p16和Ki-67在鑒別宮頸上皮內瘤變和宮頸炎中的應用*

王桂梅 聶美楠 王彩霞 呂淑慧 刁為英 郭夢凡 江清林

宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是宮頸癌的癌前病變。盡管CIN有明確的診斷標準，但是在具體工作中還會遇到很多難以鑒別的情況，如反應性鱗狀上皮增生、基底細胞增生、不成熟鱗狀上皮化生及老年性萎縮等。本研究應用免疫組化的方法檢測宮頸組織中p16和Ki-67的表達，探討其在宮頸炎和CIN診斷中聯合檢測的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院病理科2013年1月-2015年3月間慢性宮頸炎及CIN患者的資料及蠟塊，由2位高年資病理醫師復查HE切片并證實。患者年齡18~65歲，平均42.5歲。其中低級別組（CINI組）65例，高級別組（CINⅡ、CINⅢ組）47例，慢性宮頸炎組（陰性對照組）15例，兩組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 方法及試劑 采用免疫組化EnVision法。切片常規脫蠟、脫水，剩余步驟在自動免疫組化儀上進行。染色具體步驟按照儀器操作說明書進行。所用抗體p16及Ki-67均購自上海羅氏公司。

1.3 結果判定 p16以宮頸鱗狀上皮基底和副基底層細胞的連續性染色，有或沒有表面細胞染色，判斷為（+）；孤立細胞或小的細胞簇染色，即非連續的著色，特別是基底和副基底層的鱗狀細胞沒有著色，判斷為（-）。Ki-67陽性為胞核著色，陽性細胞僅位于基底層及副基底層或陽性細胞數≤5%者為（-）；Ki-67陽性患者中，陽性細胞數為6%~25%者為（+）；26%~50%者為（++）；>50%者為（+++）[1]。本文將陽性強度在（+）以上者列為陽性細胞。

1.4 統計學處理 運用SPSS 16.0統計軟件對所得數據進行統計學處理，計數資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組p16及Ki-67陽性率比較 慢性宮頸炎中p16為陰性，在CIN中p16大部分呈陽性（88/112），低、高級別CIN組與宮頸炎組比較差異有統計學意義（P<0.001）。高級別CIN組p16陽性率顯著高于低級別CIN組，兩組比較差異有統計學意義（P<0.001）。Ki-67在慢性宮頸炎組僅見少量表達，在CIN組表達增加（106/112），低、高級別CIN組與宮頸炎組比較差異有統計學意義（P<0.001）。低級別CIN組與高級別CIN組之間比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 三組p16、Ki-67表達的比較

2.2 病理結果比較 在慢性宮頸炎中p16為陰性，鱗狀上皮Ki-67基底細胞（+）；低級別CIN中p16陽性細胞局限于宮頸鱗狀上皮的下1/3，在高級別CIN中陽性細胞累及甚至超過上皮下2/3層或全層彌漫陽性。隨著病變程度的加重，Ki-67表達范圍及陽性強度都有所提高，低級別CIN主要為鱗狀上皮層下1/3的細胞核著色，呈黃褐色；高級別CIN主要為鱗狀上皮層下2/3至全層細胞核著黃褐色，呈強陽性（圖 1~3）。

圖1 慢性宮頸炎注：a與b均為EnVision法（10×10）；b：鱗狀上皮Ki-67基底細胞（+）

圖2 低級別上皮內瘤變注：a：HE染色法（10×10）；b：EnVision法（10×10），鱗狀上皮p16（+），陽性部位為鱗狀上皮下1/3；c：EnVision法（10×10），鱗狀上皮Ki-67（+），鱗狀上皮下1/3層細胞核著黃褐色

圖3 高級別上皮內瘤變注：a：HE染色法（10×10）；b：EnVision法（10×10），鱗狀上皮p16全層（+）；c：EnVision法（10×10），Ki-67全層（+）

3 討論

宮頸上皮內瘤變（CIN）根據鱗狀上皮異型增生的程度分為三級：CINⅠ級相當于輕度非典型增生，CINⅡ級相當于中度非典型增生，CINⅢ級相當于重度非典型增生和原位癌[2]。發生CIN主要的危險因素是HPV感染。宮頸病變中HPV16、18感染與p16的過度表達呈正相關[3]。

p16基因又稱多腫瘤抑制基因，為細胞周期依賴性激酶（CDK）抑制蛋白，直接參與細胞周期的調控，負調節細胞增殖及分裂，當p16基因突變致結構和功能缺失時，可刺激細胞分裂，引起細胞的非典型增生，甚至癌變[4]。本研究發現p16在慢性宮頸炎不表達或呈不連續的點灶狀的表達，在CIN病變中表達增加。p16表達在低級別到高級別CIN中呈逐漸增高的趨勢，比較差異有統計學意義（P<0.001）。p16的陽性部位位于細胞漿和細胞核，呈現彌漫陽性的表達方式，棕黃色，在低級別CIN中彌漫表達于鱗狀上皮的下1/3層，高級別CIN中表達于鱗狀上皮的下2/3層甚至全層，彌漫性強陽性。對于炎癥背景較重而CIN病變范圍較小的宮頸活檢標本，p16陽性標記可以檢出部分漏診的病例，p16陽性的范圍可以幫助判斷CIN的級別。

Ki-67是一種反映細胞增殖程度的核抗原，在細胞增殖周期的G1、S、G2及M期表達，細胞有絲分裂后該蛋白含量迅速減少，在G0期不表達[5]。本研究結果顯示Ki-67在慢性宮頸炎、低級別上皮內瘤變及高級別上皮內瘤變中的陽性率分別為13%、90%和100%，慢性宮頸炎陰性表達或僅表達于基底層細胞，在鱗狀上皮乳頭狀增生區域其表達有所增加，此時聯合應用p16對于鑒別低級別CIN有一定的幫助。低、高級別CIN組Ki-67陽性率比較差異無統計學意義（P>0.05），故聯合應用p16對于CIN的分級尤為重要。

綜上所述，聯合檢測p16和Ki-67可以幫助病理醫師鑒別慢性宮頸炎及CIN，提高CIN診斷準確性，降低誤診率。

[1]史健，鄭軍生，尹方，等.宮頸上皮內瘤變p16、p53、Ki-67的表達與高危型HPV感染及其臨床意義[J].南方醫科大學學報，2007，27（4）：515－ 517.

[2]陳樂真.婦產科診斷病理學[M].北京：人民軍醫出版社，2010：117.

[3]鄒先進，蔡蘭，劉穎，等.子宮頸癌前病變與子宮頸癌組織中p16INK4A蛋白檢測及其與人乳頭狀瘤病毒感染的關系[J].中華婦產科雜志，2004，39（9）：625-626.

[4]旦慧文，戴淑真.p53、p16、PTEN基因在宮頸癌中的作用[J].中國誤診學雜志，2005，5（7）：1226-1228.

[5]王巖，劉曉霞.上皮內瘤樣病變及宮頸癌組織中Ki67、p16的異常表達[J].寧夏醫學雜志，2002，24（11）：649-651.