結直腸癌組織E-cadherin表達及其與病理臨床特征關系

王軍 溫達雄 黃秀凡 黃慧敏 溫惠娟

結直腸癌組織E-cadherin表達及其與病理臨床特征關系

王軍 溫達雄 黃秀凡 黃慧敏 溫惠娟

目的探討結直腸癌患者E鈣粘蛋白(E-cadherin)的表達及其意義。方法免疫組化技術檢測130例結直腸癌患者癌組織及30例癌旁正常組織E-cadherin的表達情況, 觀察E-cadherin表達與患者病理臨床特征間的關系。結果癌組織中E-cadherin的表達明顯下降, 與癌旁正常組織比較,差異具有統計學意義(P＜0.01)；E-cadherin的低表達與發病部位、分化程度、淋巴結轉移有關；與性別、年齡、浸潤深度無關。結論E-cadherin蛋白低表達可能促進了結直腸癌的惡性進展及淋巴結的轉移, 觀察E-cadherin的表達情況, 有助于了解結直腸癌的惡性程度及判斷預后。

E鈣粘蛋白；結直腸癌；分化；轉移

結直腸癌(colorectal cancer, CRC)包括結腸癌和直腸癌,是發病率和致死率較高的惡性腫瘤之一,2014年美國癌癥協會(ACS)最新統計數據顯示, 在癌癥死亡中, 男性占8%, 女性占9%, 均排在第三位。2014年預計有160萬新增癌癥患者,結直腸癌位于所有人群惡性腫瘤發病率的第三位[1]。近期研究表明[2], 我國城鄉人群結直腸癌發病率均呈上升趨勢, 并預測我國結直腸癌新發病例仍將逐年增多。CRC的發生發展是一個多步驟、多環節、多基因參與的復雜過程, E-cadherin是一種鈣依賴性細胞粘附分子, 存在于正常上皮細胞中以維持組織結構的完整性, E-cadherin的下調與腫瘤的浸潤、轉移及預后密切相關。本文觀察E-cadherin在結直腸癌組織中的表達, 探討其在結直腸癌的發生、浸潤及轉移的機制, 發展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集河源市人民醫院2011年1月1日～2013年12月31日病歷資料完整的結直腸癌手術切除標本共130例, 取癌旁正常組織作為對照(30例), 標本均經病理檢查確診。所有患者術前均未接受任何治療。

1.2 實驗方法 所有標本常規取材, 經10%中性福爾馬林固定, 石蠟包埋,4 μm厚連續切片, 貼于用多聚賴氨酸處理的玻片上,60℃烘烤4 h備用。免疫組化標記采用S-P法, 常規石蠟切片脫蠟水化,3%過氧化氫溶液, 室溫下孵育10 min,以滅活內源性過氧化物酶, 高壓鍋內進行高溫抗原修復, 每張切片滴加抗E-cadherin(即用型)、Ki-67(即用型)抗體,4℃冰箱孵育過夜, PBS沖洗, 用PBS代替一抗做陰性對照, 滴加二抗, 室溫30 min, DBA顯色, 蘇木素復染, 常規脫水、透明、干燥、封片。E-cadherin鼠抗人單克隆抗體、Ki-67及其他免疫組化試劑均購自廣州安必平醫藥科技有限公司。

1.3 結果判讀 標本低倍鏡(×100)下選取具有代表性陽性染色視野, 每張切片選擇觀察5個高倍(×400)視野, 每視野100個細胞, 計數陽性細胞百分數及染色強度, 取平均值。E-cadherin染色結果采用半定量積分法, 陽性表達為細胞膜和(或)細胞漿呈棕黃色顆粒著色。陽性細胞數：0分(陽性率≤5%),1分(6%～25%),2分(26%～50%),3分(51%～75%),4分(＞75%)；染色強度依次為：0分(無色),1分(淡黃色),2分(棕黃色),3分(棕褐色)；兩者乘積, ≤3分為陰性(-),＞3分為陽性(+)。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對數據進行統計分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床病理特征 收集病歷資料完整的結直腸癌手術患者130例, 其中男79例, 女51例；男性最小年齡29歲, 最大年齡96歲, 平均年齡66.13歲；女性最小年齡27歲, 最大年齡88歲, 平均年齡64.63歲。發病部位及淋巴結轉移統計顯示：回盲部12例, 升結腸9例, 結腸肝曲2例, 橫結腸7例, 降結腸3例, 直乙交界5例, 乙狀結腸27例(以上各部位淋巴結轉移共12例), 直腸65例(淋巴結轉移16例)。總體轉移率為21.54%(28/130), 其中直腸癌轉移率占轉移總數的57.14%(16/28)。分化程度與淋巴結轉移關系顯示：高分化6例, 0例轉移；中分化88例,15例轉移, 轉移率為17.05%(15/88)；低分化36例,13例轉移, 轉移率為36.11%(13/36), 其中低分化以粘液腺癌為主要類型。

2.2 結直腸癌組織中E-cadherin的表達情況 結果顯示E-cadherin在癌旁正常組織中表達率為93.33%, 而在結直腸癌組織中表達為40.00%, 差異具有統計學意義(χ2=27.733, P＜0.01), 癌組織中E-cadherin的表達明顯下降。見表1。

2.3 結直腸癌組織中E-cadherin的表達與病理臨床特征關系 E-cadherin陽性蛋白表達率與患者的性別(χ2=0.264, P＞0.05)、年齡(χ2=1.901, P＞0.05)及腫瘤的浸潤深度(χ2=0.513, P＞0.05)無關；與腫瘤的部位(χ2=6.282, P＜0.01)、淋巴結轉移(χ2=8.024, P＜0.05)有關；高、中、低分化各組E-cadherin的表達總體比較, 差異無統計學意義(χ2=5.079, P＞0.05), 而高+中分化組及中分化組與低分化組E-cadherin的表達差異具有統計學意義(χ2=4.668, P＜0.05；χ2=4.949, P＜0.05)。見表2。

表1 結直腸癌組織中E-cadherin的表達情況(n, %)

表2 結直腸癌組織中E-cadherin的表達與病理臨床特征關系(n, %)

3 討論

E-cadherin是Takeichi最早發現的一種介導細胞間相互聚集的粘附分子, 定位于人染色體16q21.22, 由CDH1基因編碼的跨膜糖蛋白, 分子量124 kDa, 在細胞外Ca2+的參與下, E-cadherin通過胞質連環素與細胞骨架蛋白相連, 介導上皮細胞之間及細胞與細胞外基質的粘附[3], 維持上皮組織結構完整性和極性。研究表明, 多種上皮源性腫瘤組織中, E-cadherin表達明顯減少[4], 而且其表達下降與惡性腫瘤的分化、局部侵襲及淋巴結轉移有關[5]。表1結果顯示E-cadherin在正常結直腸組織中表達率為93.33%, 明顯高于結直腸癌中的表達率40.00%(P＜0.01), 結直腸癌組織中E-cadherin的表達較癌旁正常組織明顯下降, 與Karamitopoulou等[6]的研究結果一致。推測結直腸癌組織E-cadherin表達明顯減少可能與結直腸癌的發生發展密切相關。

臨床病理資料統計顯示, E-cadherin與患者性別、年齡、腫瘤浸潤深度無關, 而與發病部位有關(χ2=6.282, P＜0.01)。直腸占50%(65/130), 是結直腸癌發病的主要部位, 這與珠珠等[7]對昆明地區結直腸癌患者調查結果較一致。有關直腸發病部位E-cadherin低表達(29.23%)的機制有待進一步研究。

高、中、低分化各組E-cadherin的表達總體比較差異無統計學意義(χ2=5.079, P＞0.05), 而高+中分化組及中分化組與低分化組E-cadherin的表達差異均有統計學意義(P＜0.05), E-cadherin的表達與腫瘤的分化程度顯著相關。E-cadherin在結直腸癌的表達較正常組織明顯減少, 而且隨著腫瘤分化程度下降(惡性程度上升)、淋巴結轉移, 表達逐漸降低, 表明E-cadherin表達減少使同種細胞失去接觸抑制及相互粘連減弱, 浸潤和轉移能力上升, 導致腫瘤細胞的侵襲性生長與轉移, 促進了腫瘤的惡性進展。

在伴有淋巴結轉移的28例結直腸癌中E-cadherin明顯低表達, 其陽性表達率僅為21.43%, 統計結果顯示, 結直腸癌E-cadherin蛋白表達與淋巴結轉移呈顯著相關(χ2=8.024, P＜0.05)。提示E-cadherin的低表達與結直腸癌的淋巴轉移密切相關。其原因可能為癌細胞E-cadherin表達明顯減少,細胞間及細胞與基質間相互粘附能力減弱, 瘤細胞容易從原發灶脫落和游走, 進而引起腫瘤細胞淋巴結轉移。因此, 檢測E-cadherin蛋白表達可能為判斷結直腸癌是否發生淋巴結轉移及判斷預后提供參考指標。

綜上所述, E-cadherin蛋白低表達可能促進了結直腸癌的惡性進展及淋巴結的轉移, 觀察E-cadherin的表達情況,可有助于了解結直腸癌的惡性程度及判斷預后。

[1]Trabulo D, Ribeiro S, Martins C, et al. Metabolic syndrome and colorectal neoplasms: An ominous association. World J Gastroenterol,2015,21(17):5320-5327.

[2]代珍, 鄭榮壽, 鄒小農, 等. 中國結直腸癌發病趨勢分析和預測. 中華預防醫學雜志,2012,46(7):598-603.

[3]Tinkle CL, Lechler T, Pasolli HA, et al. Conditional targeting of E-cadherin in skin:insights into hyperproliferative and degenerative responses. Proc Nat1 Acad Sci USA,2004,101(2):552-557.

[4]Bezdekova M, Brychtova S, Sedlakova E, et al. Analysis of snail-1, e-cadherin and claudin-1 expression in colorectal adenomas and carcinomas. Inter JMole Sci,2012,13(2):1632-1643.

[5]Nakamoto K, Nagahara H, Maeda K, et al. Expression of E-cadherin and KRAS mutation may serve as biomarkers of cetuximabbased therapy in metastatic eolorectal cancer. Oncol Lett,2013,5(4):1295-1300.

[6]Karamitopoulou E, Zlobec I, Patsouris E, et al. Loss of E-cadherin independently predicts the lymph node status in colorectal cancer. Pathology,2011,43(2):133-137.

[7]珠珠, 黃鑒, 李文亮, 等.1628例大腸癌臨床發病特點及發病趨勢分析. 昆明醫科大學學報,2013(10):84-87.

Expression of E-cadherin in colorectal cancer tissue and its relationship with pathological clinical characteristics

WANG Jun, WEN Da-xiong, HUANG Xiu-fan, et al. Department of Pathology, Heyuan City People’s Hospital, Heyuan517000, China

ObjectiveTo investigate expression of E-cadherin in colorectal cancer patients and its significance.MethodsImmunohistochemical technique was applied to detect expression of E-cadherin in130 colorectal cancer tissue and30 normal tissue near cancer. Relationship between expression of E-cadherin and pathological clinical characteristics was observed.ResultsExpression of E-cadherin decreased remarkably in cancer tissue, and it had statistically significant difference comparing with that in normal tissue near cancer (P＜0.01). Low expression of E-cadherin was correlated with lesion position, degree of differentiation and lymphatic metastasis, and it had no correlation with gender, age and infiltration depth.ConclusionLow expression of E-cadherin may accelerate malignant progress and lymphatic metastasis of colorectal cancer. Thus, observation of expression of E-cadherin is helpful for understanding severity and judging in colorectal cancer.

E-cadherin; Colorectal cancer; Differentiation; Metastasis

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.15.007

2015-04-14]

517000 河源市人民醫院病理科