黃芪薄層鑒別方法改進(jìn)分析

沈潔

黃芪為豆科植物膜莢黃芪Bge和蒙古黃芪Hsiao的干燥根，對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)影響廣泛，免疫活性促進(jìn)作用明顯，并促體液免疫，使單核巨噬細(xì)胞所具有的吞噬作用增強(qiáng)，對(duì)T、B淋巴細(xì)胞吞噬作用有刺激作用，并對(duì)自然殺傷細(xì)胞相關(guān)功能加以促進(jìn)，使體內(nèi)組織細(xì)胞的存活延工，黃芪多糖F 8可使腫瘤患者和正常人淋巴細(xì)胞免疫功能提高，T抑制細(xì)胞功能降低，進(jìn)而將TS細(xì)胞抑制免疫反應(yīng)的作用解除[1-2]。黃芪以多糖、黃酮、皂苷為主要成分，對(duì)其行薄層鑒別，并探討鑒別改進(jìn)方法，對(duì)其臨床應(yīng)用有推動(dòng)意義。本研究對(duì)探討黃芪薄層鑒別方法的改進(jìn)措施，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選用黃芪藥材、黃芪甲苷對(duì)照品作材料，各50份，薄層色譜硅膠G板，分析純作化學(xué)試劑。

1.2 方法

1.2.1 黃芪甲苷對(duì)照品 （1）藥典方法：在20m L甲醇中加入黃芪粉末3 g，加熱回流1 h，完成濾過(guò)處理，將濾液在中性氧化鋁柱中加入，用100m L 40%甲醇完成洗脫處理，對(duì)洗脫液進(jìn)行收集，蒸干，取水30m L在殘?jiān)屑尤耄偈蛊溥_(dá)到溶解狀態(tài)，用正丁醇振搖提取2次，20m L/次，與正丁醇液合并，用水洗滌2次，20m L/次，將水液棄去，蒸干正丁醇液，取甲醇0.5m L加入殘?jiān)倨淙芙猓洚?dāng)供試品溶液。對(duì)照組為黃芪甲苷。運(yùn)用照薄層色譜法完成相關(guān)試驗(yàn)，將上述2種溶液各吸收2μL，于同一硅膠G薄層板上放置，展開(kāi)劑為三氯甲烷-甲醇-水的下層，行展開(kāi)處理后，完成取出處理，并晾干，取10%硫酸乙醇溶液噴灑，加熱至斑點(diǎn)清晰顯色。（2）新擬方法：取3 g黃芪粉末，加40m L水飽和正丁醇，完成加熱及回流1 h操作，行濾過(guò)處理，用氨試液將濾液洗滌2次，20m L/次，與氨試液合并，備用。用水將正丁醇洗滌2次，20m L/次，將水液棄去，蒸干正丁醇，取甲醇0.5m L在殘?jiān)屑尤耄倨淙芙猓渥鞴┢啡芤骸＃?）對(duì)比2種方法：分析照薄層色譜法試驗(yàn)特點(diǎn)，對(duì)新擬方法制備和按藥典方法制備的對(duì)照品溶液和供試品溶液各吸取2μL，于同一硅膠G薄層板上放置，展開(kāi)，完成顯色處理。

1.2.2 黃芪藥材 （1）藥典方法：取2 g黃芪粉末，在30m L乙醇中加入，加熱回流30m in，蒸干濾液，取0.3%氫氧化鈉溶液15m L在殘?jiān)屑尤氪偈谷芙猓瓿蔀V過(guò)處理，用稀鹽酸對(duì)濾液進(jìn)行調(diào)節(jié)，使pH值達(dá)5～6，振搖提取，對(duì)乙酸乙酯液分取，濾液蒸干。取乙酸乙酯1m L對(duì)殘?jiān)芙猓l(fā)揮供試品溶液作用。取黃芪對(duì)照藥格，采用相同的方法做成對(duì)照藥材溶液。應(yīng)用照譜層色普法開(kāi)展相關(guān)試驗(yàn)，上述2種溶液各吸取10μL，于同一硅膠G薄層板上放置，展開(kāi)，晾干，檢視。（2）新擬方法：取氨試液，調(diào)節(jié)pH至5～6，振搖提取，蒸干，取乙醇乙酯1m L加入殘?jiān)芙猓鞴┰嚻啡芤骸＃?）方法對(duì)比：相較照薄層色譜法試驗(yàn)，對(duì)2種方法所獲試液可吸取10μL，于同一硅膠G薄層板上放置，展開(kāi)，顯色。

2 結(jié)果

采用新擬薄層方法對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行鑒別，鑒別有效率為98%，應(yīng)用藥典方法提取供試品溶液最為簡(jiǎn)便，薄層分離有效率為96%。居較高水平，所獲取的黃芪甲苷斑點(diǎn)較為清晰和明顯。

3 討論

黃芪對(duì)T細(xì)胞功能、淋巴細(xì)胞增殖有較大影響，研究顯示，黃芪對(duì)免疫功能有促進(jìn)作用，且從黃芪中提取的成分，經(jīng)篩選，部分促進(jìn)免疫作用明顯，其中作用最強(qiáng)的為F 3，應(yīng)用后機(jī)體可完全免疫，而取白芥素-2、干擾素等應(yīng)用，僅部分免疫恢復(fù)，F(xiàn) 2免疫抑制機(jī)能較強(qiáng)，可在腎、心移植中作用免疫抑制劑應(yīng)用，以對(duì)排斥反應(yīng)進(jìn)行對(duì)抗[3-4]。黃芪對(duì)正常機(jī)體抗體生長(zhǎng)促進(jìn)作用明顯，研究顯示，取黃芪100%水煎劑應(yīng)用，可使免疫早期的抗原與細(xì)胞結(jié)合，包括T淋巴細(xì)胞和抗體分泌細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞明顯增多，故對(duì)鑒別黃芪有較高的要求，以為臨床用藥提供準(zhǔn)確的參考依據(jù)[5]。

鑒別黃芪，從1990年版至后完善的2005年版，《中國(guó)藥典》均對(duì)薄層色譜鑒別方法有所收集，以黃芪甲苷作對(duì)照品，黃芪薄層鑒別方法無(wú)明顯差異，在含黃芪的中成藥中，多引用《中國(guó)藥典》的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在藥品檢驗(yàn)中，依據(jù)藥典方漢對(duì)黃芪和黃芪成分的中成藥行多次檢驗(yàn)，藥點(diǎn)收截的鑒別黃芪薄層色譜的方法，提出供試品溶液的措施較繁瑣，特別是柱層析分離時(shí)比較浪費(fèi)時(shí)間。依據(jù)黃芪化學(xué)成分，查找相關(guān)文獻(xiàn)，反復(fù)試驗(yàn)，對(duì)黃芪薄層對(duì)供試品溶液進(jìn)行鑒別的方法進(jìn)行模索，相較藥典方法，操作較為簡(jiǎn)單，黃芪甲苷有明顯斑點(diǎn)，具理想的分離效果[6]。

黃芪以皂苷、多糖、黃酮為主要成分。黃酮和皂苷均于正丁醇中溶解，故可直接用正丁醇提取，黃酮類(lèi)成分用氨試液洗滌去除，多糖類(lèi)成分用水洗滌移除，黃芪總皂苷粗口即可抽出，用用薄層色譜法完成下一步分離操作，供試品色譜中，可明顯顯現(xiàn)黃芪甲苷斑點(diǎn)[7-8]。

2005年版《中國(guó)藥典》黃芪項(xiàng)下，黃芪對(duì)照藥材實(shí)施薄層鑒別的措施有增加，實(shí)際為對(duì)黃芪中含有黃酮類(lèi)成分的鑒別，用新擬方法對(duì)供試品溶液進(jìn)行提取，使操作過(guò)程簡(jiǎn)化，方漢較簡(jiǎn)單，可獲得可靠的檢測(cè)結(jié)果。

綜上，黃芪薄層色譜鑒別采用新擬方法，相較藥典，提取供試品溶液快速、簡(jiǎn)便，可獲得可靠、準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果，具較高的應(yīng)用價(jià)值。

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