常規(guī)病理制片中問題的探討及體會

高金來 朱凱 賴世平

(湖州市婦幼保健院 浙江 湖州 313000)

常規(guī)病理制片中問題的探討及體會

高金來 朱凱 賴世平

(湖州市婦幼保健院 浙江 湖州 313000)

常規(guī);病理制片;探討

病理制片技術(shù)是病理工作中的重要環(huán)節(jié)，切片質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響臨床病理的診斷。在制片中我們通常會遇到許多問題，如果處理不當(dāng)，就會影響制片質(zhì)量，進而影響病理診斷［1］。提供一張高質(zhì)量的切片并非一日之力，需要我們在日常的工作中不斷積累熟練的技巧和實踐的經(jīng)驗，下面我們探討一下常規(guī)病理制片中經(jīng)常出現(xiàn)的問題及一些個人體會。

1.固定和取材

送檢標(biāo)本應(yīng)及時固定，沒有及時固定或固定不充分的標(biāo)本，組織會出現(xiàn)自溶現(xiàn)象，細(xì)胞核不清晰。不同的組織有不同的固定方法，對于淋巴組織一般需要切開固定，因為淋巴組織的包膜比較堅韌，會影響固定液的滲入，收到這類標(biāo)本后需要及時切開。固定液的量也是很重要的一般為組織體積的3-5倍。固定時間大標(biāo)本一般24小時，小標(biāo)本一般4-6小時就可以了。

取材時要注意的幾點①取材的標(biāo)本大小要適度，常規(guī)標(biāo)本厚度一般為0.2～0.3cm，太厚組織固定不好，組織結(jié)構(gòu)不佳，過薄則組織切片張數(shù)有限，由于讀片的時候難以滿足需要。對于冷凍切片取材略厚，可達(dá)0.3～0.4cm;②取材時要注意包埋的方向，如有皮膚組織，包埋面必須與表面垂直，這樣才能保證皮膚的各層結(jié)構(gòu)都能被觀察。

2.脫水

現(xiàn)在病理科基本上都采用自動脫水機進行脫水，效果較好。常見的問題是脫水試劑使用一段時間后，試劑會揮發(fā)引起濃度降低影響組織的固定、脫水、透明、浸蠟的徹底，從而影響制片質(zhì)量。所以脫水機的試劑要定期更換，最好用酒精比重計測量酒精，這樣更換試劑更科學(xué)，更精確些。

3.包埋

包埋石蠟的選擇也直接影響切片的質(zhì)量。石蠟熔點偏低難以切出較薄的切片;石蠟熔點過高造成切片困難。另外在包埋的過程中，注意浸蠟的溫度與包埋蠟的溫度及包埋用的鑷子、組織塊溫度要保持一致，否則會引起組織與周圍脫裂現(xiàn)象，切片時容易出現(xiàn)空洞。包埋時還應(yīng)該注意包埋組織的方向，如為囊壁則倒立起包埋;如有皮膚組織包埋面必須與表面垂直，這樣才能保證皮膚的各層結(jié)構(gòu)都被觀察到。

4.切片

切片環(huán)節(jié)是病理制片中的一個重要環(huán)節(jié)，直接影響組織的鏡下觀察。切片中容易出現(xiàn)以下情況。

4.1 切片不完整 原因∶是組織包埋時，組織塊平面與包埋盒底面呈一定角度。處理∶切片時調(diào)節(jié)組織塊夾頭的角度，深切即可解決或者重新包埋組織，將組織面壓平，再次切片。

4.2 切片厚薄不均 原因∶切片機使用過程中發(fā)生磨損或故障，組織塊夾頭或刀架的固定螺絲未擰緊，導(dǎo)致切片刀和組織塊未固定。處理∶查明原因后進行修理，切片前檢查切片機的各種螺絲是否擰緊，檢查切片刀和組織塊，石蠟和包埋盒是否固定良好。

4.3 切片中壓縮引起皺褶 原因∶切片刀不鋒利，切片易壓縮皺褶;切片時切片刀角度過大使切片蜷縮;展片時不易展平造成皺褶。處理∶更換鋒利的刀片，調(diào)整刀的角度，切片時同時用毛筆卷片，由于外力牽引皺褶改善，展片時水溫在40-50度，必要時可在水中加適量乙醇，有助于組織展開，減少皺褶。

4.4 切片脫落 原因∶組織內(nèi)含過多的壞死成分，組織細(xì)胞壞死崩解后局部的滲透壓升高吸收水分，切片一經(jīng)固定，水分逸出，壞死組織失去支撐作用;切片太厚;染色時水流過急，沖壞組織完整性甚至脫落。處理∶避免組織內(nèi)帶有壞死組織;選擇最佳的固定液，另外，及時將盛有固定液的瓶蓋蓋好，防止固定液的揮發(fā)而降低其濃度，定期更換固定液;保持載玻片干凈;切片的厚度不要太厚，盡量薄一些。

4.5 切片污染 原因∶撈片的時候水面不夠干凈產(chǎn)生;或者是取材的時候取材板不夠干凈;包埋的時候鑷子不干凈所致。處理∶在病理制片的每一個環(huán)節(jié)都要防止污染，切片撈片時及時清除水面上的污物，取材時每切一例標(biāo)本都要注意刀、剪、鑷子和取材板的清潔。

4.6 切片細(xì)胞擠壓 鏡下細(xì)胞核呈狹長細(xì)絲狀，深染，細(xì)胞漿不明顯，細(xì)胞無完整結(jié)構(gòu)，這種情況多見于細(xì)小的活檢組織、多次切片后仍如此。原因∶醫(yī)師取材的時候，組織受鑷子等器械的機械性擠壓造成的。處理∶病理醫(yī)師在取材時對于細(xì)小組織切忌擠壓，對于大塊組織應(yīng)使用鋒利刀具，下刀輕快，一次切成，不可拉鋸樣取材和強力擠壓，避免使用有齒鑷。

4.7 組織破碎松散 原因∶展片溫度過高;二甲苯透明的組織容易發(fā)脆發(fā)硬，對于含膠原豐富的組織脆硬較明顯，切片時組織容易出現(xiàn)破碎松散;脂肪組織及含脂肪豐富的組織因脫脂不干凈，浸蠟困難，切片時常產(chǎn)生破碎;含手術(shù)絲線等異物的組織也會出現(xiàn)切片時組織分散、破碎的現(xiàn)象。處理∶展片時應(yīng)調(diào)整溫度，不可過高，避免彌散;對于脂肪組織及含脂肪豐富的組織可適當(dāng)?shù)难娱L脫水及透明時間;取材時盡量除去線頭等異物，以利于切片。

5.染色

染色首先需要良好的試劑，我們現(xiàn)在用的是改良的蘇木精染色液，效果較好，關(guān)鍵是時間不可過長，更不能太短，發(fā)現(xiàn)著色不深時可考慮更換試劑［2］。冬季溫度過低;二甲苯使用時間過長;脫蠟試劑呈飽和狀態(tài);試劑有水分都會造成脫蠟不徹底，染色后無水乙醇及透明試劑使用時間過長或混入水分形成脫水透明不徹底，組織切片呈白色云霧狀區(qū)域等，造成染色不徹底。這時我們應(yīng)該更換脫蠟劑、脫水劑和透明劑。

6.封片

切片封固使用的樹膠稠稀要適當(dāng)，過稀過多容易發(fā)生溢膠;過稠過少容易出現(xiàn)封片不全或氣泡。封片不及時易引起組織干涸，出現(xiàn)組織收縮和裂痕，即龜裂現(xiàn)象。或者因吸收空氣中的水分使部分細(xì)胞核透明不良而出現(xiàn)黑核現(xiàn)象。

總之，做好病理切片工作，需要病理技術(shù)人員在平時的工作實踐中不斷總結(jié)，不斷進步，注意標(biāo)本固定、脫水、包埋、染色、封片等多個環(huán)節(jié)的規(guī)范操作，精益求精，才能作出更優(yōu)質(zhì)的病理切片。

［1］王伯壇.病理學(xué)技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：6.

［2］趙鵑，潘志芹，李志燕.影響病理切片質(zhì)量的因素及糾正方法［J］.診斷病理學(xué)雜志，2008，15(1)：82.

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1009-6019(2015)10-0049-02