HPLC法測定羅氟司特原料藥的含量

【摘 要】歐盟已2010年7月批準Nycomed公司羅氟司特（roflumilast，Daxas）上市，用于慢性阻塞性肺疾?。–OPD）的治療。本實驗建立反相高效液相色譜法測定羅氟司特原料藥中羅氟司特的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸銨溶液（pH3.5）（25∶45∶35），檢測波長為250nm，流速為1.0ml/min，柱溫為35℃。羅氟司特在8～112μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系（r=0.9999）。羅氟司特平均回收率分別為99.3%。結論：本法簡便、準確，可用于羅氟司特原料藥中羅氟司特的含量測定。

【關鍵詞】羅氟司特原料藥；含量；測定

歐盟已2010年7月批準Nycomed公司羅氟司特（roflumilast，Daxas）上市，用于慢性阻塞性肺疾病（COPD）的治療[1-3]。羅氟司特適用于有頻繁加重病史的成人患者慢性支氣管炎相關嚴重慢性阻塞性肺疾病的維持治療[4-6]。羅氟司特是十多年來首次獲得歐盟批準的新一類慢性阻塞性肺疾病治療藥物[7-8]。羅氟司特選擇性抑制磷酸二酯酶4，進而抑制如慢性阻塞性肺疾病和哮喘等呼吸道疾病對肺組織造成的損傷。慢性阻塞性肺疾病是一種破壞性的肺部疾病，是以不完全可逆的氣流受限為特征的疾病，氣流受限通常呈進行性發展并與肺對有害顆?；驓怏w的異常炎癥反應有關[9-12]。本文采用高效液相法對羅氟司特原料藥中的羅氟司特的進行了含量測定。

1.儀器與試藥

1.1儀器

FL2200-2高效液相色譜儀（浙江福立分析儀器有限公司）；JK-LC液相色譜柱溫箱（北京京科瑞達科技有限公司）；B03001-004在線脫氣機（上海笛柏實驗設備有限公司）；SCQ-1020超聲波清洗器（上海聲彥超聲儀器有限公司）；ABS220-4分析天平（德祥科技有限公司）；RE-5220旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；TU-1901 雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.2色譜柱

奧泰公司C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）。

1.3對照品

羅氟司特 購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4試劑

甲醇（湖北拓楚慷元醫藥化工有限公司）、磷酸（武漢大華偉業醫藥化工有限公司）、乙睛（湖北拓楚慷元醫藥化工有限公司）、甲酸銨（衢州瑞爾豐化工有限公司）、磷酸二氫鉀（湖北拓楚慷元醫藥化工有限公司）、庚烷磺酸鈉（武漢大華偉業醫藥化工有限公司）。

1.5試藥

羅氟司特原料藥。

2.測定方法確定

2.1色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下。流動相：甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸銨溶液（pH3.5）（25∶45∶35），檢測波長：250nm，流速：1.0ml·min-1。柱溫：35℃。理論板數按羅氟司特峰計算應不得低于3000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取羅氟司特對照品適量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取羅氟司特原料藥精密稱定，研細，精密稱取適量，加入甲醇20mL，超聲處理（240W，40kHz）10分鐘，放冷，濾過，將濾液轉移至50毫升容量瓶內，用甲醇定容，即得。

2.4專屬性試驗

分別取經酸破壞、堿破壞、氧化破壞的樣品，按上述色譜條件測定，結果結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5精密度試驗

精密稱取羅氟司特對照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.75%，表明本方法精密度良好。

2.6對照品的線性考察

精密稱取羅氟司特對照品10mg，置25ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，羅氟司特在8～112μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.7重現性試驗

稱取同一批的羅氟司特原料藥樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.56%，結果表明此方法的重現性良好。

2.8準確度試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的羅氟司特對照品，上述方法進行測定，計算回收率，平均回收率分別為99.3%，RSD為0.65%。

2.9樣品穩定性試驗

取同一批羅氟司特原料藥樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、2、4、6、8、10小時，精密吸取供試品溶液10μl 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定羅氟司特原料藥中羅氟司特的RSD=0.79%。結果表明供試品10小時內穩定。

2.10樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定羅氟司特原料藥三批樣品中羅氟司特的含量，結果三批樣品的含量分別為99.6%、99.5%、99.5%。

3.討論

分別考察甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸銨溶液（pH3.5）（35∶45∶25），甲醇-乙睛-水（20∶40∶40），甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸銨溶液（pH3.5）（25∶45∶35），0.05mol·L-1磷酸二氫鉀-0.0025mol·L-1庚烷磺酸鈉溶液-乙腈（5：5：2），甲醇-水-磷酸（49：51：0.2）不同比例的流動相，結果以甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸銨溶液（pH3.5）（25∶45∶35）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用，甲醇-乙睛-0.005mol/L甲酸銨溶液（pH3.5）（25∶45∶35）為流動相。2011年2月28日，羅氟司特經美國FDA批準上市，用于慢性阻塞性肺炎（COPD）的治療。羅氟司特發展潛力巨大。本實驗建立了羅氟司特原料藥含量的測定方法。本法簡便、準確，可用于羅氟司特原料藥中羅氟司特的含量測定。

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