HPLC法測定阿日申—18中梔子苷的含量

包長龍　薩茹拉　趙東鯤

[摘 要] 目的：測定阿日申-18中梔子苷的含量。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為乙腈-水（15∶85），檢測波長為238nm，流速為1.0ml/min。結果：梔子苷在0.0650～0.8125μg/ml范圍內呈良好的線性關系。梔子苷平均加樣回收率為101.7%，RSD為1.5%（n=9）。結論：該方法簡便、靈敏，可用于制劑的質量控制。

[關鍵詞] 阿日申-18；梔子苷；HPLC

[中圖分類號]R284.1 [文獻標志碼] A [文章編號]1007-8517（2015）06-0013-02

阿日申-18是由楓香脂、冬葵果、決明子、黨參、草烏（制）、麻黃、苦參、黃精、梔子、文冠木、木香、五靈脂（制）、石菖蒲、訶子、川楝子、瞿麥、黑云香、人工麝香十八味藥組成的水丸，該方具有清熱、瀉火、涼血的功效[1-2]，可治療銀屑病、皮膚瘙癢、濕疹、癤腫、梅毒等各種皮膚病及風濕病癥。該方主要成分之一梔子對本方臨床療效有重要作用，本文采用高效液相色譜法測定梔子中主要有效成分梔子苷的含量[3]。實驗表明，該方法簡單、準確、重現性好，可有效的控制產品的質量，可作為質量控制的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Alltech高效液相色譜儀Series1500，UV201紫外檢測器，自動進樣器；TP-300超聲儀。

1.2 試藥 梔子苷對照品（批號：110749-200613，中國藥品生物制品檢定所提供）；阿日申-18（批號：080705、090616、090617）由內蒙古通遼市蒙醫研究所制劑室提供。

2 方法和結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（15∶85）；流速：1.0ml/min；進樣量：10μl；柱溫：30℃；檢測波長：238nm。理論塔板數按梔子苷峰計算應不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備 稱取梔子苷對照品16mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（制成每1ml含梔子苷30μg的溶液）。

2.3 樣品溶液的制備 取裝量差異項下的本品適量，研細，取約1.6g，精密稱定，置100ml碘量瓶中，加入甲醇25.0ml，稱定重量，超聲處理（功率160W，50kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。量取續濾液3.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性對照試驗 按上述方法制備樣品溶液和對照品溶液。另取陰性樣品（按處方比例并以相同工藝制備的無梔子的樣品），按阿日申-18溶液制備法制得陰性對照溶液。分別精密吸取陰性溶液、阿日申-18溶液、對照品溶液各10μl，注入Alltech高效液相色譜儀Series1500，在同一色譜條件下進行測定，結果：陰性色譜圖中，在與梔子苷對照品及樣品阿日申-18色譜圖相同保留時間處無色譜峰出現，表明配方中的其他組分對阿日申-18中梔子苷的測定無干擾。

2.5 線性關系考察 精密吸取對照品溶液1、2、5、8、10、15、20、25μl分別進樣，按上述色譜條件進行測定，以峰面積為縱坐標（Y），以對照品進樣量為橫坐標（X），繪制標準曲線。結果梔子苷在0.3762～3.7620μg/ml范圍內線性關系良好，回歸方程為：Y=1.5E+6X+3692.7，r=0.99985。

2.6 精密度試驗 精密量取梔子苷對照品溶液10μl，在上述色譜條件下連續進樣6次，測定梔子苷峰面積，結果梔子苷峰面積的RSD（n=6）為1.2%。

2.7 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（批號：090616）6份，研細，按上述樣品制備方法制備樣品溶液，在上述色譜條件下進行分析測定，測得每份樣品含量。結果梔子苷的平均含量（n=6）為2.11mg/g，RSD為0.1%。見表1。

2.8 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、15、20h取樣10μl，按上述色譜條件進樣測定。RSD（n=6）為0.2%，表明供試品溶液20h內穩定。

2.9 加樣回收試驗 取供試品（含量1.864mg/g）9份，各約0.8g，精密稱定，分別置9個具塞錐形瓶中，再分別在其中3個具塞錐形瓶中各精密加入濃度為0.1738mg/ml的梔子苷對照品甲醇溶液5ml（約相當于供試品含有量的75%）及甲醇溶液20ml，另3個具塞錐形瓶中各精密加入上述對照品溶液12ml（約相當于供試品含有量的100%）及甲醇溶液13ml，其余3個具塞錐形瓶中各精密加入上述對照品溶液16ml（約相當于供試品含有量的125%）及甲醇溶液9ml，分別稱定重量，超聲處理30min，取出，再稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。各取續濾液10μl進樣，測定每份含量，計算回收率，梔子苷平均回收率（n=6）為101.7%。RSD為1.5%。結果見表2。

2.10 樣品測定 按含量項下方法制備樣品溶液，在上述色譜條件下進行測定，三批樣品的測定結果見表3。

3 討論

3.1 提取條件的優化 根據文獻[4-5]，中藥梔子的梔子苷含量測定方法中，選用甲醇作為提取溶劑，故本研究也采用甲醇作為提取溶劑。分別對不同溶劑體積及不同超聲時間進行了對比試驗，最后得到最優化的提取方法為：溶劑甲醇，加入量25ml，超聲處理30min。

3.2 檢測方法的優點 本文中定量方法準確、靈敏、專屬性強，可作為控制阿日申-18制劑質量的檢測方法。

參考文獻

[1]那莎，郭國田，王宗殿，等.梔子及其有效成分藥理研究進展[J].中國中醫藥信息雜志，2005，12（1）：90-92.

[2]方尚玲，劉源才，張慶華，等.梔子苷鎮痛和抗炎作用的研究[J].時珍國醫國藥，2008，19（8）：1374-1376.

[3]劉瑛，張浩.梔子藥材中梔子苷的含量測定[J].華西藥學雜志，2003，18（5）：374-375.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[5]趙超，康文藝.梔子中梔子甙的提取工藝研究[J].河南大學學報（醫學版），2007，45（1）：43-44.