RP-HPLC法測定消痤丸中隱丹參酮和丹參酮ⅡA的含量

張長坡 張延博

RP-HPLC法測定消痤丸中隱丹參酮和丹參酮ⅡA的含量

張長坡 張延博

目的建立高效液相色譜法(RP-HPLC)同時測定消痤丸中隱丹參酮和丹參酮ⅡA含量。方法采用Thermo BDS HYPESILC18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,以甲醇-水(78∶22)為流動相,流速為1.0 ml/min,檢測波長為270 nm,柱溫為20 ℃。結果隱丹參酮和丹參酮ⅡA進樣量分別在0.119～0.714、0.115～0.691 μg的范圍內與峰面積呈良好的線性關系,相關系數分別為0.9999和0.9998；平均回收率(n=6)分別為98.3%(RSD=1.5%),99.5%(RSD=0.86%)。結論本方法操作簡便可行,結果準確可靠。

復方制劑；消痤丸；隱丹參酮；丹參酮ⅡA；高效液相色譜法；含量測定

DOI∶10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.17.207

消痤丸是由丹參、紫草、重樓、牡蠣、川芎、黃精、茵陳、蒼耳子和野菊花加工而成的復方制劑,具有清熱祛濕、涼血解毒、活血祛瘀、軟堅散結之功效,臨床上用于治療痤瘡。丹參具有活血祛瘀、涼血消癰的功效[1］,是該制劑的主藥,為有效控制制劑質量,確保臨床療效,本研究建立了隱丹參酮、丹參酮ⅡA的測定方法,并對供試品溶液的制備方法和色譜條件進行了篩選、優化,該方法可有效排除干擾物質,靈敏度高,操作簡便,結果準確可靠。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀；Agilent DAD檢測器；Agilent Chemstation工作站(美國安捷倫科技公司)。

隱丹參酮(含量測定用,批號852-993)、丹參酮ⅡA(含量測定用,批號110766-200416)的對照品購自中國食品藥品檢定研究院；消痤丸(50 g/瓶,濟寧市中醫院提供)。甲醇(天津市科密歐化學試劑開發中心)為色譜純；其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 采用Thermo BDS HYPESIL C18(250 mm× 4.6 mm,5 μm)色譜柱,以甲醇-水(78±22)為流動相,流速為1.0 ml/min,檢測波長為270 nm,柱溫20℃,進樣體積20 μl[2］。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取樣品20粒,精密稱定重量,研細,取粉末約1.0 g,精密稱定,置磨口錐形瓶中,精密加入甲醇50 ml,密塞,稱定重量,加熱回流1 h,放冷后,密塞,稱定重量,用甲醇補足減損的重量,搖勻,濾過,取續濾液作為供試品溶液[3］。

2.2.2 隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對照品溶液 分別精密稱取經減壓干燥24 h的隱丹參酮對照品12.4 mg、丹參酮ⅡA對照品12.0 mg,置50 ml棕色量瓶中,加甲醇5 ml使溶解,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得對照品儲備液。精密吸取儲備液3 ml,置25 ml棕色量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對照品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液 按制劑的處方工藝,去除丹參藥材制成不含丹參的樣品,并按“2.2.2”項下方法操作,即得。2.3 專屬性考察 取隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液,按上述色譜條件進樣,記錄色譜圖。結果表明其他藥味對隱丹參酮和丹參酮ⅡA的含量測定無干擾。見圖1,圖2,圖3。

圖1 對照品

圖2 樣品

圖3 色譜圖

2.4 線性關系考察 精密吸取隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對照品溶液4.0、8.0、12.0、16.0、20.0、24.0 μl,分別按上述色譜條件進樣測定峰面積值。以進樣量(X)為橫坐標,峰面積值(Y)為縱坐標,繪制標準曲線并進行線性回歸,隱丹參酮、丹參酮ⅡA回歸方程分別為∶

線性范圍分別為0.119～0.714 μg和0.115～0.691 μg。

2.5 精密度試驗 精密吸取隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對照品溶液10 μl,連續進樣5次,測定隱丹參酮、丹參酮ⅡA的峰面積,其RSD分別為0.11%和0.06%,表明精密度符合要求。

2.6 穩定性考察 取供試品溶液,分別在0、2、4、6、8 h進樣測定峰面積,計算含量。結果在8 h內隱丹參酮、丹參酮ⅡA含量的RSD分別為1.1%和1.3%。表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.7 重復性試驗 取同一批樣品5份,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按“2.1”項色譜條件進樣測定含量。結果隱丹參酮、丹參酮ⅡA的平均含量(n=5)分別為0.0413%和0.0620%,RSD分別為0.79%和0.37%。表明方法重復性良好。

2.8 準確度考察 取已知含量的樣品6份,每份約0.5 g,精密稱定,置具塞三角瓶中,精密加入隱丹參酮(0.203 mg/ml)和丹參酮ⅡA(0.341 mg/ml)混合對照品溶液,按“2.2.2”項下方法制備供試溶液,按“2.1”項色譜條件進行測定,計算回收率。結果平均回收率(n=6)分別為98.3%和99.5%,RSD分別為1.5%和0.86%。

2.9 樣品測定 取不同批號的樣品約1.0 g,精密稱定,按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液,分別進行測定,采用外標一點法計算含量。結果表明不同批號樣品含量穩定。見表1。

表1 不同批號樣品隱丹參酮和丹參酮ⅡA含量測定結果(%)

3 小結

3.1 指標性成分的確定 丹參脂溶性成分是丹參主要有效成分之一,具有較強的生理活性。其中丹參酮ⅡA、隱丹參酮含量較高。故以隱丹參酮和丹參酮ⅡA為指標,控制消痤丸的質量。

3.2 檢測波長的選擇 按本文色譜條件,分別記錄隱丹參酮、丹參酮ⅡA色譜圖。通過3D色譜圖不同波長的比較,選擇270 nm為檢測波長。

現行質量標準僅有丹參酮ⅡA的鑒別,不能真實有效地控制消痤丸的質量,本文采用RP-HPLC法對消痤丸中隱丹參酮和丹參酮ⅡA的含量同時進行含量測定,結果表明該法簡便可行,重復性好,準確性高,可用于消痤丸的質量控制。

[1]周曉麗,劉春生,黃璐琦,等.傳統道地產區與非道地產區丹參有效成分含量比較.北京中醫藥大學學報,2001,34(3):193-194.

[2]楊樹聲,宋平順,趙建邦,等.高效液相色譜法測定丹參類藥材中四種脂溶性成分含量.蘭州大學學報(醫學版) ,2010,36(3):26.

[3]霍艷萍,張倩,吳翠.HPLC法同時測定益心舒片中丹參酮ⅡA的含量.醫學信息,2015(2):122.

2015-04-24］

∶272000 濟寧市中醫院(張長坡)；滕州市中心人民醫院藥學部(張延博)