新疆哈薩克族原發(fā)性高血壓與STK39基因多態(tài)性的相關(guān)性

摘要：目的 研究新疆哈薩克族人群STK39基因rs3754777多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系。方法 通過流行病學(xué)調(diào)查獲得新疆哈薩克族原發(fā)性高血壓患者300例（高血壓組），健康對照組300例，采用TaqMan探針法分析STK39基因rs3754777多態(tài)性的基因型。結(jié)果 高血壓組與對照組STK39基因rs3754777G/A多態(tài)性差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 STK39基因rs3754777G/A多態(tài)性與新疆哈薩克族原發(fā)性高血壓無相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：高血壓；原發(fā)性；STK39；基因多態(tài)性

原發(fā)性高血壓（Essential hypertension）不僅是中風(fēng)，心肌梗死的主要危險因素，而且也能引起心力衰竭，終末期腎功能損害等疾病[1]。高血壓病患者占全球成人人口的25%～ 30%[2]，有許多危險因素，如年齡、性別、種族、肥胖、糖尿病、生活方式、遺傳等[3-4]。在這些因素中，遺傳因素，估計在30%～50%的總?cè)丝谥杏绊懷獕鹤兓痆5]。最近，一個新的高血壓易感基因-STK39（serine threonine kinase 39，絲氨酸蘇氨酸激酶39），由一個全基因組關(guān)聯(lián)研究在阿米什人口中確定[6]。在我國陳麗艷等人也報道了STK39與東北地區(qū)漢族人群高血壓的發(fā)生存在相關(guān)性。而新疆地區(qū)哈薩克族是高血壓高發(fā)的人群，且已經(jīng)證實很多遺傳基因與其發(fā)生有關(guān)，但STK39是否與新疆哈薩克族人群高血壓的發(fā)生有相關(guān)性還未見報道，考慮到遺傳因素的種族異質(zhì)性，本研究旨在探討STK39基因多態(tài)性與新疆哈薩克族高血壓的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2012年1月～2013年10月來自新疆北疆地區(qū)瑪納斯縣清水河鄉(xiāng)和旱卡子鄉(xiāng)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查的哈薩克族原發(fā)性高血壓患者300例（高血壓組），及正常者300例（對照組）。兩組年齡、性別、BMI、是否患腦卒中、糖尿病、空腹血糖以及是否吸煙等差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，具備可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥20歲，至少3代為當(dāng)?shù)鼐幼〉墓寰用?，符?005年高血壓防治指南診斷標(biāo)準(zhǔn)，3次坐位標(biāo)準(zhǔn)舒張壓≥90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（或）收縮壓≥140 mmHg；流行病學(xué)調(diào)查前2 w內(nèi)未服用任何降壓藥物。經(jīng)詢問病史、系統(tǒng)體檢及相關(guān)實驗室檢查，除外繼發(fā)性高血壓（如原發(fā)性醛固酮增多癥，嗜鉻細(xì)胞瘤，腎血管性高血壓和庫興綜合征）、嚴(yán)重肝腎功能損害、充血性心力衰竭、妊娠及哺乳期及長期服用避孕藥者。

1.2方法

1.2.1一般資料 收集所有被研究者均征得知情同意，并告知研究詳情，簽署知情同意書。由經(jīng)統(tǒng)一培訓(xùn)的調(diào)查員，通過問卷調(diào)查的方式收集資料并填寫有關(guān)項目：哈族人口學(xué)基本資料和吸煙、飲酒、既往患病史及家族史等。

1.2.2血壓測量 血壓測量要求：①采用校正的水銀柱式血壓計（刻度以2 mmHg為單位）；②上午10∶00～12∶00點(diǎn)測定；③測血壓前30 min內(nèi)禁止吸煙和飲咖啡，避免勞累、緊張和興奮，靜坐5 min，裸露右側(cè)上臂，朧動脈置于和心臟同一水平線位置；④每次重復(fù)測量3次，測量相隔5 min/次，取3次測量的平均值；⑤由專人使用相同血壓計測量。

1.2.3基因分型 ①基因組DNA提?。焊鶕?jù)基因組提取試劑盒（日本FUJ IFILM公司）說明，提取所有樣本的外周血基因組DNA，經(jīng)DNA/RNA定量儀測定后，將其稀釋至10 ng/pl，-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩＂诨驒z測方法：引物設(shè)計見表1。③PCR擴(kuò)增及基因型鑒定：rs3754777基因位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增體系：總的反應(yīng)體積5 μl，包括1XUniversal Mastermix <（ABI），終濃度0.1 μM，終濃度為1.25 ng/μl的基因組DNA PCR擴(kuò)增條件：50℃、2 min、96℃預(yù)變性3 min，然后95℃、30 s、72℃，5 min進(jìn)行50個循環(huán)。應(yīng)用ABI7900HT熱循環(huán)儀進(jìn)行擴(kuò)增。采用自動序列檢測系統(tǒng)2.1軟件對基因型進(jìn)行分辨（95%可信區(qū)問）。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件，計量資料以（x±s）、表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗；組間基因型及等位基因頻率比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗 高血壓組與對照組rs3754777A/G等位基因和基因型頻率分布均符合Hardy-weinberg檢驗，說明本研究人群對rs3754777A/G位點(diǎn)具有較好的群體代表性。

2.2等位基因和基因型頻率分布 STK39基因rs3754777 A/G基因型頻率及等位基因頻率見表2，兩組差異并無統(tǒng)計學(xué)意義。

3討論

STK39基因含有18 個外顯子，在染色體2q 24.3上跨越約300 kb的長度。被全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）通過的與血壓相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（SNPs）位于內(nèi)含子1-8，經(jīng)測序鑒定沒有編碼或剪接變異體[6]。Wang和他的同事用熒光素酶報告結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)染實驗表明，該基因的1 個SNP 位點(diǎn)（rs35929607），該SNP 位點(diǎn)位于第2內(nèi)含子的一個保守區(qū)域，在體外表達(dá)能夠改變標(biāo)記者的結(jié)構(gòu)。這個SNP 位點(diǎn)被GWAS確定為單核苷酸多態(tài)性的連鎖不平衡，為所觀察到的關(guān)聯(lián)提出了可能的作用機(jī)制。

早在2009 年發(fā)表的高血壓的全基因組關(guān)聯(lián)研究的第一個積極的結(jié)果，是鑒定一個可能的高血壓易感基因STK39[6]。在542人參加的阿米什家庭糖尿病隊列研究中發(fā)現(xiàn)，幾個絲氨酸/蘇氨酸激酶基因多態(tài)性與收縮壓（SBP） 和舒張壓（DBP）有關(guān)。該關(guān)聯(lián)在1個阿米什和4個非阿米什白人樣本中得到復(fù)制，在包括所有研究（n=7125） 的一項薈萃分析，達(dá)到暗示性的顯著水平（P<10-6）。有趣的是，在阿米什人口中，兩個主要的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（SNP）（rs6749447和rs3754777） 和位于第二個內(nèi)含子的保守區(qū)域的一個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（SNP）（rs35929607）幾乎完全連鎖不平衡。后者被認(rèn)為是有功能的，其小G 的等位基因與體外增強(qiáng)基因轉(zhuǎn)錄有關(guān)[6]。

盡管以上的發(fā)現(xiàn)令人興奮，但進(jìn)一步的研究并沒有確定STK39 在血壓的遺傳測定中有明確的意義。在非裔美國人中最近完成的一項全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)，STK39 的幾個的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（SNPs）與收縮壓和舒張壓相關(guān)，盡管沒有達(dá)到全基因組水平的顯著 性[7]。但是到目前為止，累計超過60000人的兩個最大的高血壓全基因組關(guān)聯(lián)研究卻沒有這樣的相關(guān)報道[8-9]。此外，Ho等人企圖在婦女健康研究的一個子集中復(fù)制[10]，不幸的是，STK39 軌跡不包括在詳細(xì)分析，因為它沒有滿足預(yù)先設(shè)定的GWAS 復(fù)制標(biāo)準(zhǔn)。最后，Cunnington 等在1372 英國白人家庭成員的隊列研究中發(fā)現(xiàn)，無論是靜態(tài)血壓還是動態(tài)血壓都與位于STK39 內(nèi)的三個單核苷酸多態(tài)性之間沒有關(guān)聯(lián)，其中包括認(rèn)為具有功能的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs35929607[11]。Julio等人的研究亦證實STK39 變種和BP 之間可能沒有明顯的臨床相關(guān)聯(lián)系。

我國新疆哈薩克族人口相對較多，極少與外界通婚，從地理位置及血緣上為相對隔離人群，有較大遺傳同源性，影響血壓的環(huán)境因素（如生存環(huán)境、飲食習(xí)慣、生活方式及精神壓力等）比較一致，是良好的遺傳模式人群。本研究發(fā)現(xiàn)，STK39基因rs3754777 G/A多態(tài)性與維吾爾族原發(fā)性高血壓無相關(guān)性，rs3754777多態(tài)位點(diǎn)A等位基因的頻率在高血壓組（25.4）與對照組（27.8）問差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示A等位基因不是哈薩克族原發(fā)性高血壓的保護(hù)因子，也不是危險因素。出現(xiàn)這種情況的原因可能是，STK39基因位點(diǎn)存在尚未發(fā)現(xiàn)的功能性SNP，而在不同種族中這些功能性SNP對STK39活性的影響不同，對心血管系統(tǒng)的影響亦不同；另外，原發(fā)性高血壓受遺傳、環(huán)境等多因素相互影響，由于基因與環(huán)境、基因與基因之問的相互作用，可能使基因表達(dá)出現(xiàn)遺傳變異，最終對疾病表型的影響較為復(fù)雜。在過去幾十年，為確定與血壓性狀或高血壓相關(guān)的基因和染色體位點(diǎn)，已作出很大努力。通過候選基因法和全基因組關(guān)聯(lián)研究家庭和零星的個人，幾十個易感基因和位點(diǎn)被確認(rèn)[7-8，11-12]。不幸的是，在一個人口中發(fā)現(xiàn)的基因位點(diǎn)，通常不能很好地在其他人群中復(fù)制[13-14]。這種不一致可能是由于高血壓病因的異質(zhì)性，或者是由于人口分層造成的遺傳關(guān)聯(lián)研究的混雜[15]。因此，STK39 基因多態(tài)性與血壓之間的關(guān)系還有待于在多個人群中進(jìn)一步研究。

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編輯/張燕