Caspase—3 在大鼠心肌缺血后12h的表達

摘要：目的 探討Caspase-3 在大鼠心肌缺血后12h的表達，以探討其在急性心血管病方面的診斷意義。方法 采用結扎冠脈左前降支的方法復制大鼠心肌缺血模型，觀察心肌梗死情況，檢測Caspase-3 的表達。結果 大鼠心肌缺血后12h出現梗死灶，Caspase-3 明顯表達。結論 Ccaspase-3 與大鼠心肌缺血情況密切相關，早期檢測可以為心肌缺血早期病情變化提供有用的信息。

關鍵詞：Caspase-3 ；心肌缺血；早期檢測

心肌梗死病情進展迅速，能否及早準確判定疾病發展趨勢， 對能否及時有效的治療至關重要。近年來的研究表明，其中主要的發病機制之一是細胞凋亡[1]。細胞凋亡是由基因控制的細胞主動死亡過程，Caspase-3作為細胞凋亡的指標在其心肌缺血細胞凋亡過程起重要作用。為了探討Caspase-3早期檢測是否可以為心肌缺血早期病情變化提供有用的信息，我們觀察了大鼠心肌缺血2h后再灌注12h的Caspase-3表達情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇成年健康雄性SD大鼠45只，體重250～280 g。由上海市西普爾-必凱實驗動物中心有限公司提供，許可證號：SCXK（滬）2008-0016。從45只大鼠中隨機選出30只分為正常組、假手術組、模型組三組，每組各10只。

1.2 主要試劑 氯化2，3，5-三苯四氮唑（TTC）（2，3，5一Triphenyltetrazolium Chloride，TTC），美國Sigma公司，用雙蒸水配成2%濃度；水合氯醛，北京鼎國生物公司產品，用雙蒸水配成10%濃度。

1.3 方法 血清hS-CRP，Caspase-3 采用化學發光免疫法，心肌缺血12h后腹主動脈取血檢測。

1.4 動物模型制作 模型組用10%的水合氯醛（360mg/kg）腹腔注射麻醉后，采用李儀奎方法，左胸常規消毒后，于左第3～4 肋間開胸，剪開心包膜，擠出心臟，在左心耳和肺動脈圓錐之間距左冠狀動脈根部2～3mm處，用6-0手術線結扎冠脈左前降支（假手術組僅穿線不結扎），迅速將心臟送回胸腔，閉胸，以結扎部位以下心肌變白，搏動減弱作為造模成功標志。死亡及不符合標準的動物剔除并隨機補充，保證每組10只成功模型。

1.5 TTC標本取材及染色 正常組、假手術組和模型組三組大鼠在術后12h用10%水合氯醛（360mg/kg）腹腔麻醉，腹主動脈取血后取材，剖取心臟，用冰生理鹽水洗凈殘血，濾紙吸干，稱重，去除心房及脂肪組織，將左心室橫切成1～2mm厚的薄片，置于2% TTC溶液，37℃避光孵育30min。梗死區為白色，正常心臟組織被染成玫瑰紅色。至梗死區界限清晰時取出，分離心肌梗死區，用濾紙吸干，稱質量，計算心肌梗死率。心肌梗死率=心肌梗死區質量（g）/全心質量（g）×100%.

1.6 統計學處理 所獲數據均為正態分布，采用x±s表示，SPSS18.0 統計軟件進行單因素方差分析和t 檢驗。

2 結果

3 討論

Caspase 家族是細胞凋亡過程中重要的蛋白酶；Caspase-3 是半胱天冬酶家族成員之一，參加細胞凋亡信號，它是各種細胞凋亡蛋白酶級聯反應的必經之路，是凋亡的關鍵酶和執行者，故又稱之為\"死亡蛋白\"[2]；在各種程序啟動的凋亡程序中起最后樞紐的作用，促使細胞凋亡。有學者認為，Caspase-3 是心肌缺血預后的一個較有價值的指標， 可以獨立預測心肌梗死的死亡率及其心腦血管病變的發生率[3]。

本實驗顯示模型組較正常對照組和假手術組比較有統計學意義（P<0.05）。提示心肌梗死存在炎性反應，導致血清Caspase-3水平升高。作為較可靠和靈敏的急性時相反應指標，血清Caspase-3水平與心血管病密切相關。

綜上所述， 心肌梗死的恢復轉歸同治療時機密切相關，及時了解心肌梗死發病趨勢，早期診斷采取有效治療是心肌梗死病情控制的前提，血清Caspase-3水平將對缺血性梗死的診治更有指導意義。心肌缺血大鼠測定血清Caspase-3濃度的意義在于為評價心血管病病情的早期診斷提供有意義的參考指標，為臨床研究提供實驗依據。

參考文獻：

[1] Abas F，Alkan T，Goren B，et al.Neuroprotective effects of postconditioning on lipid peroxidation and apoptosis after focal cerebral ischemia/reperfusion injury in rats[J].Turk Neurosrg，2010，20（ 1） ： 1-8.

[2] Broughton BR，Reutens DC，Sobey CG.Apoptotic mechanisms after cerebral ischemia[J].Stroke，2009，40（5）：331-339.

[3] TORZEWSKI J，TORZEWSKI M，BOWYER DE，et a1.C-reactive protein requently colocatizes with the terminal complement complex in the intima of early atherosclerotic lesions of human coronary arteries[J].Arterioscler Thromb Vase Biol，1998，18：1389-1392.

編輯/成森