值很小，且重現性受GC色譜條件如溶劑、不同批次的色譜柱、不同品牌的儀器靈敏度影響大。因此我們使用更為穩定的高效液相色譜法(HPLC)系統使用外標法對奧美拉唑鎂冰醋酸的殘留進行控制，由于奧美拉唑在此波長210 nm下沒有吸收，因此對冰醋酸的吸收峰沒有干擾，且在實驗中發現，若成品中的醋酸殘留超過0.05%很容易使奧美拉唑鎂降解［2］，UV吸光度變化明顯，導致藥物不穩定，《中國藥典》2015年版［10］和人用藥品注冊技術要求國際協調會(ICH)中均將醋酸列為三類溶劑，因此需要對它的殘留量進行檢測［11］。文獻沒有用HPLC法C18色譜柱進行檢測原料藥中醋酸的報道，相對于已有的離子色譜法［12］，C18色譜柱比離子色譜柱更耐用、更穩定。本文建立了HPLC方法C18色譜柱測定醋酸在奧美拉唑鎂的殘留，方法靈敏，色譜柱耗材易于采購，穩定性好，檢測成本低，操作簡便、結果準確，方法重現性好 符合《中國藥典》2015年版［10］的有關規定。

1 儀器與試藥

Agilent 1200液相色譜儀，UV檢測器，自動進樣器，柱溫箱，X －Bridge TM C18(4.6mm ×250mm，5μm)色譜柱;奧美拉唑鎂原料藥(壽光富康制藥有限公司，批號:52111505001、52111505002、52111505003)。

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱:X－Bridge C18(4.6mm×250mm，5μm)檢測波長:210nm;流速:1.2mL·min－1;進樣量:20μL;柱溫:35 ℃;流動相:0.07%磷酸溶液(用氫氧化鈉溶液調節pH至3.0):甲醇 =950∶50;溶媒:50%甲醇。

2.2 方法 標準貯備液:取醋酸100mg，精密稱定，置于100mL容量瓶中，用溶媒稀釋至刻度。

對照品溶液:準確量取5mL標準貯備液置于100mL容量瓶中，用溶媒稀釋至100mL。

供試品溶液:稱取樣品1.0g，精密稱定，置于10mL容量瓶中，用溶媒溶解，漩渦振蕩器振蕩1min，混合均勻，用溶媒稀釋至刻度，微孔濾膜過濾。

系統適用性:①對照溶液連續進樣6次，RSD≤2%;②分離度溶液中雜質峰與相鄰雜質峰的分離度應大于1.5。圖譜見圖1。

外標法計算:奧美拉唑鎂中殘留的醋酸不得超過0.05%(即10%的ICH限度)。

圖1 HPLC圖譜

2.3 線性關系考察 分別精密量取“2.2”項下的標注貯備液1、2、4、5、6mL 分置于5 個100mL 容量瓶中，分別用溶媒稀釋至100mL，搖勻，得系列濃度的溶液，按“2.2”項下的色譜條件測定，分別以濃度X(mg·mL－1)為橫坐標，峰面積Y為縱坐標進行線性回歸，醋酸在其濃度范圍內線性關系良好)。線性方程為:Y=0.01209X+582.94186;相關系數 r=0.999994。結果:冰醋酸檢測濃度線性范圍為0.01 ～0.06mg·mL－1。

2.4 精密度試驗 取對照溶液，按，按“2.1”項下的色譜條件測定，連續進樣6次，醋酸峰面積的檢測結果為29.82、29.26、28.51、28.74、29.62、28.58，平均值為29.09，RSD 為1.92%，精密度良好。

2.5 檢測限定量限試驗 將對照品濃溶液逐級稀釋后，依法測定，直至信噪比 S/N=10.4 不低于10∶1，所得的最低檢測濃度即為定量限度 25.0 μg·mL－1(250 ppm);直至信噪比 S/N=3.1 不低于3∶1，所得的最低檢測濃度即為檢測限度 5.0 μg·mL－1(50 ppm)，且檢測限低于定量限的30%。

2.6 回收率試驗 分別稱取奧美拉唑鎂(批號:52111505001)5 g，精密稱定，置于9個50mL容量瓶中，按照限度要求對限度濃度的80%、100%、120%3個水平對9份樣品進行加標，即加入4、5、6mL標準儲備液，每個水平濃度重復3次，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，計算醋酸的回收率和RSD，結果見表1。

表1 回收率試驗結果

結果表明，3個濃度下方法的回收率滿足要求。

2.7 樣品測定 分別量取對照溶液和供試品溶液按“2.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算供試品中醋酸的殘留，結果3批樣品(批號:52111505001、52111505002、52111505003)均未檢出。

3 討論

冰醋酸在奧美拉唑鎂的工藝中既是反應物又調節pH值，酸性物質的存在會對奧美拉唑鎂的穩定性產生影響，酸性條件下產品很容易降解，為增加產品的穩定性，需要用穩定、經濟的方法對冰醋酸在原料藥奧美拉唑鎂中的殘留進行嚴格控制。《中國藥典》2015年版和人用藥品注冊技術要求國際協調會(ICH)中均將醋酸列為三類溶劑，殘留限度是5000 ppm。用常規的頂空－氣相色譜(HS－GC)法檢測發現其峰面積響應值很小，信噪比S/N低于3.0;而用氣相色譜－質譜(GC－MS)檢測會增加產品的檢測成本。因此我們開發HPLC法對冰醋酸的殘留進行控制，冰醋酸能夠與奧美拉唑鎂中的可檢測組分完全分離，準確度高，并且檢測成本低。雖然法定限度是NMT 5000 ppm，但我們對冰醋酸制定了更嚴格的內控標準NMT 500 ppm(10%的ICH限度)，保證了產品在整個生命周期內的穩定性。

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