3種常用嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)淋巴囊解剖定位差異

丁大雄，楊風(fēng)波，呂 萍，張 悅，王曉東，劉 晨，黃國(guó)威，楊仕明，于 寧川北醫(yī)學(xué)院，四川南充 637000；解放軍總醫(yī)院，北京 00853

3種常用嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)淋巴囊解剖定位差異

丁大雄1,2，楊風(fēng)波1,2，呂 萍1，張 悅2，王曉東2，劉 晨2，黃國(guó)威1,2，楊仕明2，于 寧2
1川北醫(yī)學(xué)院，四川南充 637000；2解放軍總醫(yī)院，北京 100853

目的探究耳科常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)淋巴囊解剖位置及其異同，為臨床內(nèi)淋巴囊疾病發(fā)生發(fā)展機(jī)制研究提供解剖學(xué)依據(jù)。方法選取成年豚鼠、SD大鼠及KM小鼠，處死后取雙側(cè)顳骨和枕骨，明確內(nèi)淋巴囊的位置及毗鄰關(guān)系，然后將枕骨與顳骨分離，標(biāo)定前庭導(dǎo)水管外口；解剖結(jié)果通過(guò)組織切片得以驗(yàn)證。結(jié)果3種常用嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)淋巴囊均在內(nèi)聽道后下方，在后半規(guī)管下方的骨蓋外側(cè)，其骨蓋各不相同。豚鼠骨蓋為一塊薄骨板，大鼠骨蓋為較長(zhǎng)骨棘，小鼠骨蓋為稍長(zhǎng)骨棘，骨蓋下都能見到前庭導(dǎo)水管外口；顳骨組織切片觀察結(jié)果證實(shí)解剖位置就是內(nèi)淋巴囊。結(jié)論3種常用嚙齒類動(dòng)物內(nèi)淋巴囊解剖位置大致相同，僅在解剖標(biāo)志或組織形態(tài)上略有不同。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；解剖學(xué)；耳蝸；內(nèi)淋巴囊

內(nèi)淋巴囊作為內(nèi)耳膜迷路的一部分，是維持聽力及平衡的重要器官[1]。在維持內(nèi)淋巴穩(wěn)態(tài)方面起著重要的作用[2-4]。此外還具有分泌和內(nèi)耳免疫等功能[5-6]。其功能發(fā)生紊亂能引起膜迷路積水，如梅尼埃病[7-10]。目前對(duì)于內(nèi)淋巴囊的具體功能仍不明確，需對(duì)其維持內(nèi)淋巴穩(wěn)態(tài)的作用進(jìn)行研究。有關(guān)內(nèi)淋巴囊的研究均采用嚙齒類動(dòng)物，在眾多有關(guān)內(nèi)淋巴囊的研究中，豚鼠和大鼠內(nèi)淋巴囊的解剖位置均有提及[11]，但豚鼠沒有在大體標(biāo)本上具體定位，小鼠內(nèi)淋巴囊解剖定位仍不清楚。內(nèi)淋巴囊的解剖定位是內(nèi)淋巴囊手術(shù)，如內(nèi)淋巴囊減壓術(shù)、內(nèi)淋巴囊引流術(shù)[12]、內(nèi)淋巴腫瘤切除術(shù)[13]等的重要基礎(chǔ)。本文針對(duì)這一問題觀察3種常用嚙齒類動(dòng)物內(nèi)淋巴囊解剖，為今后內(nèi)淋巴囊研究提供解剖學(xué)基礎(chǔ)。

材料和方法

1 材料 2月齡昆明小鼠，體質(zhì)量(35±5) g，雌雄各3只；3月齡SD大鼠，體質(zhì)量(300±25) g，雌雄各3只；成年健康純白紅目豚鼠(耳郭反射靈敏)，體質(zhì)量(300±25) g，雌雄各3只。所有動(dòng)物均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司提供；動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001。

2 解剖定位 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用水合氯醛麻醉，斷頭處死后沿矢狀線剪開，去除腦組織，連同枕骨將雙側(cè)顳骨分離并浸泡在0.01 mol/L的磷酸鹽緩沖液中，在體視顯微鏡下觀察3種嚙齒類動(dòng)物的顱內(nèi)面解剖結(jié)構(gòu)、內(nèi)淋巴囊位置以及其與周圍的毗鄰關(guān)系，并比較3種動(dòng)物內(nèi)淋巴囊位置的異同。然后將顳骨游離，在體視顯微鏡下觀察內(nèi)淋巴囊出口(前庭導(dǎo)水管外口)位置，并比較異同。

3 內(nèi)淋巴囊HE染色 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物水合氯醛麻醉，經(jīng)心臟4%多聚甲醛灌流10 ～ 15 min，斷頭處死后沿矢狀線剪開，去除腦組織，將雙側(cè)顳骨連同枕骨分離并4%多聚甲醛4℃過(guò)夜，10% EDTA脫鈣(小鼠3 ～ 5 d，大鼠、豚鼠12 ～ 15 d)，50%、75%、80%、95%、100%梯度乙醇分別脫水2 h，二甲苯透明2 h，浸蠟3 h包埋。顳骨標(biāo)本切片方向平行顱頂；切片厚度：4 μm。連續(xù)切片，光鏡下選取內(nèi)淋巴囊層面部分切片行HE染色。

結(jié) 果

1 豚鼠內(nèi)淋巴囊位置及HE染色 內(nèi)淋巴囊位于內(nèi)耳門稍后下方，小腦旁絨球窩后下方，窩水管后上方約2 mm處[14]，遠(yuǎn)端跨過(guò)乙狀竇達(dá)枕骨，其內(nèi)側(cè)為骨蓋，骨蓋處為內(nèi)淋巴囊的中部[15](圖1A)。從游離顳骨看上述內(nèi)淋巴囊解剖位置即為前庭導(dǎo)水管外口，且外口呈扁狀，骨蓋為一薄骨板(圖1D)。形態(tài)學(xué)可見顳骨的后內(nèi)側(cè)一囊狀結(jié)構(gòu)，近端走行于前庭導(dǎo)水管內(nèi)，遠(yuǎn)端為盲端止于枕骨上，其內(nèi)外兩側(cè)均被腦膜包繞，內(nèi)側(cè)面與大腦毗鄰，外側(cè)與乙狀竇毗鄰。在囊腔可見上皮褶皺突向囊腔(圖2A)。

2 大鼠內(nèi)淋巴囊位置及HE染色 大鼠內(nèi)淋巴囊的解剖位置：內(nèi)淋巴囊位于內(nèi)耳門的稍后下方、小腦絨球窩的后下方及后半規(guī)管下方的骨性突起外側(cè)[11](圖1B)。從游離顳骨看上述內(nèi)淋巴囊解剖位置即為前庭導(dǎo)水管外口，且外口呈類圓形，骨蓋為一較長(zhǎng)的骨棘，骨棘少上方為前庭導(dǎo)水管外口(圖1E)。形態(tài)學(xué)可見顳骨的后內(nèi)側(cè)一囊狀結(jié)構(gòu)，近端走行于前庭導(dǎo)水管內(nèi)，遠(yuǎn)端為盲端止于枕骨上，其內(nèi)外兩側(cè)均被腦膜包繞，前稍外側(cè)與后半規(guī)管毗鄰，內(nèi)側(cè)面與大腦毗鄰，外側(cè)與乙狀竇毗鄰。在囊腔未見上皮褶皺突向囊腔，囊腔可見淡染的內(nèi)淋巴液(圖2B)。

3 小鼠內(nèi)淋巴囊位置及HE染色 位于內(nèi)耳門后下方、小腦絨球窩的后下方及后半規(guī)管下方的骨性突起外側(cè)(圖1C)。從游離顳骨看上述內(nèi)淋巴囊解剖位置即為前庭導(dǎo)水管外口，且外口亦呈類圓形，骨蓋為一稍長(zhǎng)的骨棘，骨棘根部為前庭導(dǎo)水管外口(圖1F)。形態(tài)學(xué)可見顳骨的后內(nèi)側(cè)一囊狀結(jié)構(gòu)，近端走行于前庭導(dǎo)水管內(nèi)，遠(yuǎn)端為盲端止于枕骨上，其內(nèi)外兩側(cè)均被腦膜包繞，前稍外側(cè)與后半規(guī)管毗鄰，內(nèi)側(cè)面與大腦毗鄰，外側(cè)與乙狀竇毗鄰。在囊腔偶見上皮褶皺突向囊腔(圖2C)。

討 論

組織形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)顯示3種嚙齒動(dòng)物內(nèi)淋巴囊的解剖定位是準(zhǔn)確的，證明經(jīng)顱內(nèi)定位內(nèi)淋巴囊的解剖位置是可行的，能夠通過(guò)顱內(nèi)側(cè)面的解剖標(biāo)志-內(nèi)聽道、小腦絨球窩、半規(guī)管以及窩水管等解剖結(jié)構(gòu)來(lái)定位內(nèi)淋巴囊[11,15]。本研究結(jié)果表明此方法能準(zhǔn)確找到內(nèi)淋巴囊，初學(xué)者容易掌握。劉愛國(guó)等[14]在研究豚鼠顳骨顯微解剖時(shí)從外側(cè)定位內(nèi)淋巴囊的位置，但這種方法相對(duì)煩瑣，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較高，但為體內(nèi)淋巴囊研究提供了解剖基礎(chǔ)。黃孝文等[11]通過(guò)內(nèi)聽道及半規(guī)管對(duì)內(nèi)淋巴囊定位，但其位置深在，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，解剖標(biāo)志少，不易準(zhǔn)確解剖定位。李鵬等[16]定位大鼠的內(nèi)淋巴囊于乙狀竇膝部前方的一骨性裂隙。文獻(xiàn)沒有提及小鼠內(nèi)淋巴囊的解剖定位，本文根據(jù)豚鼠和大鼠定位方法來(lái)定位，結(jié)果顯示，3種嚙齒類動(dòng)物在內(nèi)淋巴囊解剖位置上有明顯相同之處，尤其是大鼠和小鼠的內(nèi)淋巴囊位置在解剖結(jié)構(gòu)上更相近。但也稍有不同，豚鼠與大鼠、小鼠骨蓋和前庭導(dǎo)水管外口存在著明顯的差異，豚鼠骨蓋為一薄骨板，大鼠、小鼠則為一骨棘；豚鼠前庭導(dǎo)水管外口為扁狀，大鼠、小鼠均為類圓形。而大鼠、小鼠也存在差異，大鼠骨蓋較長(zhǎng)，前庭導(dǎo)水管外口位于骨蓋根部稍上方；小鼠骨蓋較短，前庭導(dǎo)水管外口位于骨蓋根部。但總體上3種嚙齒類動(dòng)物內(nèi)淋巴囊的解剖位置相近。從組織學(xué)可以看出，內(nèi)淋巴囊位于顳骨的后內(nèi)側(cè)為一囊狀結(jié)構(gòu)，近端走行于前庭導(dǎo)水管內(nèi)，遠(yuǎn)端為盲端止于枕骨上，其內(nèi)外兩側(cè)均被腦膜包繞，前稍外側(cè)與后半規(guī)管毗鄰，內(nèi)側(cè)面與大腦毗鄰，外側(cè)與乙狀竇毗鄰，這和前人研究相似[3,17-18]。結(jié)合以往研究，我們推測(cè)3種嚙齒類動(dòng)物內(nèi)淋巴囊解剖位置與人類[19-21]內(nèi)淋巴囊解剖位置相似。值得注意的是3種嚙齒類動(dòng)物內(nèi)淋巴囊遠(yuǎn)端都是跨過(guò)乙狀竇到達(dá)枕骨并被腦膜包繞，所以在內(nèi)淋巴囊取材時(shí)一定要保留雙側(cè)枕骨并黏附在骨面上腦膜才不會(huì)造成內(nèi)淋巴囊組織的破壞。

圖 1 3種嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)淋巴囊解剖圖 A、D： 豚鼠； B、E： 大鼠； C、F： 小鼠A、B、C： 白色圈為內(nèi)淋巴囊的解剖位置，白色星號(hào)為骨蓋，黑色圈為內(nèi)聽道，白色箭頭為小腦旁絨球窩，黑色箭頭為后半規(guī)管；D、E、F： 黑色箭頭為骨蓋，白色箭頭為前庭導(dǎo)水管外口Fig. 1 Photograph of ES of three laboratory rodents A, D：Photograph of guinea pig; B, E：Photograph of rat；C, F：Photograph of mice； A, B, C： white circles indicate the location of ES, white stars indicate spinous bone, black circles indicate internal auditory canal, white arrows indicate fossal arcuata, black arrows indicate posterior semicircular canal; D, E, F: black arrows indicate spinous bone, white arrows indicate vestibular aqueduct external orifice

圖 2 3種嚙齒類動(dòng)物內(nèi)淋巴囊組織切片A、 B、 C分別為豚鼠(×40)、 大鼠(×200)、 小鼠(×200)；箭頭為后半規(guī)管；三角形為乙狀竇；五星為顱腔；虛線框?yàn)閮?nèi)淋巴囊Fig. 2 Photomicrograph of ES tissue of three laboratory rodents by HE staining A: ES of guinea pig (×40); B: ES of rat (×200); C: ES of mice (×200); arrows indicate posterior semicircular canal; triangles indicate cerebral sigmoid sinus; stars indicate cranial cavity; dashed wireframe indicate ES

總之，雖然此3種嚙齒類動(dòng)物內(nèi)淋巴囊解剖位置存在一定的差異，但總體上相近，為今后不同動(dòng)物取材提供了參考，也為研究?jī)?nèi)淋巴囊在調(diào)控內(nèi)耳內(nèi)環(huán)境方面提供了解剖學(xué)基礎(chǔ)。

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Anatomical appearances of endolymphatic sac in three laboratory rodents

DING Daxiong1,2, YANG Fengbo1,2, LYU Ping1, ZHANG Yue2, WANG Xiaodong2, LIU Chen2, HUANG Guowei1,2, YANG Shiming2, YU Ning2
1North Sichuan Medical College, Nanchong 637000, Sichuan Province, China;2Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

YU Ning. Email: yuning12@sina.com; LYU Ping. Email: 1240646911@qq.com

ObjectiveTo explore the anatomical location of endolymphatic sac (ES) and its similarities and differences among common laboratory animals, in order to provide an anatomical basis for endolymphatic sac disease studies.MethodsAdult guinea pigs, SD rats and KM mice were selected. The bilateral temporal and occipital bone were removed, and ES location and its adjacent landmarks were identified. Then the occipital and temporal bone were separated and vestibular aqueduct external aperture was marked. Histological sections were utilized for verification of our works.ResultsAll endolymphatic sacs were located posteroinferior to the internal auditory canal and lateral to the bone cover beneath the posterior semicircular canal. Those bone covers showed different physical appearance in the three common laboratory rodents. The bone cover was a thin bone plate in guinea pigs, a long apophysis in SD rats, and a slightly longer apophysis in KM mice. Vestibular aqueduct external orifice could be seen under the bone cover clearly. It was verified with the histological section results.ConclusionThe anatomical location of ES is roughly the same among the three common rodent animals, only anatomical marks or histomorphology shows slight differences.

laboratory rodent; anatomy; cochlea; endolymphatic sac

R-332

A

2095-5227(2015)10-1039-04 DOI：10.3969/j.issn.2095-5227.2015.10.020

時(shí)間：2015-06-19 11:21

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20150619.1121.003.html

2015-05-18

國(guó)家973計(jì)劃重大科學(xué)研究計(jì)劃干細(xì)胞項(xiàng)目(2012CB967 900；2014CB943002)；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81470700；812410 34)；總后軍用標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目(BWS14B080)；總裝項(xiàng)目(JDZYY20132)；解放軍總醫(yī)院苗圃基金(12KMM07)；南充市研發(fā)資金項(xiàng)目(14A0084)；四川省衛(wèi)生廳課題(110298)

Supported by National “973” Program for Basic Research of China(2012 CB967900; 2014CB943002); the National Natural Science Foundation of China(81470700; 81241034)

丁大雄，男，在讀碩士。研究方向：內(nèi)淋巴囊的發(fā)育。Email: 283985796@qq.com；共同第一作者：楊風(fēng)波，男，在讀碩士。研究方向：聽覺機(jī)制研究。Email: 534200615@qq.com.

于寧，男，博士，副研究員，碩士生導(dǎo)師。Email: yuni ng12@sina.com；呂萍，女，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師。Email: 124 0646911@qq.com