復方巖杖膠囊藥理作用的探討

摘要：目的 研究中藥制劑復方巖杖膠囊的作用機制。方法 建立Sl80荷瘤小鼠模型，以環磷酰胺（CTX）作陽性對照，觀察復方巖杖膠囊對荷瘤小鼠的外周血白細胞變化、抑瘤率、脾臟及胸腺指數的變化。結果 復方巖杖膠囊對S180荷瘤小鼠經CTX化療所致血液中白細胞降低有拮抗作用（P<0.05），對小鼠肉瘤S180無直接抑制作用，對化療所引起脾臟及胸腺指數下降未見明顯的改善作用。結論 復方巖杖膠囊能提高外周血白細胞數量，減輕腫瘤化療引起的骨髓抑制作用。

關鍵詞：復方巖杖膠囊；環磷酰胺；白細胞

巖黃連（Corydalis saxicola Bunting）是罌粟科紫堇屬植物，主要分布在我國西南部山區，具有抗腫瘤、增強免疫力、抗肝炎等作用[1-2]?；⒄龋≒olygonum cuspidatum Sieh. et Zucc.）為蓼科蓼屬多年生草本植物，也具有抗腫瘤、提高免疫力等作用[3-4]。廣西民間以兩藥材為主藥的驗方，用于肝炎、肝癌的治療，有一定功效。因驗方湯劑極苦，制成復方巖杖膠囊制劑，以達到矯味目的；為了解其抗腫瘤效果及作用機制，進行本文研究，報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實驗動物和瘤株 SPF級雄性昆明小鼠（KM小鼠），體重18～22 g，廣西醫科大學實驗動物中心提供，合格證：SCXK桂2009-0002。S180小鼠腹水瘤細胞，中國科學院上海細胞庫提供。

1.1.2藥品與試劑 復方巖杖膠囊浸膏，課題組自制。注射用環磷酰胺（批號：04131201，山西普德藥業股份有限公司）；注射用生理鹽水（批號：C114040703，四川科倫藥業股份有限公司）；RPMI-1640培養基（批號：Q/SYSME001，北京賽默飛世爾生化制品有限公司）；胎牛血清（批號：120105，上海依科賽生物制品有限公司）；血細胞分析儀配套試劑（批號：63140115A01，桂林優利特醫療電子有限公司）。

1.1.3主要儀器 URIT-3010型全自動血細胞分析儀（桂林優利特醫療電子有限公司）；CKX31SF型倒置式生物顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；AL204型電子分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；HF240型CO2培養箱（香港Heal Force公司）。

1.2方法

1.2.1藥液配制 取注射用環磷酰胺0.2 g，加入注射用生理鹽水振蕩溶解，取適量稀釋成終濃度為1.2 mg/ml溶液，現用現配。

復方巖杖膠囊混懸液：稱取復方巖杖膠囊內容物（干浸膏）3份，分別置于3個研缽內，加入少量雙蒸水研磨至細糊狀，吸管吸取移至帶刻度的3支離心管內，加入雙蒸水至刻度，混勻，制得高、中、低3個濃度樣品溶液，分別是0.2，0.1，0.05 g/ml。每次使用時搖勻便可給小鼠灌胃，現用現配。

1.2.2動物造模 接種S180小鼠腹水瘤細胞在體外培養2～3代，將該瘤細胞液離心，棄上清液，加入適量生理鹽水，調整細胞濃度至1×107個/ml，取0.5 ml細胞懸液注射于小鼠腹腔內，6～7 d可形成乳白色腹水。

實體瘤模型建立：昆明小鼠腹腔接種S180小鼠腹水瘤細胞6 d后，頸椎脫臼處死；75%酒精消毒小鼠腹部皮膚，從已消毒部位剪開腹部；一次性無菌吸管吸取小鼠腹腔內乳白色腹水，置無菌的刻度離心管內，按腹水和生理鹽水體積為1∶4加入生理鹽水，用吸管反復輕柔吹打、混勻；取樣計算細胞數，再稀釋細胞濃度至3×107個/ml（吸取后的過程在冰盒上操作）。皮下接種前均輕輕搖勻，保證每只小鼠接種瘤細胞數基本一致。取腹水、稀釋與皮下接種過程均嚴格遵循無菌操作原則，時間控制在1 h內[5]。

1.2.3動物分組與給藥 昆明小鼠隨機分為7組，每組12只；稱重并記錄后，除空白組外，每只小鼠右側腋窩皮下接種瘤細胞混懸液0.2 ml；接種24 h后，定時給藥，連續10 d。即：①空白組；②模型組；③CTX組：30 mg/kg；④單純復方巖杖膠囊組（樣品組）：3 g/kg；⑤CTX加復方巖杖膠囊低劑量組（CTX+低樣組）：30 mg/kg +1.5 g/kg；⑥CTX加復方巖杖膠囊中劑量組（CTX+中樣組）：30 mg/kg+3 g/kg；⑦CTX加復方巖杖膠囊高劑量組（CTX+高樣組）：30 mg/kg+6 g/kg。環磷酰胺給藥方式為腹腔注射，每只小鼠給藥容積和用藥量分別為：0.6 ml/20 g和30 mg/kg，1次/2 d。復方巖杖膠囊的給藥方式為灌胃，每只小鼠給藥容積為：0.6 ml/20 g，高、中、低3個劑量組中小鼠用藥量分別為6 g/kg、3 g/kg、1.5 g/kg，1次/d?？瞻捉M和模型組給予等容積蒸餾水。

1.2.4檢測指標 ①每天稱每組小鼠進食食物質量；②停藥次日稱重并摘除眼球取血，檢測白細胞數量；③解剖剝離瘤塊，稱瘤質量，按下面公式計算抑瘤率：腫瘤抑制率（%）=（模型組平均瘤重？實驗組平均瘤重）/模型組平均瘤重×100%；④取胸腺、脾臟，稱質量，按下面公式計算脾臟指數、胸腺指數：脾臟指數=小鼠脾臟重量（mg）/小鼠體重（g）；胸腺指數=小鼠胸腺重量（mg）/小鼠體重（g）。

1.3統計學處理 實驗結果以（x±s）表示，采用單因素方差分析法。所有實驗數據采用SPSS 16.0軟件進行統計學處理，以P<0.05為差異具有統計學意義。

2結果

2.1復方巖杖膠囊對S180荷瘤小鼠CTX使用后免疫指標的影響 CTX組的Sl80荷瘤小鼠在使用CTX后，其白細胞數量、脾臟指數和胸腺指數明顯下降，與模型組相比，有顯著性差異（P<0.05，P<0.01）；樣品組小鼠的白細胞數量比模型組高，有顯著性差異（P<0.05）；CTX+低組的白細胞數量比單用CTX數量有顯著升高（P<0.05）；單用CTX與CTX加復方巖杖膠囊各組比較，脾臟及胸腺指數未見顯著性差異，見表1。

2.2復方巖杖膠囊對Sl80荷瘤小鼠CTX使用后瘤重的影響 樣品組的抑瘤率15.8%；與模型組相比，其余各組均能顯著降低瘤重（P<0.01）。此結果表明，本品在小鼠體內未顯示抑制腫瘤生長的作用，見表2。

3討論

巖黃連是民間習用藥材，廣西中藥材標準已有收錄，主要用于肝癌、肝炎治療[7]。早期研究報告，巖黃連總生物堿對小鼠肉瘤Sl80、艾氏腹水癌及肝癌腹水癌、大鼠肉瘤256均有一定的抑制作用，其中對小鼠肉瘤細胞Sl80的作用最為敏感，對瘤細胞呼吸亦有一定的抑制作用[1-8]。巖黃連總生物堿可顯著提高小鼠細胞的溶血空斑值、能增強小鼠的遲發型超敏反應、能在體外增強同種異型小鼠脾細胞的混合培養反應和增強有絲分裂原刺激脾細胞的增殖反應，另外巖黃連總生物堿能增強T細胞產生IL-2和IFN-y的水平[9]。另有報告，巖黃連總堿對Tca8113細胞增殖具有明顯抑制作用[10]。因此可推測，巖黃連抗肝炎可能與其巖黃連總堿的免疫調節有關，也是對腫瘤有治療作用的基礎。

虎杖是常用中藥材，其主要有效成分有白藜蘆醇和大黃素，兩者均有一定的抗腫瘤和護肝作用。白藜蘆醇對小鼠肝癌、胃癌細胞株的生長具有明顯的抑制作用[4，11-12]；大黃素對小鼠肉瘤S180、小鼠肝瘤、小鼠乳腺癌 、小鼠艾氏腹水癌、小鼠淋巴肉瘤、小鼠黑色素瘤及大白鼠瓦克癌等七個瘤株的治抑制率都在30%以上[3]?；⒄葷饪s片能夠抑制環磷酰胺導致的小鼠白細胞降低，對小鼠實驗性肝損傷有一定的保護作用[13-14]。

在本文中，以巖黃連、虎杖為主藥的復方巖杖膠囊，對S180荷瘤小鼠經CTX化療后血中白細胞降低具有拮抗作用；對S180荷瘤小鼠的抑瘤率只有15.8%；對化療所引起脾臟指數及胸腺指數下降未見明顯的改善作用。亦即兩種主藥各自均有抗腫瘤、提高免疫作用，民間驗方有效，但本文觀察到復方巖杖膠囊只有部分作用。原因可能是制劑中主藥有效成分含量偏少、動物腫瘤模型選擇不合適和觀察指標不全等。為明確復方巖杖膠囊是否具有臨床使用價值，以及作用機制，還需更進一步研究。

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編輯/張燕