RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在非小細胞肺癌者組織和外周血中的表達及相關性研究

郭建波 高鵬 白自剛

RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在非小細胞肺癌者組織和外周血中的表達及相關性研究

郭建波 高鵬 白自剛

目的研究非小細胞肺癌(NSCLC)患者組織、外周血和正常肺組織中核糖核苷酸還原酶M1肽(RRM1)和Ⅲ型β微管蛋白(β-tubulinⅢ)mRNA的表達差異及其相關性。方法收集42例NSCLC患者手術切除腫瘤組織及10例良性肺病患者組織, 同時術前留取外周血4 ml, 應用實時熒光定量PCR方法檢測RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在不同來源標本中的表達水平, 并分析其相關性。結果RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在腫瘤組織、外周血中的表達與在正常肺組織中的表達差異有統計學意義(P＜0.05),在外周血中的表達與在腫瘤組織中的表達不具有相關性。結論RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在肺癌組織和外周血中的檢測可以為晚期NSCLC個體化化療提供參考依據；應用實時熒光定量PCR在外周血中的檢測還不能替代肺癌組織標本的檢測。

非小細胞肺癌；核糖核苷酸還原酶M1肽；Ⅲ型β微管蛋白；外周血；腫瘤組織；實時熒光定量PCR

肺癌已成為人類發病率和死亡率最高的惡性腫瘤, 中晚期肺癌經驗性化療療效停滯于平臺期, 因此化療分子標志物的研究為NSCLC的個體化化療提供了方向。目前組織標本是獲取分子標志物的主要來源, 但是對于發病即為晚期, 標本往往難以取得。因此找到組織標本的替代者進行檢測成為研究熱點。核糖核苷酸還原酶是DNA合成通路中的限速酶, RRM1亞單位是核苷酸結合位點, 控制底物的特異性和整個酶的活性, 同時也是吉西他濱等核苷酸類似物的化療藥物結合位點[1]。Ⅲ型β微管蛋白是微管蛋白的一種, 表達與作用于微管類的藥物化療敏感性密切相關[2]。本研究通過實時定量PCR法檢測RRM1、β-tubulinⅢmRNA在NSCLC患者腫瘤組織和外周血中的表達情況, 明確能否用外周血中的表達水平來預測腫瘤組織中的表達, 為晚期NSCLC患者的個體化治療提供一種簡便的檢測方法。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2010～2014年胸外科行手術治療的臨床資料完整的NSCLC患者42例(分期為Ⅱ～Ⅲ期)及良性肺病患者10例為對照, 術前同時留取外周血4 ml。

1.2 檢測方法 應用ABI公司ABI7500型熒光PCR儀及TOYOBO公司試劑, 采用熒光實時定量PCR法檢測。

1.3 統計學方法 采用SPSS15.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示, 采用t檢驗；采用Pearson相關分析法分析同一患者肺癌組織及外周血基因表達水平相關性。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在不同來源標本中的表達水平 RRM1 mRNA在外周血中的表達與在肺癌組織中的表達差異無統計學意義(t=0.164, P=0.360＞0.05), 肺癌組織、外周血中的表達與在正常肺組織中的表達差異有統計學意義(t=2.316, P=0.022＜0.05；t=2.258, P=0.015＜0.05)。β-tubulinⅢ mRNA在外周血中的表達與在肺癌組織中的表達差異無統計學意義(t=0.081, P=0.429＞0.05), 肺癌組織、外周血中的表達與在正常肺組織中的表達差異有統計學意義(t=3.252, P=0.009＜0.05；t=3.463, P=0.003＜0.05)。見表1。

表1 RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在不同來源標本中的表達水平比較(±s)

表1 RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在不同來源標本中的表達水平比較(±s)

注：與肺癌組織比較,aP＞0.05；與正常肺組織比較,bP＜0.05

標本來源 例數 RRM1 mRNA表達水平 β-tubulinⅢ mRNA表達水平肺癌組織 42 31.76±0.62b 4.31±2.26b外周血 42 32.03±0.49ab 5.17±1.12ab正常肺組織 10 15.62±0.34 2.65±3.21

2.2 RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在外周血與肺癌組織中表達的相關性 運用Pearson等級相關分析提示, 同一患者, 外周血RRM1 mRNA表達水平與肺癌組織的表達無明顯相關性(r=0.252, P=0.234＞0.05)；β-tubulinⅢ mRNA在肺癌組織與外周血中的表達無明顯相關性(r=0.161, P=0.197＞0.05)。

3 討論

肺癌已成為我國惡性腫瘤首位死亡原因。非小細胞肺癌約占肺癌的80%, 多數患者發現時即為晚期, 已失去手術機會, 需采取以化療為主的綜合治療。部分患者盡管組織類型、臨床分期相同、采用同樣治療方法, 卻出現不同的結果。因此對不同分子標志物的檢測作為有針對性的個體化治療的基礎成為研究熱點。

RRM1是核苷酸結合位點之一, 它與RRM2共同構成核糖核苷酸還原酶, 該酶是DNA合成的限速酶, 也是吉西他濱的分子靶點。因此檢測RRM1的表達有助于指導化療。本實驗采用實時定量PCR方法檢測不同組織中RRM1 mRNA的表達, 結果顯示, RRM1 mRNA在肺癌組織的表達與正常肺組織中的表達差異有統計學意義(P＜0.05), 提示RRM1 mRNA在肺癌組織檢測可以作為肺癌化療的分子標志物, 這與Bepler等[3]的研究結果相近。

微管蛋白在細胞分裂過程中發揮著重要作用。Ⅲ型β-tubulin是微管蛋白的重要組成部分, 其糖基化和磷酸化可形成抗藥表型并破壞細胞骨架, 使細胞在低氧水平和微營養素的環境中仍能存活[4]。研究發現, β-tubulinⅢ與NSCLC抗微管類化療藥物療效相關, 亦與肺癌進展有關。本實驗顯示, β-tubulinⅢ mRNA在肺癌組織中表達高于正常肺組織, 提示β-tubulinⅢ可能在肺癌細胞的發生、發展過程中起到了促進作用。

目前肺癌分子標志物的檢測都采用肺癌組織作為檢測樣本, 而晚期肺癌難以取得或沒有足量組織用于檢測。因此本研究希望通過實時定量PCR方法檢測RRM1、β-tubulinⅢmRNA在肺癌組織與外周血中表達的相關性, 用外周血的檢測替代病理組織標本, 為臨床治療提供簡單易行的途徑。本實驗顯示, RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在肺癌組織與外周血中的表達不具有相關性, 提示外周血的檢測還不能替代肺癌組織作為檢測標本, 下一步有待于尋求其他的檢測方法或者新的分子標志物做進一步研究。

[1] Jaffe ES, Harris NL, Stein H, et al. World health Organization classification of tumors pathology and genetics of tumors of haematopoietic and lymphoid tissue. Lyon: IARC Press,2001:119-230.

[2] Seve P, Isaac S, Tredan O, et al. Expression of classⅢβ-tubulin is predictive of patient outcome in patients with non small cell lung cancer receiving vinorelbine-based chemotherapy. Clin Cancer Res,2005,11(15):5481-5486.

[3] Bepler G, Sharma S, Cantor A, et al. RRM1 and PTEN as prognostic parameters for overall and disease-free survival in patients with non-small cell lung cancer. J Clin Oncol,2004,22(5):1878-1885.

[4] Cicchillitti L, Penci R, Di Michele M, et al. Proteomic characterization of eytoskeletal and mitochondrial class Ⅲ beta-tubulin. Mol Cancer Ther,2008,7(7):2070-2079.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.16.022

2015-04-24]

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