戒斷對嗎啡成癮大鼠活動性的影響研究

崔躍 李欣欣 崔皓哲 徐暢

戒斷對嗎啡成癮大鼠活動性的影響研究

崔躍 李欣欣 崔皓哲 徐暢

目的觀察戒斷對嗎啡成癮大鼠活動性的影響。方法20只大鼠隨機分為對照組和嗎啡組, 每組10只。用條件性位置偏愛實驗(CPP)檢測大鼠成癮及活動性的變化。結果經皮下注射嗎啡7 d 建立大鼠CPP模型, 與對照組比較, 嗎啡組在伴藥箱停留時間增加, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。自然戒斷7 d 后, 與對照組比較, 嗎啡組穿梭次數明顯增加, 差異具有統計學意義 (P＜0.05)。結論嗎啡誘導大鼠CPP模型建立成功, 自然戒斷7 d后活動性增強, 提示嗎啡及其運動效應之間的關系, 可能是大鼠覓藥行為的具體表現之一。

嗎啡；條件性位置偏愛；活動性

藥物成癮是一種慢性復發性腦疾病, 有其復雜的神經生物學基礎[1]。成癮物質的反復使用, 可以增強模型動物的運動敏感化, 這是成癮物質的共有特征之一[2,3]。動機敏化理論認為反復使用致成癮物質, 將使與成癮動機有關的神經環路出現敏化, 進而表現出對成癮藥物的持續渴求, 成癮藥物導致的行為敏化被認為是成癮后復吸的重要原因之一[3,4]。本研究利用條件性位置偏愛實驗檢測嗎啡自然戒斷對大鼠運動活性的影響?，F報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性SD大鼠20只(由沈陽醫學院實驗動物中心提供), 平均體重(225±25)g；鹽酸嗎啡(青島制藥廠有限公司, 中國)。

1.2 方法

1.2.1 分組 大鼠隨機化分為對照組和實驗組, 每組10只,分籠飼養, 自由進食飲水。

1.2.2 主要儀器設備 條件性位置偏愛箱(CPP箱)：CPP箱由兩個規格相同(長53 cm, 寬30 cm, 高30 cm)的隔音箱組成。中間有擋板, 可以抽拉。擋板底端有小門, 動物可自由穿梭, 測試時用。另有一套無小門擋板, 實驗訓練用。其中一個箱子為黑色, 地板為網格狀, 另一個箱子為白色,地板為條紋狀。箱體的上方有攝像頭, 可以記錄動物活動情況。

1.2.3 CPP模型制備及戒斷后運動活性檢測 CPP模型制備分3個階段[5,6]。預測試階段：建立模型之前, 連續3 d ,每天8:00, 讓大鼠自由穿梭于兩個箱體15 min(900 s), 第3天記錄大鼠在兩個箱體停留的時間, 確定其天然偏好。以大鼠非天然偏好箱為伴藥箱, 天然偏好箱為非伴藥箱。訓練階段：用替代擋板封閉兩箱通道, 嗎啡組動物8:00皮下注射嗎啡(10 mg/kg), 隨即放入伴藥箱30 min；16:00皮下注射等量的生理鹽水, 隨即放非伴藥箱30 min,1次/d。對照組除將嗎啡替換為生理鹽水之外, 其他訓練相同。連續訓練6 d 。測試階段：第7天進行訓練后測試, 將有小門的擋板置于兩箱之間,未做任何處理的大鼠放入箱內, 讓其自由活動15 min(900 s),記錄其在右箱(伴藥箱)停留時間和穿梭次數。位置偏愛指標：右箱(伴藥箱)停留時間(Time spent in the white chamber, TW)；運動活性檢測指標：大鼠停藥后戒斷1周(第14天)進行運動活性檢測。檢測指標為穿梭次數(Shuttle times, ST),大鼠從一側箱子移動到另一側箱子則判定穿梭1次, 累計得到穿梭次數。

1.3 統計學方法 采用SPSS16.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示, 對方差齊性的指標用單因素方差分析, LSD-t檢驗進行均數間的多重比較；對方差不齊的指標采用Kruskal-Wallis非參數檢驗, Mann-Whitney U法進行兩兩比較的秩和檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

經過CPP訓練, 第7天測試, 嗎啡組大鼠在伴藥箱停留時間明顯高于對照組, 差異具有統計學意義(P＜0.05), 提示嗎啡誘導的大鼠CPP模型建立成功。大鼠停藥后戒斷1周(第14天)進行運動活性檢測, 與戒斷前的活動性比較, 明顯增強, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組大鼠嗎啡成癮及戒斷后條件性位置偏愛和運動活性情況比較(±s)

表1 兩組大鼠嗎啡成癮及戒斷后條件性位置偏愛和運動活性情況比較(±s)

注：與對照組比較,aP＜0.05；與第1天比較,bP＜0.05

時間 對照組 時間 嗎啡組右箱停留時間(s) 穿梭次數(次) 右箱停留時間(s) 穿梭次數(次)第1天 146.776±30.85 22.7±5.85 第1天 152.004±26.07 26.3±6.85第7天 139.950±18.18 16.6±6.95 第7天 396.330±67.03a 22.1±12.75第14天 143.824±22.62 18.4±4.35 第14天 192.327±87.85 39.3±6.80bF 0.196 2.905 χ2 19.667 12.896 P 0.823 0.072 P 0.000 0.000

3 . 小結

條件性位置偏愛實驗是用于評價藥物成癮性的經典實驗模型[7], 廣泛用于評價藥物的精神依賴情況。該實驗的基本原理是將實驗動物置于條件性位置偏愛箱的白箱, 并給予精神依賴性藥物, 經過幾次訓練后, 觀察實驗動物在條件性位置偏愛箱的活動情況。實驗觀察指標有位置偏愛指標, 即伴藥箱停留時間；運動活性指標, 即穿梭次數, 其檢測結果與藥物的精神依賴性相關。

本研究檢測了嗎啡成癮及戒斷后大鼠條件性位置偏愛和運動活性情況, 結果顯示經訓練后, 成癮大鼠在伴藥箱停留時間明顯增加。自然戒斷后1周, 其運動活性明顯增強。成癮敏感化理論認為, 成癮物質可以誘發運動敏感化, 從而引起強迫性覓藥行為, 進而產生復吸行為[2,3]。實驗結果提示了嗎啡及其運動效應之間的關系, 如果能深入研究其內在機制, 將對研究成癮后復吸提供有益的線索。

[1]Merighi S, Gessi S, Varani K, et al. Morphine mediates a proinflammatory phenotype via μ-opioid receptor-PKCε-Akt-ERK1/2 signaling pathway in activated microglial cells. Biochem Pharmacol,2013,86(4):487-496.

[2]Robinson TE, Berridge KC. The neural basis of drug craving: an incentive-sensitization theory of addiction. Brain Res Brain Res Rev,1993,18(3):247-291.

[3]Robinson TE, Berridge KC. Addiction. Annu Rev Psychol,2003(54):25-53.

[4]Vezina P. Sensitization of midbrain dopamine neuron reactivity and the self-administration of psychomotor stimulant drugs. Neurosci Biobehav Rev,2004,27(8):827-839.

[5]Niwa M, Nitta A, Mizoguchi H, et al. A novel molecule ?shati? is involved in methamphetamine-induced hyperlocomotion, sensitization, and conditioned place preference. J Neurosci,2007,27(28):7604-7615.

[6]邵曉霞, 李潔, 何繁漪, 等. 嗎啡誘導條件位置性偏愛大鼠海馬CA1區NR2A、NR2B的變化. 昆明醫科大學學報,2013,34(6):17-20.

[7]張開鎬. 評價藥物精神依賴性的試驗方法(二). 中國藥物依賴性雜志,2000,9(3):172-173.

Influence research of abstinence on mobility in rats with morphine addiction

CUI Yue, LI Xin-xin, CUI Hao-zhe, et al. School of Basic Medicine of Shenyang Medical College, Shenyang110034, China

ObjectiveTo observe influence of abstinence on mobility in rats with morphine addiction.MethodsA total of20 rats were randomly divided into control group and morphine group, with10 cases in each group. Conditioned place preference (CPP) was applied to detect changes of addiction and mobility of rats.ResultsRats CPP model was established by subcutaneous injection of morphine for7 d. Compared with the control group, the morphine group had increased residence time. Their difference had statistical significance (P＜0.05). After7 d of natural abstinence, the morphine group had obviously more shuttle times than the control group. Their difference had statistical significance (P＜0.05).ConclusionAfter successful CPP model establishment of morphine addiction rats and7 d of natural abstinence, increased mobility indicates that the correlation between morphine and motion effect can be one of the specific manifestations of drug-seeking behavior.

Morphine; Conditioned place preference; Mobility

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.16.190

2015-03-30]

國家自然科學基金資助(項目編號：81441110)；遼寧省教育廳科學研究一般項目(項目編號：L2014405)；沈陽醫學院博士科研啟動基金(項目編號：20133049)

110034 沈陽醫學院基礎醫學院