HPLC分析煙草化學成分及香精指紋譜圖基礎研究

白凱

摘 要：對復雜體系組分分離以及分析的過程中現代色譜分析具有十分重要的作用，在色譜分析技術水平不斷提升的過程中使其得到了廣泛的使用。目前色譜分析技術在生命科學、食品科學、煙草化學中均具有重要的地位，特別是對于煙草等成分及其復雜的樣品具有良好的分離效果。

關鍵詞：HPLC 煙草化學 香精指紋譜圖

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2014）11（b）-0067-01

高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography）是當前最為常見的分離檢測技術之一，常見的高效液相色譜又包括了吸附色譜、分配色譜離子、交換色譜以及凝膠色譜[1]。高效液相色譜在使用過程中需要高壓支持，這主要是由于流動相在經過色譜柱時受到的阻力較大。在高效液相色譜技術不斷發展的情況下其應用范圍也得到了擴展。

咖啡酸廣泛純在于各種天然產物當中，在煙草當中含量較高。以下為咖啡酸測定具體實驗。

1 實驗儀器及器材

高效液相色譜儀、超聲儀、電子天平、煙草樣品咖啡酸標準樣品（98.0%）、甲醇（色譜純）、甲酸（色譜純）、香豆素（分析純）、硝基苯（分析純）等。

2 溶液配制

萃取液為甲醇：水=4：1溶液；將內標物香豆素0.3000 g至于100 mL容量瓶中，用已經配制的萃取液進行稀釋、搖勻作為儲備液，準確移取4.00 mL內標儲備液置于100 mL容量瓶當中，用萃取液稀釋、搖勻作為香豆素內標溶液；將0.2406 g硝基苯置入100 mL容量瓶當中，萃取液稀釋、作為儲備液，準確移取4.00 mL內標儲備液置于100 mL容量瓶當中，用萃取液稀釋、搖勻作為硝基苯內標溶液。

取0.20 g樣品充分研磨置于10 mL容量瓶中，置入5.00 mL內標液搖勻、稀釋。設定溫度為60℃進行超聲萃取，完成后靜置并取上清液用有機膜過濾（孔徑為0.45 μm），采用高效液相色譜對其樣品溶液進行分析。

3 色譜條件

色譜柱規格為4.6 mm*250 mm，5 μm，檢測采取UV330 nm進行，流速為0.9 mL/min，柱溫為40℃。流動相梯度具體如表1所示。

4 結果分析

分別繪制香豆素以及硝基苯的內標工作曲線得到曲線圖見圖1、表2。

以往咖啡酸主要是通過索氏提取法進行萃取，但是該方法效率并不理想并且需要耗費大量溶劑，時間較長，即便是萃取完成后采取色譜分離時依舊需要較為復雜的預處理。采用超聲輔助萃取可克服上述方法的不足。經過實驗發現采取超聲輔助萃取時咖啡酸萃取量與溫度呈正相關關系，當溫度達到60℃時萃取量最高。而當溫度超過60℃時萃取量逐漸下降，由此可知該實驗匯總咖啡酸的最佳萃取溫度為60℃。在色譜相的篩選過程中考慮到咖啡酸作為酚酸類物質，因此可通過調節pH來控制其在色譜中的時間，以此獲取更優的分離效果。上述研究中水相為0.1%甲酸，有機相將甲醇以及香豆素為內標可獲取較好的分離效果。在經過測定、回收計算后得到樣品回收率如表3所示。

根據表3可得上述方法的平均回收率為97.26%。經過總結可以看出該研究通過高效液相色譜與超聲波輔助萃取配合對咖啡酸進行測定取得了較好的效果。與以往的溶劑萃取相比該方法效率更高且溶劑量使用也得到了控制，將其擴展到其他植物咖啡酸含量測定均取得了較好的效果，由此可見上述分離方法具有良好的適用性。

5 結語

該研究通過煙草咖啡酸的測定對HPLC分析煙草化學成分測定進行分析，取得了一定的成果，在此基礎上配合香精指紋譜圖可讓檢測分離效果得到提升，將該方法進行推廣對其他復雜物質的化學組分測定具有一定的意義。

參考文獻

[1] 田晨煦，徐小平，廖麗云.高效液相色譜-串聯質譜法分離鑒定綠原酸及其相關雜質[J].色譜，2007（4）：496-501.

[2] 李福娟，蔡文生，邵學廣.反相高效液相色譜法分離測定煙草中的多酚類化合物[J].色譜，2007（4）：565-569.

[3] 曲國福，陸舍銘，孟昭宇.色譜指紋圖譜在煙用香精質量控制中的應用[J].煙草科技，2007（7）：46-51.endprint