腦脈利顆粒中鹽酸水蘇堿的含量測定

摘要：目的 建立測定腦脈利顆粒中鹽酸水蘇堿的含量方法。方法 采用薄層掃描法測定鹽酸水蘇堿的含量，波長：λs=508 nm，λR=670 nm。結(jié)果 鹽酸水蘇堿在點樣量10.18～40.72 μg濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9962。平均回收率為97.9%，RSD=3.1%。結(jié)論 本法操作簡便、靈敏度高、專屬性好，可作為該制劑質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：鹽酸水蘇堿；薄層掃描

1儀器與試劑

1.1儀器CAMAG TLC SCANNER3 （瑞士 CAMAG 公司）； XS105DU 電子天平；硅膠 G板（青島海洋化工），定量點樣毛細(xì)管（瑞士 CAMAG 公司）

1.2試劑 甲醇（色譜純）、鹽酸、乙醇（分析純），732 型氫型陽離子交換樹脂（天津光復(fù)精細(xì)化工），鹽酸水蘇堿對照品（批號110712-201111）中國食品藥品檢定研究院

2方法學(xué)驗證

2.1線性及范圍 試驗方法：取鹽酸水蘇堿對照品，加鹽酸-乙醇（1∶99）混合溶液制成每1 ml含5.09 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取對照品溶液2 μl、3 μl、4 μl、6 μl、8 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-鹽酸-醋酸乙酯（8∶3∶1）為展開劑，展開后晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，冷風(fēng)吹干，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B薄層色譜法）進(jìn)行掃描，波長：λs=508nm，λR=670 nm，測量供試品與對照品吸收度積分值，計算，即得。以峰面積為縱坐標(biāo)，鹽酸水蘇堿的濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，得方程y=351.47x+8632.5，r=0.9962，表明鹽酸水蘇堿在點樣量10.18～40.72 μg范圍呈線性關(guān)系。

2.2檢測線與定量限 取濃度為5 mg/ml的鹽酸水蘇堿對照品溶液，分別吸取對照品溶液1 μl、2 μl、3 μl、4 μl、5 μl、6 μl、8 μl、10 μl，分別點于同硅膠G薄層板上，按2.1項下試驗方法點樣掃描，分別按10∶1和3∶1的信噪比計算定量限和檢測限。定量限與檢測限分別為1.96 μg/（4 μl）和0.98 μg/（2 μl）。

2.3精密度試驗 吸取對照品溶液4 μl、同一斑點連續(xù)掃描8次，測定吸收度積分值。RSD=0.05%，表明此法精密度良好。

2.4穩(wěn)定性試驗 吸取對照品溶液3 μl，點于同一硅膠G板，顯色后，樣品分別于0、10、20、30、45、60 min掃描1次測定樣品，計算吸收度積分值RSD=0.21%，表明顯色后60 min內(nèi)掃描穩(wěn)定性良好。

2.5重復(fù)性試驗 取樣品配置6份供試液，按含量測定法進(jìn)行測定，RSD=4.44%，表明此法重復(fù)性較好。

2.6回收率試驗 采用加樣回收法，精密稱取6份已知含量的腦脈利顆粒約2 g，分別精密加入鹽酸水蘇堿對照品約3mg，照含量測定方法測定操作，顯色后進(jìn)行掃描測定，見表1。

2.7耐用性

2.7.1不同溫濕度 取重復(fù)性檢測中的2份供試液， 按含量測定法點于3塊硅膠G薄層板上， 分別于15℃、RH30%；20℃、RH45%；25℃、RH60%三個不同溫濕度環(huán)境下展開，顯色，掃描，測定吸收度積分值。分別計算樣品含量后，計算含量RSD=0.48%。

2.7.2 不同廠家的薄層板 取重復(fù)性檢測中的2份供試液，按含量測定法點于3塊不同廠家生產(chǎn)的硅膠G薄層板上，展開，顯色，掃描，測定吸收度積分值。分別計算樣品含量后，含量RSD=0.52%。

2.8 樣品測定 取本品約 4.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入1 mol/L 的鹽酸溶液40 ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率33 KHz）30 min，取出，放冷，稱定重量，用1 mol/L 的鹽酸溶液補足減少的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液 20 ml，置已處理好的 732 型氫型陽離子交換樹脂柱（內(nèi)徑約0.9 cm，柱高18 cm）上，收集流出液，重新通過樹脂柱，如上再重復(fù)二次，加 200 ml分次洗滌至中性，棄去水洗液，再用濃氨試液-甲醇（20∶80）混合液 100 ml分次洗脫，收集洗脫液蒸發(fā)皿中蒸干，取蒸干后殘渣加鹽酸-乙醇（1∶99）混合溶液使溶解，定量轉(zhuǎn)移至 2 ml量瓶稀釋至刻度，混合均勻，作為供試品。另取鹽酸水蘇堿對照品，加鹽酸-乙醇（1∶99）混合溶液制成5 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液10 μl，對照品溶液 3 μl與 6 μl，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-鹽酸-醋酸乙酯（8∶3∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，冷風(fēng)吹干，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，波長：λs=508 nm，λR=670 nm，測量供試品和對照品的吸收度積分值，計算即得，見表2。

3討論

3.1生物堿為益母草的主要有效成分，其中以水蘇堿及益母草堿含量最高。由于原生藥的來源、產(chǎn)地、采收、貯存以及生產(chǎn)工藝等因素導(dǎo)致生物堿含量差異較大，有必要對含益母草制劑的生物堿含量進(jìn)行控制。

3.2鹽酸水蘇堿的含量測定常采用HPLC法、雷氏銨鹽剩余比色法、HPLC-ELSD法、薄層掃描法等。采用薄層掃描法測定制劑中鹽酸水蘇堿的含量，靈敏度高，專屬性較強，重現(xiàn)性好，能較好的控制該制劑的質(zhì)量。

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