HPLC法測定山術運腸丸中阿魏酸的含量

劉黎明

(臨沂市蘭山區食品藥品監督管理局，山東 臨沂 276000)

山術運腸丸為山藥、白術、當歸、地黃、陳皮、何首烏組成的復方制劑，具有益肺運脾，補肝益腎，調腸理便之功效，主治初始性便秘。該驗方收載于《山東省醫療機構制劑規范》［1］。該醫院制劑質控標準較為簡單，無相關定量測定項，為完善質量標準，選用高效液相色譜法(HPLC)測定當歸中有效成分阿魏酸作為定量控制方法，該方法分離效果好，準確可靠，適合于該制劑質量控制。

1 儀器與試藥

LC－20AT高效液相色譜儀(日本島津公司);Milipore超純水制備系統;XS105D型電子天平(Mettler Toledo公司)。阿魏酸對照品(批號:110773－200611，中國藥品生物制品檢定所);供試品為臨沂市某中醫院提供;所用試劑甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余所用試劑均為分析純。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件 Sunfire C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，乙腈－0.1% 磷酸溶液(18∶82)，檢測波長316 nm，流速1.0mL·min－1，進樣量10μL，柱溫35℃。理論塔板數按阿魏酸峰計算均不低于5000。在此色譜條件下，阿魏酸與相鄰成分色譜峰達到基線分離，且陰性對照無干擾，結果見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取阿魏酸對照品11.85mg置100mL棕色量瓶中，加70%甲醇適量振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 供試品溶液 取本品約10g，研細，取約1.7 g，精密稱定，加70%甲醇30mL，超聲處理30min，過濾，加70%甲醇20mL洗滌殘渣，過濾，合并濾液，蒸干，殘渣加水15mL溶解，乙酸乙酯萃取4次(20、20、15、15mL)，合并萃取液并蒸干，殘渣用70%甲醇溶解，轉移至10mL量瓶中，以70%甲醇定容，搖勻，以0.45μL微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液 取缺當歸的處方藥，按照“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備不含當歸的陰性對照溶液。

2.3 線性關系考察 精密量取對照品溶液各1、2、4、6、8、10、12μL 分別進樣于液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積(Y)對進樣量(X)進行線性回歸，繪制標準曲線，計算，得回歸方程Y=355500X－8754.6，r=0.9999(n=7)，表明阿魏酸進樣量在0.118～1.422 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 精密吸取同一濃度的對照品溶液(118.5 μg·mL－1)重復進樣5 次，各10μL，測得峰面積RSD為0.98，表明精密度良好。

2.5 重復性試驗 精密量取同一批號供試品(批號:20140814)6份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件各進樣10μL進行測定，結果樣品中阿魏酸含量平均值為0.065mg·g－1，RSD為1.56%，表明本法重現性良好。

2.6 穩定性試驗 取同一批號供試品(批號:20140814)，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別在 0、2、4、8、12、16、32、48 h 進樣 10μL 進行測定，記錄峰面積，結果RSD為1.24%，顯示供試品溶液在48 h內穩定。

2.7 回收率試驗 取已經測定阿魏酸含量的山術運腸丸(批號:20140814)細粉6份，每份約0.5 g，精密稱定，用少量70%甲醇溶解，再分別加入對照品溶液0.5mL，按“2.2.2”項下方法制備溶液進行回收率試驗，經計算得到加樣回收率為98.46%，RSD為1.21%，結果見表1。

表1 回收率試驗結果表

2.8 樣品測定 取3批樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，依上述色譜條件進行測定，記錄峰面積，計算樣品中阿魏酸的含量，結果見表2。

表2 3批樣品含量測定結果表(n=5)

3 討論

3.1 山術運腸丸的作用特點是通過調理與大腸轉化功能有關的臟腑功能，促進大腸轉化功能的恢復，使大便正常。方中當歸發揮養血活血、潤腸通便的功效，阿魏酸是當歸的有效成分之一，具有多種生物活性［2］，《中國藥典》2010 年版(一部)對當歸中的主要有效成分阿魏酸規定了含量測定方法［3］，3批樣品中的當歸產地不同，測定阿魏酸的含量有差異，選用阿魏酸作為山術運腸丸質控指標是適宜和必要的。

3.2 中藥中阿魏酸的提取方式有不同的方法［4～7］，本試驗采用超聲處理提取，再用乙酸乙酯萃取，大大降低了雜質的量，減少了對其進行含量測定時的干擾。試驗表明，超聲提取效率優于加熱回流提取，超聲處理30min提取完全，超聲時間不宜過長，因為阿魏酸不穩定，長時間超聲處理容易造成分解。

3.3 根據文獻報道，阿魏酸對光不穩定［8］，因此對照品溶液及供試品溶液的制備應避光操作及保存，樣品前處理時應該連續操作，盡量在短時間內完成。

［1］山東省食品藥品監督管理局.山東省醫療機構制劑規范(第一冊)［S］.濟南:山東科學技術出版社，2012:31.

［2］梁娜，孫少平，羅躍娥，等.阿魏酸的研究進展［J］.黑龍江中醫藥，2009，38(3):87 －88.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:124.

［4］余健，江玉英，張弦.HPLC測定當歸注射液中阿魏酸的含量［J］.安徽中醫學院學報，1999，18(5):67 －68.

［5］顧民，張亮，張正行.HPLC測定逍遙散及當歸中阿魏酸的含量［J］.中成藥，2000，22(5):342 －344.

［6］周寒.HPLC法測定當歸調經顆粒中阿魏酸的含量［J］.中醫藥導報，2010，16(1):70 －71.

［7］竇金鳳.HPLC法同時測定宮炎康膠囊中阿魏酸的含量［J］.藥學研究，2014，33(4):206 －207.

［8］陳芳，王剛，葉立紅，等.HPLC法測定玫瑰乳膏中阿魏酸的含量［J］.中國藥師，2010，13(1):87 －88.