雞BCs原代培養(yǎng)貼壁性影響因素分析*

王 坤，張佰忠，易康樂(lè)，蔣 雋，王慶橋，李昊幫，燕海峰,*

(1.湖南光大牧業(yè)科技有限公司，湖南 長(zhǎng)沙 410131；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；3.湖南天心黃雞育種有限公司，湖南 長(zhǎng)沙 410143)

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雞BCs原代培養(yǎng)貼壁性影響因素分析*

王 坤1,2，張佰忠1，易康樂(lè)1,2，蔣 雋2，王慶橋3，李昊幫1，燕海峰1,3*

(1.湖南光大牧業(yè)科技有限公司，湖南 長(zhǎng)沙 410131；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；3.湖南天心黃雞育種有限公司，湖南 長(zhǎng)沙 410143)

試驗(yàn)從雞第X期胚胎中分離囊胚，使用含10%FBS、青霉素和鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基，對(duì)雞X期BCs進(jìn)行無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)。分別在6 h、12 h、24 h對(duì)細(xì)胞貼壁性進(jìn)行評(píng)價(jià)，探究分離方法、離散程度、培養(yǎng)細(xì)胞密度、離心損傷對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明：濾紙環(huán)法在分離胚胎上效果最好；細(xì)胞離散程度上，吹打20下效果最好，與吹打30下差異不顯著(P>0.05)，二者與吹打40下差異均顯著(P<0.05)；接種密度上，1×103個(gè)/mL和5×103個(gè)/mL兩組差異不顯著(P>0.05)，這兩組與其它組，以及其它組之間差異均顯著(P<0.05)，密度為1×105個(gè)/mL時(shí)效果最好，5×104個(gè)/mL次之，但密度為5×104個(gè)/mL時(shí)更方便觀察；離心處理上，都離心5 min的條件下，5 590 ×g和1 398 ×g組差異不顯著(P>0.05)，但其與224 ×g處理組差異顯著(P<0.05)，其中5 590 ×g組效果最佳。因此，濾紙環(huán)法分離胚胎，吹打20下離散細(xì)胞，使用5 590 ×g離心5 min，稀釋成5×104個(gè)/mL的密度，接種到96孔板培養(yǎng)，可以獲得較好的結(jié)果。

雞；X期BCs；原代培養(yǎng)；貼壁性

禽類(lèi)種蛋產(chǎn)出時(shí)，受精卵已發(fā)育成為具有內(nèi)外胚層，總數(shù)達(dá)4萬(wàn)～6萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)(即X期囊胚)[1]，該時(shí)期的細(xì)胞稱(chēng)為BCs (Blastodermal cells，BCs)。雞BCs在禽類(lèi)生物技術(shù)研究領(lǐng)域具有十分重要的作用：第一，它是潛在的雞胚胎干細(xì)胞[2]；第二，它是禽類(lèi)轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究中的主要靶細(xì)胞[3-5]；第三，在禽類(lèi)種質(zhì)資源保護(hù)利用方面，通過(guò)解凍BCs制備嵌合體而重新獲得活體[6-8]，解決無(wú)法冷凍保存禽類(lèi)母系(W)遺傳資源的問(wèn)題。

目前，以上領(lǐng)域的研究與應(yīng)用的技術(shù)瓶頸就是獲得BCs，因此建立高效獲取BCs方法并優(yōu)化其冷凍程序就顯得尤為重要。目……