子宮內膜癌組織Cav-1 mRNA表達及意義

王惠清，李錦行，張萍(青島大學醫學院附屬青島市立醫院，山東青島266011)

子宮內膜癌組織Cav-1 mRNA表達及意義

王惠清，李錦行，張萍
(青島大學醫學院附屬青島市立醫院，山東青島266011)

摘要:目的探討小窩蛋白(Cav-1)在子宮內膜癌發生、發展中的作用。方法采用實時熒光定量RT-PCR (FQ-PCR)法定量檢測20例正常子宮內膜組織(正常組)，45例子宮內膜良性病變組織(良性組)和49例子宮內膜癌組織(內膜癌組) Cav-1 mRNA的表達量，分析Cav-1 mRNA表達量與子宮內膜癌臨床病理參數的關系。結果正常組Cav-1 mRNA相對表達量為1.000±0.138，良性組為3.531±0.727，內膜癌組為8.534±1.502，Cav-1 mRNA相對表達量內膜癌組高于良性組，良性組高于正常組，P均＜0.05。內膜癌組Cav-1 mRNA表達與臨床分期、分化程度和淋巴結轉移有關(P均＜0.05)。結論Cav-1高表達可促進子宮內膜癌的發生及發展，Cav-1有望成為子宮內膜癌早期診斷的新指標及治療的新靶點。

關鍵詞:子宮內膜癌; Cav-1基因

近年來子宮內膜癌的發病率不斷上升，且有年輕化趨勢。目前對其確切病因仍不清楚，且早期診斷困難［1］。探討子宮內膜癌的發病機制，尋找一種新型的標記物用于腫瘤的早期診斷是亟待解決的問題。小窩蛋白(Cav)是細胞脂質雙分子層上的特異性微區，組成了細胞質膜上50～100 nm的燒瓶狀囊泡性內折，在膜轉運、脂質動態平衡、信號轉導過程中發揮重要調節作用［2］。研究發現Cav-1在乳腺癌、肺癌、卵巢癌和肉瘤組織中表達下調，而在食管癌、腎癌、前列腺癌和膀胱癌中表達上調［3，4］;但其與子宮內膜癌關系的研究鮮見。2014年5～11月，我們采用FQ-PCR法定量檢測子宮內膜癌組織中Cav-1 mRNA的表達，現分析結果，探討其在子宮內膜癌發生發展中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2012年10月～2014年7月青島市立醫院收治的49例子宮內膜癌患者的手術標本(內膜癌組)，均經病理檢查確診?；颊吣挲g31 ～74歲，平均53.83歲，其中＜50歲21例(42.86%)，≥50歲28例(57.14%)。病理類型:腺癌35例、漿液性乳頭狀癌9例，透明細胞癌5例。按2009年國際婦產科聯盟(FIGO)的病理分期標準Ⅰ期15例、Ⅱ期21例、Ⅲ期8例、Ⅳ期5例;組織分化程度為高分化24例、中分化17例、低分化8例;淋巴結轉移陽性15例，陰性34例。選擇14例子宮內膜單純性增生、15例復雜性增生，16例復雜伴不典型增生的子宮內膜組織標本為良性對照組，年齡47～63歲，平均50.27歲，均由兩位以上的病理科醫生診斷確診。選擇同期20例因子宮肌瘤于我院行全子宮切除患者的正常子宮內膜組織為正常組，患者年齡30～57歲，平均47.96歲。所有入選病例手術前均未接受過性激素治療及放化療。組織標本離體后10 min內置于液氮中保存。

1.2Cav-1 mRNA表達檢測采用實時熒光定量RT-PCR(FQ-PCR)法。取各組冰凍保存的子宮內膜組織30 mg置于去RNA酶的1.5 mL離心管中，添加1 mL的Trizol。按照Trizol試劑盒使用說明書從組織中提取總RNA。紫外分光光度計測定RNA提取液的D260吸光度值，計算純度和濃度。嚴格按照逆轉錄試劑盒說明進行逆轉錄處理，合成cDNA，－20℃凍存備用。按照熒光定量反應試劑盒說明書建立反應體系，實施PCR循環。Cav-1 mRNA (140 bp)及β-actin(179 bp)引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。

1.3統計學方法采用SPSS19.0統計軟件。數據采用珋x±s表示。各組間Cav-1 mRNA表達量比較采用t檢驗; Cav-1 mRNA與子宮內膜癌臨床病理參數的關系采用兩獨立樣本t檢驗或單因素方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

正常組Cav-1 mRNA相對表達量為1.000± 0.138，良性組為3.531±0.727，子宮內膜癌組為8.534±1.502，Cav-1 mRNA相對表達量子宮內膜癌組高于良性組，良性組高于正常組，P均＜0.05。Cav-1 mRNA表達與子宮內膜癌的臨床分期、分化程度和淋巴結轉移均有關(P均＜0.05)，詳見表1。

表1　Cav-1 mRNA表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系(±s)

臨床病理參數　n　Cav-1 mRNA相對表達量臨床分期Ⅰ期　15　1.000±0.045Ⅱ期　21　2.003±0.114Ⅲ期　8　4.224±0.436Ⅳ期　5　12.606±1.434分化程度高24　1.000±0.054 中17　2.078±0.276 低8 7.155±0.453淋巴結轉移無34　0.331±0.045 有15　1.000±0.110

3　討論

子宮內膜癌是女性生殖器官最常見的惡性腫瘤之一，其發病率高居婦科疾病惡性腫瘤之首［5］。子宮內膜癌的發生是多基因、多步驟的復雜過程，細胞周期進程紊亂、細胞增殖異常、癌基因激活或抑癌基因失活均可能導致正常子宮內膜惡性轉化及子宮內膜癌的發生發展［6］。近年來國內外認為子宮內膜癌的發生主要與雌激素升高有關，亦與子宮內膜生長過度、肥胖、高血壓、糖尿病、不育、月經延遲、相關家族史有關。

Cav家族有3個亞型，即Cav-1、Cav-2和Cav-3。Cav-1蛋白是細胞質膜中不可缺少的一部分，位于特殊的脂質筏中，而該脂質筏存在于包括癌細胞在內的多種細胞中［3］。Cav-1共有α和β兩個亞型，由于選擇性剪切或啟動作用，在氨基末端CAV-1β 較CAV-1α存在31個氨基酸殘基缺失。由于Cav-1能直接與受體、激酶、黏附分子和G蛋白等信號分子交互作用，因此能通過調節細胞增殖、分化、凋亡、黏附和侵入起到調節腫瘤的作用。Cav-1在腫瘤細胞分化、增殖、凋亡和轉移中起重要調控作用，已成為腫瘤研究的熱點之一，但在腫瘤發生發展中的具體作用仍存有爭議。Cav-1基因位于人7q31.1染色體上，該位點在部分腫瘤(如乳腺腫瘤和腎臟腫瘤)類型中表現為雜合性缺失，表明Cav-1基因可能作為候選腫瘤抑制基因［7，8］，但另有研究表明Cav-1在食管胃底癌、泌尿系腫瘤等多種腫瘤中的表達上調，并與預后不良密切相關［9，10］。由此可見Cav-1在腫瘤發生發展中作用復雜，其生物學功能具有不確定性。相關假說和證據表明這種差異與細胞和細胞接觸蛋白E鈣黏著素有關。一項最新評估致癌性轉化的研究證實，Cav-1與E鈣黏著素存在相關性［11，12］;在含環氧合酶-2(COX-2)和前列腺素(E2)的人結腸癌和鼠黑色素瘤細胞實驗中發現，Cav-1可能只有在E鈣黏著素經β-連環蛋白-Tcf/Lef通路存在的情況下才能抑制抗凋亡蛋白生存素的表達［12］。

鄭亞民等［13］報道，Cav-1對Hs578T耐藥細胞株成瘤性、侵襲和轉移能力具有明顯的促進作用。Kato等［14］證實，在食管鱗癌中，Cav-1過表達與腫瘤分級和淋巴結轉移有關，認為Cav-1的高表達是食管鱗癌淋巴結轉移的促進因素。以上結果提示，Cav-1的過表達與人類一些腫瘤的發生、侵襲、轉移密切相關。本研究各組Cav-1 mRNA均有不同程度表達，表達量隨惡性程度上升而升高，表明Cav-1在子宮內膜癌中發揮癌基因樣作用。內膜癌組有淋巴結轉移者Cav-1表達量高于無淋巴結轉移者，表明Cav-1表達量與子宮內膜癌的侵襲轉移有一定關系，但仍需擴大研究樣本量進一步研究。

綜上所述，盡管Cav-1在不同腫瘤中的作用仍存在爭議，其作用機制也不甚明了，但其與腫瘤發生的相關性不容置疑。子宮內膜癌作為女性最常見的惡性腫瘤之一，其早期診斷仍是一大難題，Cav-1可作為腫瘤標志物對高危人群進行檢測、篩查。此外，進一步闡明Cav-1在子宮內膜癌發生、發展中的分子機制，通過靶向抑制Cav-1的表達，有望對子宮內膜癌的治療起到積極作用。

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(收稿日期:2015-01-18)

通信作者:張萍

文章編號:1002-266X(2015)22-0051-03

文獻標志碼:B

中圖分類號:R711.74

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.22.019