HPLC法同時測定柴銀口服液中5種成分的含量

朱日然

(山東中醫藥大學附屬醫院，山東 濟南 250011)

柴銀口服液由北柴胡、金銀花、黃芩、葛根、荊芥、青蒿、連翹、桔梗、苦杏仁、薄荷、魚腥草等11味藥組成，具有清熱解毒，利咽止咳的功效，主要用于上呼吸道感染外感風熱證，是風熱感冒常用藥品之一。本文建立了采用高效液相色譜(HPLC)法同時測定柴銀口服液中綠原酸、苦杏仁苷、葛根素、黃芩苷、連翹苷5種有效成分的含量，控制制劑質量及工藝的穩定性［1～4］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀;Mettler Toledo MS電子天平;Zorbaxsb－C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm);Millipore超純水儀。

1.2 試藥 綠原酸(批號:110753－200413)，苦杏仁苷(批號:110820－200403)，葛根素(批號:110752－200511)，黃芩苷 (批號:110715－200514)，連翹苷(批號:110821－200508)均來源于中國食品藥品檢定研究院;甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。柴銀口服液(市售，批號:00512127、10103011、11063018)。

1.3 溶液的制備

1.3.1 標準溶液的制備 分別精密稱取綠原酸、苦杏仁苷、葛根素、黃芩苷、連翹苷對照品，加甲醇制成每1mL 分別含 0.388、0.736、0.210、0.424、0.868mg的混合溶液，作為對照品溶液。

1.3.2 供試品溶液的制備 精密量取樣品溶液10mL，置50mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

1.3.3 陰性對照溶液的制備 分別按處方比例稱取金銀花、苦杏仁、葛根、黃芩、連翹，按工藝方法制備陰性樣品，按“1.3.2”項下方法制備陰性對照溶液。

2 方法與結果［5～7］

2.1 色譜條件 Zorbaxsb－C18色譜柱 (4.6mm×250mm，5μm);流動相 A為乙腈，流動相 B為0.1%磷酸溶液，流動相梯度洗脫程序見表1;流速:1mL·min－1;檢測波長:210 nm;柱溫:35℃;進樣量 10μL。

表1 梯度洗脫條件

2.2 專屬性考察 在“2.1”項下色譜條件，取對照品、樣品及陰性樣品適量進行檢測，樣品與對照品色譜圖相同保留時間處有色譜峰，而陰性樣品無相應峰，說明陰性無干擾，結果見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.3 線性關系考察 分別精密吸取上述對照品溶液 1、5、10、15、20、25μL，注入高效液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行測定，以各對照品進樣量(μg)為X軸，峰面積值為Y軸計算回歸方程、相關系數和線性范圍，結果見表2。

表2 線性范圍及相關系數

2.4 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μL，按上述色譜條件連續進樣6次，記錄各色譜圖的峰面積，結果綠原酸、苦杏仁苷、葛根素、黃芩苷、連翹苷峰面積 RSD(n=6)分別為 1.31%、1.51%、1.73%、0.72%、1.16%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0、4、8、12、16、24 h 按“2.1”項下色譜條件進行測定，以峰面積計算綠原酸、苦杏仁苷、葛根素、黃芩苷、連翹苷RSD(n=6)分別為0.46%、0.51%、1.17%、0.41%、1.61%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.6 重復性試驗 取批號為10103011的樣品，按“1.3.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件測定，進行6次平行試驗，結果綠原酸、苦杏仁苷、葛根素、黃芩苷、連翹苷的平均含量分別為0.150、0.233、0.2532、1.858、0.0772mg·mL－1，RSD(n=6)分別為 1.72%、0.89%、0.83%、1.34%、1.22%，表明該方法重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗 取已測定的樣品 (批號:10103011)6份，每份2.5mL，分別置50mL容量瓶中，每份精密加入混合對照品溶液1mL，按“1.3.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率，結果平均回收率分別為綠原酸96.80%(RSD=0.29%)、苦杏仁苷103.50%(RSD=1.29%)、葛根素 103.60%(RSD=1.12%)、黃芩苷 102.90%(RSD=0.88%)、連翹苷 100.90%(RSD=0.90%)，表明該方法加樣回收率良好。

2.8 樣品測定 取3批樣品，每批2份，按“1.3.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，結果見表3。

3 討論

3.1 流動相的選擇 分別對乙腈－水、乙腈－0.5%冰醋酸溶液、乙腈－0.1%磷酸溶液進行考察，發現乙腈－0.1%磷酸溶液的洗脫體系能夠對5種有效成分呈現出良好的分離度，在測定波長處無干擾［8～11］。

表3 樣品測定結果

3.2 波長選擇 取上述5種對照品溶液，在200～400 nm范圍內進行掃描，結果綠原酸在218 nm波長處有最大吸收，苦杏仁苷在207 nm波長處有最大吸收，葛根素在250 nm波長處有最大吸收，黃芩苷在214 nm波長處有最大吸收，連翹苷在229 nm波長處有最大吸收，結果顯示綠原酸、苦杏仁苷、葛根素、黃芩苷、連翹苷等5個成分在210 nm波長處均有較好的紫外吸收，故本試驗選擇此波長進行測定。

3.3 對柴銀口服液的質量考察，一般均為單味藥材質量考察，本研究建立的HPLC方法同時測定金銀花、苦杏仁、葛根、黃芩、連翹等5味藥材的有效成分，樣品處理簡單，方法準確、可行，能有效對該制劑質量進行控制［12～15］。

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