柳氮磺吡啶腸溶片耐酸力和溶出度檢測方法的建立與研究

孫寧云 常靚

柳氮磺吡啶腸溶片耐酸力和溶出度檢測方法的建立與研究

孫寧云 常靚

目的建立柳氮磺吡啶腸溶片耐酸力和溶出度檢測方法。方法溶出度試驗采用籃法,依次以0.1 mol/L HCl和pH 7.5磷酸鹽緩沖液作為溶出介質,轉速100 r/min。高效液相色譜法對耐酸力和溶出度進行檢測,采用Intersil ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,以水-異丙醇-乙腈-冰醋酸(22∶11∶7∶0.4)為流動相,柱溫40℃,流速為1.0 ml/min,檢測波長為254 nm。結果柳氮磺吡啶濃度在25～300 μg/ml范圍內線性良好(r=0.9999)；平均回收率(n=9)為100.1%,RSD為0.4%,溶液在24 h內穩定,濾膜對主藥沒有吸附。結論該耐酸力和溶出度檢測方法準確、重現性好、操作簡單,能夠有效控制產品的內在質量。

柳氮磺吡啶；耐酸力；溶出；高效液相色譜法

柳氮磺吡啶腸溶片(sulfasalazine enteric-coated tablet)臨床應用廣泛,可用于治療克隆病和潰瘍性結腸炎,目前也是類風濕關節炎(RA)的治療主要用藥[1］。

該品種收載于中國藥典2010版二部中[2］,溶出度的測定分為兩個部分∶①酸中釋放∶通過目測片子有無裂紋或崩解對耐酸力進行判斷；②pH=7.5磷酸鹽緩沖液中釋放∶采用紫外-可見分光光度法對溶出度進行測定。該方法對耐酸力的考察不能定量,且采用紫外方法進行檢測,專屬性不強、準確度不高。美國藥典35中[3］亦對該品種有收載,采用高效液相色譜(HPLC)法對溶出度進行測定,通過測定酸中釋放量來考察耐酸力,柳氮磺吡啶在酸中溶解度差,該方法不能準確檢測出酸中的藥物量。本研究建立了柳氮磺吡啶腸溶片的耐酸力檢查方法,并采用HPLC法對溶出度進行檢測,方法準確、專屬性強,為本品的質量控制及臨床的用藥安全提供保障。現報告如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200 高效液相色譜儀(安捷倫醫藥科技有限公司),Varian VK 7025溶出度測定儀,梅特勒 XS205型電子天平,梅特勒 AL104型電子天平。

1.2 試藥 柳氮磺吡啶腸溶片(上海福達制藥有限公司,批號∶22130908),柳氮磺吡啶原料藥(批號∶1056-13-21)。水為純化水,鹽酸、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀均為分析純,異丙醇、乙腈、冰醋酸均為色譜純。

2 溶出度測定方法的建立

2.1 耐酸力測定方法的選擇 美國藥典35中通過測定酸中的釋放量來考察柳氮磺吡啶腸溶片的耐酸力,規定限度≤10%。取限度水平(10%)的原料藥置于溶出杯,參照USP35中的酸中釋放條件(籃法,100 r/min,介質∶0.1 mol/L HCl900 ml),120 min后原料藥沒有溶解,取出釋放介質,經檢測含量為標識量的0.03%。結果表明,主藥在酸中溶解度差,通過直接測定的方法無法準確檢測出酸中釋放的藥物量。

因此,參考中國藥典2010版中拉唑類腸溶制劑的標準[4,5］,通過測定供試片中的主藥含量,來判斷耐酸力是否合格。

2.2 色譜條件 采用Intersil ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm,μm)色譜柱,以水-異丙醇-乙腈-冰醋酸(22∶11∶7∶0.4)為流動相,柱溫40℃,流速為1.0 ml/min,檢測波長為254 nm。

篩選了不同品牌的色譜柱,在30℃柱溫下,Nucleosil 100-5C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)、Zorbax SB-C18柱(250 mm× 4.6 mm,5 μm)和XBridge C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)出峰時間較早,均在3～4 min,Intersil ODS-3V柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)出峰時間較晚,約在14.4 min。最終選擇了Intersil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),出峰時間比較合適,在10.6 min。根據USP35中提供的方法,柳氮磺吡啶的出峰時間約為7.7 min,當柱溫升高至40℃時,出峰時間提前至8.8 min,因此,最終確定柱溫為40℃。

2.3 測定方法

2.3.1 耐酸力 采用中國藥典2010版二部附錄溶出度測定法中的籃法,以鹽酸溶液(9→1000)900 ml為溶出介質,轉速為100轉/min,經2 h后,取出供試片,用水迅速洗去表面酸液,用濾紙吸干,置于1000 ml量瓶中,加稀釋劑(pH 7.5的磷酸鹽緩沖液)溶解并稀釋至刻度,混勻,過濾,取續濾液作為耐酸力樣品溶液。

2.3.2 釋放度 采用中國藥典2010版二部附錄溶出度測定法中的籃法,以鹽酸溶液(9→1000)900 ml為溶出介質,轉速100轉/min,經2 h后,立即將轉籃提出液面,隨即將轉籃浸入磷酸鹽緩沖液(pH7.5)900 ml的釋放介質中,轉速不變,經1 h后,取溶液,過濾,取續濾液作為釋放度樣品溶液。另精密稱取柳氮磺吡啶對照品25 mg,置100 ml量瓶中,加0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液溶解并定容至刻度,作為對照品溶液。稀釋劑、空白輔料、對照品溶液和樣品溶液的色譜圖見圖1。

圖1 各溶液的HPLC色譜圖

2.4 線性關系考察 精密稱取柳氮磺吡啶對照品25 mg,置于50 ml量瓶中,加稀釋劑溶解并定容至刻度,搖勻,作為對照品儲備液。分別精密量取對照品儲備液適量,制成濃度分別為25、100、200、250和300 μg/ml的溶液。精密量取上述溶液10 μl,照“2.2項”下色譜條件注入液相色譜儀,記錄色譜圖。以柳氮磺吡啶濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標進行線性回歸,線性方程為Y=23.312X-37.543,r=0.9999。結果顯示,該方法在25～300 μg/ml的濃度范圍內線性關系良好。

2.5 準確度試驗 精密稱取柳氮磺吡啶對照品適量,按處方比例加入空白輔料,用稀釋劑溶解并制成濃度水平為測定濃度80%、100%和120%的溶液,每個水平平行制備3份,將上述溶液過濾,精密量取續濾液10 μl,照“2.2項”下色譜條件進行測定,計算回收率,結果見表1。結果顯示,該方法準確度符合要求。

表1 準確度試驗結果

2.6 精密度試驗 精密稱取柳氮磺吡啶對照品25 mg,置于100 ml量瓶中,按處方比例加入空白輔料,加稀釋劑溶解并定容至刻度,混勻,過濾,平行制備6份,精密量取續濾液10 μl,照“2.2項”下色譜條件進行測定,記錄色譜圖,計算平均含量為99.8%,RSD為0.6%。結果表明,該方法精密度良好。

2.7 溶液穩定性試驗 取對照品溶液及釋放度樣品溶液,分別置于室溫和4℃環境中,并在0、12、24 h進樣,照“2.2項”下色譜條件進行測定,考察溶液的穩定性。結果顯示,對照品溶液及樣品溶液在室溫和4℃環境下24 h內穩定。

2.8 濾膜吸附試驗 取對照品溶液和釋放度樣品溶液,用0.45 μm聚醚砜材質針式濾器分別濾去1、3、5、7 ml后收集續濾液,進樣。平行地將對照品溶液和釋放度樣品溶液離心后取上清液,進樣。將過濾后溶液的峰面積與離心后溶液的峰面積進行比較,濾膜無吸附現象。見表2。

2.9 溶出曲線的均一性 取本品6片,按2.3項下方法進行試驗,在磷酸鹽緩沖液(pH=7.5)釋放介質中,分別于5、10、 15、30、45、60、90 min取溶液進行測定,結果顯示,各時間點累積溶出量RSD均≤10%,樣品溶出曲線的均一性良好。見圖2。

圖2 柳氮磺吡啶腸溶片的溶出曲線(n=6)

2.10 樣品溶出度的測定 取本品3批,每批取6片,分別按2.3項下方法及原方法[2］測定溶出度,結果見表3。

表2 濾膜吸附試驗結果

表3 柳氮磺吡啶腸溶片溶出度的測定結果(n=6)

3 小結

3.1 對于腸溶制劑,美國藥典多采用酸中釋放度法來考察耐酸力,而中國藥典則多數采用測定供試片含量的方法。經測定,柳氮磺吡啶在酸中溶解度差,參照美國藥典35柳氮磺吡啶腸溶片的耐酸力檢測方法無法得出準確結果,因此,重新建立了柳氮磺吡啶腸溶片的耐酸力檢查方法,通過測量供試片的含量來進行判斷,所得結果更真實、可靠。

3.2 采用修訂后方法和原方法分別對3批樣品進行檢測,修訂后方法測得的釋放量普遍高于原方法測得的結果,可能是因為原方法采用紫外-可見分光光度法測定吸光度時,僅按柳氮磺吡啶的吸收系數為658來計算每片的釋放量,儀器之間可能存在誤差,僅將參照以固定值進行計算,所得結果欠準確。且采用HPLC法代替紫外-可見分光光度法對溶出樣品進行檢測,取樣后續濾液可直接進樣,不但避免了取樣后需要再稀釋的繁瑣操作,而且該方法準確性更高、專屬性更強。

[1]梁燕,王凌,王蕊,等.柳氮磺吡啶腸溶片人體生物等效性研究.藥學實踐雜志,2013,31(6):424-428.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部).北京∶中國醫藥科技出版社,2010: 529-530,1039.

[3]王紅梅,蔣當華,宋林.HPLC法測定人血漿中柳氮磺吡啶與磺胺吡啶濃度及其藥動學研究.中國抗生素雜志,2013,38(3):223-226.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).北京∶中國醫藥科技出版社,2010:282.

[5]《中國藥品標準》編輯部.國家食品藥品監督管理局國家藥品標準頒布件.中國藥品標準,2003(5):25-28.

Establishment and research of detection methods for acid tolerance and dissolution rate in sulfasalazine enteric-coated tablet

SUN Ning-yun,CHANG Liang.Institute of Materia Medica,Shanghai Xinyi Sine Pharmaceutical Co.,Ltd,Shanghai 201206,China

ObjectiveTo establish detection methods for acid tolerance and dissolution rate in sulfasalazine enteric-coated tablet.MethodsBasket method was applied in detection of dissolution rate,with 0.1 mol/L HCl and pH 7.5 phosphate buffer solution as dissolution media,and revolving speed by 100 r/min.High performance liquid chromatography was used in detection of acid tolerance and dissolution rate.Intersil ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) was chromatographic column,and water-isopropanol-acetonitrile-glacial acetic acid (22∶11∶7∶0.4) was mobile phase,with column temperature as 40℃,flow velocity as 1.0 ml/ min,and detection wave length as 254 nm.ResultsSulfasalazine had good linear in 25～300 μg/ml (r=0.9999),with the average recovery rate (n=9) as 100.1% and RSD was 0.4%.The solution was stable within 24 h,and basic remedy was not absorbed by filter membrane.ConclusionThis is an accurate detection method for acid tolerance and dissolution rate,with good reproducibility and simple operation.It can effectively control inherent quality of product.

Sulfasalazine; Acid tolerance; Dissolution; High performance liquid chromatography

2015-04-08］

∶201206 上海信誼藥廠有限公司藥物研究所

∶孫寧云

DOI∶10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.17.204