不同產地的板藍根藥材的指紋特征研究

羅燕玉 黃曉丹 蘇金平 和海龍

不同產地的板藍根藥材的指紋特征研究

羅燕玉 黃曉丹 蘇金平 和海龍

目的分析板藍根藥材產地與指紋圖譜特征的關聯性。方法采用高效液相色譜法(HPLC), 使用Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm, 5μm)色譜柱, 用甲醇-水梯度洗脫, 流速為1ml/min, 檢測波長為224 nm, 柱溫25℃, 對板藍根藥材指紋特征進行研究。結果將板藍根藥材的產地按地理緯度分為3個緯度區(qū)間, 即：安徽、河南、甘肅3個省為第一緯度區(qū)間, 緯度為北緯33～37°；河北為第二緯度區(qū)間, 緯度為北緯39～41°；黑龍江和內蒙古兩省區(qū)為第三緯度區(qū)間, 緯度為北緯41～49°。各個區(qū)間產的板藍根藥材指紋特征相似。結論藥材產地的緯度位置是造成板藍根藥材指紋特征差異的主要原因之一。

板藍根藥材；指紋圖譜；產地

板藍根為十字花科植物菘藍(isatis indigotica fort)的干燥根, 始載于《神農本草經》, 是重要的傳統中藥材之一。板藍根具有清熱解毒、涼血利咽等功效, 臨床上常用于流行性腮腺炎、流行性乙型腦炎、流感等病毒性感染的防治, 近年來又發(fā)現板藍根具有抗血小板聚集、抗內毒素及增強機體免疫功能等作用[1-3]。

板藍根主要分布于河南、安徽、黑龍江等地[4], 化學成分較為復雜, 含有生物堿、芥子苷、黃酮等10余類成分, 不同產地的板藍根藥材整體質量差異大。為了探索不同產地的板藍根藥材存在的差異, 本實驗擬通過各藥材的指紋圖譜特征得出不同產地的板藍根內在質量的規(guī)律, 為板藍根藥材的質量控制提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀(安捷倫公司)；GT210-G電子天平(Sartorius)；HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司)。

1.2 材料 甲醇為色譜純, 正丁醇為分析純, 試驗用水為純化水。28批板藍根藥材(批號：0909001～0909028)經中國科學院華南植物園華南植物鑒定中心葉華谷研究員鑒定, 均為十字花科植物菘藍干燥的根部。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[5,6]色譜柱為Ultimate XB-C18分析柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；以甲醇為流動相A, 水為流動相B,梯度洗脫(0～19 min, A為19%, B為81%；28 min, A為29%, B為71%；45～55 min, A為38%, B為62%；72～75 min, A為70%, B為30%。)；流速為1 ml/min；檢測波長224 nm；柱溫25℃。

2.2 供試品溶液的制備[7]稱取板藍根藥材粉末(過3號篩)5.0 g, 加水100 ml加熱回流30 min, 抽濾, 濾液濃縮至約25 ml, 用水飽和正丁醇振搖提取3次(40、30、30 ml), 合并提取液, 用正丁醇飽和水50 ml振搖提取一次, 取正丁醇液,蒸干, 殘渣加甲醇使溶解, 轉移至5 ml容量瓶中, 加甲醇至刻度, 搖勻, 濾過, 取續(xù)濾液, 即得。

2.3 數據采集及初步評價 分別精密吸取批號為0909001～0909028 的板藍根藥材供試品溶液5 μl, 注入液相色譜儀, 測定, 記錄 75 min色譜圖, 建立指紋圖譜共有模式并計算其相似度。結果可得, 除 0909004批藥材的相似度較低外, 其余27 批藥材與共有模式的相似度均＞ 0.7。

2.4 不同產地藥材的指紋圖譜的特征分析 通過比較, 以上28批藥材的特征圖譜按照峰形可以分成3類：第一類圖譜是圖譜中各特征峰的峰高基本一致, 無特別突出的強峰, 河北安國產的板藍根具有這種特征；第二類圖譜是在約16.5 min時有一強特征峰, 其峰高明顯高于其他峰的峰高, 河南、安徽、甘肅三省區(qū)產的板藍根均具有這一特征；第三類圖譜是最強峰為23～25 min時出現的一組峰, 主要是黑龍江與內蒙古產的板藍根具有這類特征。

2.4.1 河北安國產板藍根的共有模式 從河北省安國市不同村共收集了7 批板藍根樣品, 其指紋圖譜特征基本一致,均無明顯的強吸收峰, 其指紋圖譜共有模式見圖1。

圖1 河北安國產板藍根的指紋圖譜共有模式

2.4.2 安徽-河南-甘肅產板藍根共有模式 從安徽阜陽收集3 批、亳州收集1批, 河南安陽和禹州各收集2 批, 甘肅隴西收集1批, 共9批板藍根樣品具有基本一致的指紋特征, 均在約16.5 min時有一相對較強的特征峰, 其指紋圖譜共有模式見圖2。

圖2 安徽-河南-甘肅產板藍根的指紋圖譜共有模

2.4.3 黑龍江-內蒙古產板藍根的共有模式 從黑龍江大慶收集10批、鶴崗收集1 批, 內蒙古赤峰收集1 批, 共12批板藍根樣品具有基本一致的指紋特征, 即在23～25 min時出現的一組強特征峰, 其指紋圖譜共有模式見圖3。

圖3 黑龍江-內蒙古產板藍根的指紋圖譜共有模式

結合不同產地板藍根藥材指紋圖譜共有模式的研究結果分析可知, 三個指紋圖譜共有模式代表的產地, 其地理緯度分布存在一定規(guī)律即：安徽、河南、甘肅3個省的產地為第一緯度區(qū)間, 為北緯33～37°；河北的產地為第二緯度區(qū)間,為北緯 39～41°；黑龍江和內蒙古兩省區(qū)的產地為第 三緯度區(qū)間, 為北緯 41～49°。由此可見, 以上三個指紋圖譜共有模式代表的產地與3個緯度分布區(qū)間完全吻合, 即緯度位置相同的產地, 其板藍根藥材的指紋圖譜特征基本相似, 隨著緯度的增加, 16.5 min 附近的強峰的逐漸減弱, 而23～25 min的一組峰則逐漸增強。以上結果表明, 藥材產地的緯度位置是造成藥材指紋特征差異的主要原因之一。

3 小結

3.1 本實驗采用的指紋圖譜分析方法, 經過大量的實驗摸索及方法驗證所得, 能有效的測定出板藍根藥材的各成分,共有22個特征色譜峰。

3.2 本實驗收集的28批樣品, 采自河南、安徽、河北、甘肅、黑龍江、內蒙古等6省區(qū), 區(qū)域分布比較均衡, 能體現不同產地的板藍根藥材指紋圖譜的特征, 具有較強的代表性。

[1]劉云海, 杜光, 韓洪剛, 等. 板藍根抗內毒素研究. 醫(yī)學導報, 2001, 20(9):547-548.

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[3]秦箐, 賀海平. 板藍根中高級不飽和脂肪酸的分離鑒定及其免疫活性的研究. 中國現代醫(yī)學雜志, 2001, 11(1):105-106.

[4]劉盛, 謝華, 喬傳卓. 板藍根藥材道地性初步研究總結. 中藥材, 2001, 24(5):319-321.

[5]孟巖, 范麗芳, 張?zhí)m桐. 河北道地藥材板藍根HPLC指紋圖譜研究. 河北醫(yī)藥, 2012, 34(11):1720-1723.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.18.215

2015-06-03]

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黃曉丹