腹腔積液細(xì)胞miRNA-221含量對(duì)胰腺癌的價(jià)值

周　勇　楊　勇　燕　平　李志玖

作者單位:442000 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院

腹腔積液細(xì)胞miRNA-221含量對(duì)胰腺癌的價(jià)值

周勇楊勇燕平李志玖

作者單位:442000 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院

【摘要】目的腹腔積液細(xì)胞微小RNA-221(miRNA-221)含量對(duì)胰腺癌的診斷價(jià)值。方法前瞻性、連續(xù)性納入收治臨床表現(xiàn)為腹腔積液的患者，將確診為胰腺癌的研究對(duì)象分入實(shí)驗(yàn)組，將非胰腺癌的良性疾患分入對(duì)照組。比較兩組患者腹腔積液細(xì)胞miRNA-221含量及相關(guān)危險(xiǎn)因素指標(biāo)間的差異性。結(jié)果兩組患者組間資料單因素比較顯示：吸煙史、飲酒史、糖尿病病史、胰腺炎病史、上腹部CT疑似陽(yáng)性、KPS量表、直接膽紅素(DBiL)、癌胚抗原(CEA)、糖抗原19-9(CA19-9)、糖抗原242(CA242)、腹腔積液細(xì)胞miRNA-221、腹腔積液細(xì)胞miRNA-21等共計(jì)12項(xiàng)指標(biāo)存在差異(P均<0.05)。logistic回歸分析顯示：腹腔積液細(xì)胞miRNA-221與KPS量表、DBiL、CEA、CA242同為診斷胰腺癌的敏感指標(biāo)。腹腔積液細(xì)胞miRNA-221的ROC曲線下面積(AUC)為0.784，臨界值為6.69 ng/ml，依據(jù)臨界值分組，則臨界值以上的胰腺癌患者的人數(shù)顯著高于臨界值以下組的(P<0.05)。聯(lián)合檢測(cè)KPS量表、DBiL、CEA、CA242用于診斷胰腺癌的AUC為0.832，約登指數(shù)(YI)為0.6038。加入腹腔積液細(xì)胞miRNA-221后聯(lián)合診斷的AUC增至0.863、YI增至0.6482。結(jié)論腹腔積液細(xì)胞miRNA-221是診斷胰腺癌的獨(dú)立敏感因素，單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)即具有良好的診斷價(jià)值，將其聯(lián)用能夠顯著增大胰腺癌的診斷價(jià)值，對(duì)于該病的早期診斷具有重要臨床意義，是當(dāng)前胰腺癌診斷體系的良好補(bǔ)充。

【關(guān)鍵詞】腹腔積液；微小RNA-221；胰腺癌

Value of Ascites Cell miRNA-221 in the Diagnosis of Pancreatic Cancer

ZHOUYong,YANGYong,YANPing,etal.TaiheHospital,Shiyan,442000

【Abstract】ObjectiveTo study the value of ascites cell small miRNA-221 in the diagnosis of pancreatic cancer.MethodsPatients with clinical manifestations of ascites were prospectively and consecutively selected.Patients with pancreatic cancer were the experimental group,patients without pancreatic cancer were the control group.Ascites cell small miRNA-221 and related risk factors of the 2 groups were compared.ResultsUnivariate analysis showed that smoking,drinking history,history of diabetes,history of pancreatitis,abdominal CT suspected positive,KPS scale,DBiL,CEA,CA19-9,CA242,ascites cell miRNA-221,and ascites cell miRNA-21 between the 2 groups had significant differences(P<0.05).Logistic regression analysis showed that ascites cell miRNA-221 and KPS score,DBiL,CEA,CA242 were sensitive indicators for the diagnosis of pancreatic cancer.Area under the curve(AUC)of ROC of ascites cell miRNA-221 was 0.784,the critical value was 6.69 ng/ml,grouped according to the threshold,pancreatic cancer patients above the threshold was significantly more than those under the threshold(P<0.05).Joint detection of KPS score,DBiL,CEA,and CA242 for the diagnosis of AUC of pancreatic cancer was 0.832,Youden index(YI)was 0.6038.After adding ascites cell miRNA-221,diagnosis of AUC increased to 0.863,YI increased to 0.6482.ConclusionAscites cell miRNA-221 is independent sensitive factors in the diagnosis of pancreatic cancer,and it has good diagnostic value.Combined detection of ascites cell miRNA-221 with other factors can significantly increase diagnostic value for pancreatic cancer,it is a good complement to current diagnostic system of pancreatic cancer.

【Key words】Ascites;miRNA-221;Pancreatic cancer

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:0335～0340)

胰腺癌是目前已知的惡性度最高，但對(duì)其了解最少的惡性腫瘤[1]。在中國(guó)，本病的發(fā)病率及死亡率已由1990年的第20位、12位分別上升至2007年的第7位、第6位[2]。絕大多數(shù)患者就診時(shí)失去手術(shù)治療機(jī)會(huì)，致使胰腺癌患者的5年存活率尚不足5%[3]。由于胰腺癌的臨床及病理學(xué)表現(xiàn)存在顯著異質(zhì)性，當(dāng)前由CT、MRI、血清腫瘤標(biāo)志物、腹腔積液細(xì)胞DNA倍體測(cè)定所構(gòu)成的胰腺癌診斷體系尚存在特異性及靈敏度欠佳的缺陷[4]，進(jìn)一步完善胰腺癌的早期診斷體系刻不容緩。

腹腔積液是胰腺癌的重要并發(fā)癥之一，由于腹腔是相對(duì)封閉的腔隙,腹腔積液不與血循環(huán)相通，因此腹腔積液在胰腺癌診斷及評(píng)判預(yù)后中的價(jià)值不容忽視[5]。腹腔積液脫落細(xì)胞學(xué)及DNA異倍體檢查具有損傷少、檢測(cè)迅捷等特點(diǎn)，但由于癌細(xì)胞在腹腔積液中缺少組織器官的束縛，反復(fù)漂浮、增殖之后其形態(tài)與原先組織中可存在差異性，因此檢出率尚不足30%，如何利用腹腔積液進(jìn)一步提升胰腺癌的診斷準(zhǔn)確率成為當(dāng)前研究的瓶頸。近年來研究發(fā)現(xiàn)微小RNA(miRNA)以單拷貝、多拷貝或基因簇等多種形式普遍存在于基因組中，絕大部分定位于間隔區(qū)，其轉(zhuǎn)錄獨(dú)立于其他基因，在進(jìn)化過程中呈高度保守[6]。大量研究證實(shí)，多種腫瘤細(xì)胞都存在miRNA的表達(dá)異常現(xiàn)象，其中miRNA-21、miRNA-221均在胰腺癌組織呈過表達(dá)[7]。

有鑒于此，本研究擬開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)以檢驗(yàn)腹腔積液細(xì)胞中miRNA-221、miRNA-21等miRNA含量對(duì)于胰腺癌的診斷臨界值，并將該指標(biāo)與胰腺癌的常見危險(xiǎn)因素及年齡、性別、生活習(xí)慣、體重指數(shù)(BMI)、卡氏功能狀態(tài)量表(Karnofsky,KPS)、腫瘤標(biāo)志物、DNA異倍體相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查等項(xiàng)目進(jìn)行對(duì)比以驗(yàn)證其診斷意義。為下一階段大樣本、多中心、前瞻性研究提供理論基礎(chǔ)，以期進(jìn)一步指導(dǎo)臨床。

1材料與方法

1.1　研究資料

前瞻性、連續(xù)性納入我科于2012年1月1日至2014年1月1日期間所收治臨床表現(xiàn)為腹腔積液的患者，經(jīng)內(nèi)鏡下活檢或術(shù)中組織學(xué)切片行病理學(xué)檢查以明確診斷，將確診為胰腺癌的研究對(duì)象分入實(shí)驗(yàn)組，將非胰腺癌的良性疾患分入對(duì)照組。

1.1.1納入標(biāo)準(zhǔn)①依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)外科學(xué)分會(huì)胰腺外科學(xué)組于2008年發(fā)布的《胰腺癌診治指南》[8]診斷為胰腺癌；②依據(jù)參照國(guó)際腹腔積液協(xié)會(huì)于1997年發(fā)布的診療指南[9]診斷伴有腹腔積液；③患者起病后未接受其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)的相關(guān)診療；④患者年齡在15~75歲。

1.1.2排除標(biāo)準(zhǔn)①合并難以控制的高血壓、嚴(yán)重充血性心力衰竭等疾病的患者；②非原發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移至胰腺的患者；③已行根治手術(shù)或放化療；④已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；⑤已發(fā)生遠(yuǎn)端臟器轉(zhuǎn)移；⑥妊娠。

1.1.3剔除標(biāo)準(zhǔn)①療程中發(fā)現(xiàn)隱瞞病史資料者；②不愿意配合診療者；③病歷資料記錄不全者；④其他不可抗力因素導(dǎo)致研究中斷者。

1.2　研究方法

所有患者于入院后迅速登記一般情況、既往史、個(gè)人史、家族史。根據(jù)患者當(dāng)前情況完成KPS量表評(píng)分[10]。KPS量表分為10級(jí)，閾值0~100分，用于評(píng)定患者的機(jī)體功能狀態(tài)，得分越低則患者一般狀態(tài)越差。測(cè)量患者的身高體重并依照公式BMI=體重(kg)/身高2(m2)計(jì)算BMI，常規(guī)行上腹部CT檢查了解肝臟的影像學(xué)結(jié)果。

所有患者均于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下取平臥位，抽取肘正中靜脈血2~5 ml，于抗凝管內(nèi)充分混合，置入4 ℃低溫離心機(jī)內(nèi)，以3 000 r/min行超速離心10 min以分離血漿，置于EP管內(nèi)存儲(chǔ)于-70 ℃低溫冰箱內(nèi)待檢，全過程禁止反復(fù)加熱及溶凍。①應(yīng)用Coulter Synchronic Lx20全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)Beckman公司)，采用酶聯(lián)比色法測(cè)定TSGF、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)，氧化酶法測(cè)定直接膽紅素(DBiL)，免疫抑制比濁法測(cè)定糖化血紅蛋白(HbAlc)，直接測(cè)定法測(cè)定低密度脂蛋白(LDL-C)；②應(yīng)用Elecsys 2010免疫分析儀(德國(guó)Roche公司)，采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)癌胚抗原(CEA)濃度；③應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定如下糖鏈抗原濃度：CA19-9、CA242、CA125，試劑盒由武漢中美科技有限公司提供，應(yīng)用MODEL550酶標(biāo)儀(美國(guó)BIO-RAD公司)于450 nm波長(zhǎng)處比色測(cè)定樣本的含量，以標(biāo)準(zhǔn)品吸光度對(duì)濃度(ng/ml)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線所對(duì)應(yīng)刻度即為相應(yīng)檢測(cè)標(biāo)志物的濃度。

所有患者均于超聲定位下行腹膜穿刺術(shù)以抽取腹腔積液，穿刺前簽署腹膜穿刺活檢同意書并囑患者排空尿液，穿刺后留取次管腹腔積液樣本50 ml，置于肝素瓶中充分混勻[11]。以70 μm尼龍篩網(wǎng)過濾至EP管，置入4 ℃低溫離心機(jī)內(nèi)，以1 500 r/min行超速離心10 min以去除上清液，加入PBS液重懸制備細(xì)胞懸液。①將細(xì)胞懸液濃度設(shè)定為1×106/ml，于光鏡下行常規(guī)脫落細(xì)胞學(xué)檢測(cè)；②應(yīng)用Applied Biosystems-7500熒光定量PCR儀(美國(guó)ABI公司)測(cè)定細(xì)胞懸液的miRNA-221及miRNA-21濃度，所需逆轉(zhuǎn)錄及PCR定量試劑盒，如TaqMan Micro RNA Reverse Transcription Kit、TaqMan Reverse Assay均由ABI公司提供；③加入PI染液500 μl/管，避光靜置1 h后，使用Coulter Epics XL流式細(xì)胞儀(美國(guó)BECK MAN公司)，經(jīng)過有核細(xì)胞制備、細(xì)胞打孔、DNA染色、上機(jī)分析等步驟，檢測(cè)腹腔積液細(xì)胞的DNA含量。根據(jù)以下公式計(jì)算DNA指數(shù)(DNA Index,DI)：DI=被測(cè)細(xì)胞的DNA含量/正常二倍體細(xì)胞的DNA含量。以正常淋巴細(xì)胞作為正常二倍體的評(píng)判參照尺度，根據(jù)DI結(jié)果進(jìn)行判定：DI在0.9~1.10之間為DNA二倍體，DI在1.10~1.20之間為DNA近似二倍體，DI>1.20或<0.85為DNA異倍體。

1.3　倫理學(xué)要求

本次研究符合赫爾辛基宣言及中國(guó)臨床試驗(yàn)研究相關(guān)法律法規(guī)，并經(jīng)由我院倫理委員會(huì)審批。所有受試者入選前均已簽署知情同意書或授權(quán)家屬簽署，所有受試者獲取知情同意書的過程均符合臨床研究的質(zhì)量管理規(guī)范要求。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD/SEM)表示、組間比較應(yīng)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料應(yīng)用率(Rate)和構(gòu)成比(CR)表示，組間比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)。運(yùn)用逐步logistic回歸法(剔除標(biāo)準(zhǔn)為P>0.10)進(jìn)行多因素回歸分析以進(jìn)一步提取獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)單因素組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的危險(xiǎn)因素進(jìn)行校正并計(jì)算回歸方程。

2結(jié)果

2.1　兩組患者病種資料的比較

經(jīng)一系列入選標(biāo)準(zhǔn)，總共納入111例患者，平均年齡(54.12±8.47)歲，女性57例、男性60例。其中實(shí)驗(yàn)組46例、對(duì)照組65例，兩組患者的病種明細(xì)資料見表1。

表1　2組患者的病種資料/例

2.2　兩組患者一般資料比較

兩組患者一般資料單因素比較顯示：吸煙史、飲酒史、糖尿病病史、胰腺炎病史、上腹部CT疑似陽(yáng)性、KPS量表、DBiL、CEA、CA19-9、CA242、腹腔積液細(xì)胞miRNA-221、腹腔積液細(xì)胞miRNA-21共計(jì)12項(xiàng)指標(biāo)存在差異(P均<0.05)，見表2。

2.3　逐步條件logistic回歸分析結(jié)果

根據(jù)組間資料單因素分析結(jié)果，采取逐步引入法，以組別為因變量，以組間單因素比較存在顯著差異性的指標(biāo)為自變量，應(yīng)用逐步向前法建立logistic回歸方程，變量引入水準(zhǔn)設(shè)置為0.05，剔除水準(zhǔn)設(shè)置為0.10。依照自變量的作用大小進(jìn)行排序并依次引入方程，直至作用不顯著為止，隨即擬合主效應(yīng)模型，分析上述指標(biāo)與病因診斷之間的關(guān)聯(lián)。結(jié)果顯示5個(gè)變量進(jìn)入最終回歸模型：KPS量表、DBiL、CEA、CA242、腹腔積液細(xì)胞miRNA-221，其中KPS量表為診斷胰腺癌的保護(hù)因素，其余變量為診斷胰腺癌的危險(xiǎn)因素。最終回歸模型的變量及參數(shù)見表3。

2.4　各項(xiàng)危險(xiǎn)因素對(duì)胰腺癌的診斷價(jià)值

以靈敏度為縱坐標(biāo)，以誤診率即1-特異度為橫坐標(biāo)，繪制相應(yīng)危險(xiǎn)因素的ROC曲線以驗(yàn)證其診斷效能，并采取并聯(lián)方式繪制多項(xiàng)危險(xiǎn)因素聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線：①其中腹腔積液細(xì)胞miRNA-221診斷胰腺癌的AUC=0.784(P<0.05,95%CI:0.726~0.841)、YI=0.5042、Threshold=6.69(ng/ml)，見圖1；②根據(jù)腹腔積液細(xì)胞miRNA-221的診斷臨界值，將所納入患者分為臨界值以上組(n=51)及臨界值以下組(n=60)，可見與臨界值以下組的胰腺癌患者相比，臨界值以上的胰腺癌患者人數(shù)顯著增加，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(3 vs 43,χ2=5.871,P=0.015)；③聯(lián)合KPS、DBiL、CEA、CA242 4項(xiàng)指標(biāo)診斷胰腺癌的AUC=0.832(P<0.05,95%CI:0.787~0.872)、YI=0.6038，見圖2；④將腹腔積液細(xì)胞miRNA-221納入上述檢測(cè)體系，5項(xiàng)危險(xiǎn)因素聯(lián)合診斷胰腺癌的AUC=0.863(P<0.05,95%CI:0.812~0.902)、YI=0.6482，見圖3，各項(xiàng)危險(xiǎn)因素的ROC曲線相關(guān)指標(biāo)見表4。

3討論

微小RNA(miRNA)作為一類成熟狀態(tài)下只有22 nt左右的非編碼單鏈小RNA,廣泛存在于動(dòng)植物、人類等多個(gè)物種,在個(gè)體生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡、炎癥浸潤(rùn)、腫瘤增殖等生理病理過程中扮演十分重要作用。從Du等[12]于2005年在線蟲中首次發(fā)現(xiàn)miRNA(miRNA-4)開始,當(dāng)前已累計(jì)于115個(gè)物種中發(fā)現(xiàn)miRNA共10 883個(gè)，其中與人類密切相關(guān)的miRNA約800個(gè)。miRNA以單拷貝、多拷貝或基因簇等多種形式普遍存在于基因組中，絕大部分定位于間隔區(qū)，其轉(zhuǎn)錄獨(dú)立于其他基因，在進(jìn)化過程中呈高度保守[13]。miRNA不編碼蛋白質(zhì)，通過與編碼蛋白質(zhì)的mRNA互補(bǔ)結(jié)合以沉默其表達(dá)，從而調(diào)控細(xì)胞的發(fā)育、增殖、分化、凋亡等一系列過程。在正常情況下,成熟的miRNA通過調(diào)控靶基因RNA的轉(zhuǎn)錄翻譯，以增強(qiáng)其穩(wěn)定性，從而參與并維持正常細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。通過RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)與靶基因mRNA的3'端UTR區(qū)互補(bǔ)結(jié)合[14]。miRNA的異常表達(dá)時(shí)，通過兩者的不完全互補(bǔ)結(jié)合，抑制靶基因mRNA的翻譯,進(jìn)而影響靶基因蛋白的表達(dá)[15]，導(dǎo)致其相應(yīng)靶基因轉(zhuǎn)錄后的水平異常。Kuehbacher等[16]對(duì)裸鼠皮下注射經(jīng)過RNA干擾技術(shù)抑制Dicer酶和DNosha酶處理過的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，通過提取體外細(xì)胞miRNA，共觀察到168種miRNA表達(dá)。經(jīng)基因測(cè)序，miRNA-221定位于人染色體21q23，在人類肺癌、胰腺癌、乳腺癌、甲狀腺癌等惡性腫瘤中均呈高表達(dá)。提示檢測(cè)腹腔積液細(xì)胞中miRNA-221的含量與胰腺癌的病理生理進(jìn)程具有重要相關(guān)性。

表2　2組患者的一般資料比較±s)

注：*為P<0.05。

表3　多因素Logistic回歸分析結(jié)果

注:b值為回歸系數(shù)最大似然估計(jì)值，SE(b)為估計(jì)值的標(biāo)準(zhǔn)誤，Wald(χ2)為Wald檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)量值，OR為比值比的估算值，OR_95%CI為比值比95%可信區(qū)間的上下限，P值為Wald(χ2)的P值。

表4　各項(xiàng)危險(xiǎn)因素的ROC曲線相關(guān)指標(biāo)

注:AUC為曲線下面積，AUC_95%CI為曲線下面積95%可信區(qū)間的上下限，Sensitivity為敏感性，Specificity為特異度，YI為約登指數(shù)，Threshold為診斷臨界值。

圖1　腹腔積液細(xì)胞miRNA-221診斷胰腺癌的ROC曲線

圖2　KPS評(píng)分+直接膽紅素+癌胚抗原+糖鏈抗原242聯(lián)合

圖3　KPS評(píng)分+直接膽紅素+癌胚抗原+糖鏈抗原242+

流行病資料顯示，當(dāng)前我國(guó)胰腺癌具有高發(fā)病率及5年存活率低的特點(diǎn)[17]。究其原因，除了當(dāng)前環(huán)境下并存眾多胰腺癌危險(xiǎn)因素、重視治療輕預(yù)防、忽視健康宣教重要性之外，當(dāng)前醫(yī)療界對(duì)消化道惡性疾患的早期診斷及敏感性篩查開展力度欠缺亦造成了不容忽視的后果[18]。加強(qiáng)本病的早期診斷并加以積極干預(yù)，是提高存活率、改善胰腺癌患者生活質(zhì)量的關(guān)鍵。理想的生物標(biāo)志物應(yīng)兼具靈敏度和特異性，此外還應(yīng)便于檢測(cè)、檢測(cè)無創(chuàng)或創(chuàng)傷小、易于重復(fù)取樣、有助于疾病的分級(jí)分期診斷等優(yōu)點(diǎn)[19]。近年來圍繞胰腺癌的病理生理學(xué)進(jìn)行了一系列研究，表明腹腔積液細(xì)胞miRNA-221基本符合上述生物標(biāo)志物的特點(diǎn)。受前述研究啟發(fā)，本文就胰腺癌患者的這兩項(xiàng)指標(biāo)與其他危險(xiǎn)因素之間的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行了研究，通過多因素Logistic回歸分析得知：KPS量表評(píng)分降低、DBiL升高、CEA升高、CA242升高、腹腔積液細(xì)胞miRNA-221升高俱為診斷胰腺癌的的獨(dú)立敏感因素。通過繪制上述敏感因素的ROC曲線及診斷臨界值分組，證實(shí)該敏感因素對(duì)于胰腺癌具有良好的診斷價(jià)值；聯(lián)合檢測(cè)KPS、DBiL、CEA、CA2424項(xiàng)指標(biāo)診斷胰腺癌的AUC=0.832、YI為0.6038，在此基礎(chǔ)上加入腹腔積液細(xì)胞miRNA-221之后聯(lián)合診斷，5項(xiàng)敏感指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的AUC增至0.863、YI增至0.6482，較未加入之前顯著升高，進(jìn)一步體現(xiàn)了腹腔積液細(xì)胞miRNA-221對(duì)于胰腺癌診斷具有重要意義。

綜上所述，腹腔積液細(xì)胞miRNA-221是診斷胰腺癌的獨(dú)立敏感因素，單項(xiàng)指標(biāo)即已具有良好的診斷價(jià)值，是當(dāng)前胰腺癌診斷體系的良好補(bǔ)充，將其聯(lián)用將顯著增大胰腺癌的診斷價(jià)值，對(duì)于該病的早期診斷具有重要臨床意義。

參考文獻(xiàn)

[1]Saif MW.Pancreatic cancer:highlights from the 42nd annual meeting of the American Society of Clinical Oncology 2006〔J〕.JOP,2006,7(4):337-348.

[2]陳萬(wàn)青,張思維,鄭榮壽,等.中國(guó)腫瘤登記地區(qū)2007年腫瘤發(fā)病和死亡分析〔J〕.中國(guó)腫瘤,2011,20(3):162-165.

[3]Zhou WB,Bai M,Jin Y.Diagnostic value of vascular endothelial growth factor and endostatin in malignant pleural effusions〔J〕.Int J Tuberc Lung Dis,2009,13(2):381-386.

[4]郭光云,張立波,陳功,等.DNA倍體分析系統(tǒng)診斷腹腔積液的價(jià)值〔J〕.醫(yī)學(xué)臨床研究,2007,24(11):1960-1961.

[5]孟令新,丁兆軍,陳希平.熱療聯(lián)合腹腔熱灌注化療治療胰腺癌并腹腔積液的療效觀察〔J〕.中華臨床醫(yī)師雜志,2011,5(7):1923-1927.

[6]Chang SH,Hla T.Gene regulation by RNA binding proteins and microRNAs in angiogenesis〔J〕.Trends Mol Med,2011,17(11):650-658.

[7]Seike M,Goto A,Okano T,et al.MiR-21 is an EGFR-regulated anti-apoptotic factor in lung cancer in never-smokers〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2009,106(29):12085-12090.

[8]中華醫(yī)學(xué)會(huì)外科學(xué)分會(huì)胰腺外科學(xué)組.胰腺癌診治指南〔J〕.中華肝膽外科雜志,2008,14(3):198-200.

[9]Serlock S,Dooler J.Disease of the liver and biliary system〔M〕.10th ed,London:Blackwell Science,1997.

[10]Schag CAC,Ganz PA,Wing DS,et al.Quality of life in adult survivors of lung,colon and prostate cancer〔J〕.Qual Life Res,1994,3(2):127-141.

[11]顏綦先,樊麗琳,胡輅,等.B超定位后腹膜活檢對(duì)不明原因腹腔積液的診斷價(jià)值〔J〕.重慶醫(yī)學(xué),2013,42(27):3227-3228.

[12]Du T,Zamore PD.microPrimer:the biogenesis and function of microRNA〔J〕.Development,2005,132(21):4645-4652.

[13]Chang SH,Hla T.Gene regulation by RNA binding proteins and microRNAs in angiogenesis〔J〕.Trends Mol Med,2011,17(11):650-658.

[14]Calin GA,Liu CG,Sevignani C,et al.MicroRNA profiling reveals distinct signatures in B cell chronic lymphocytic leukemias〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2004,101(32):11755-11760.

[15]Calin GA,Sevignani C,Dumitru CD,et al.Human microRNA genes are frequently located at fragile sites and genomic regions involved in cancers〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2004,101(9):2999-3004.

[16]Kuehbacher A,Urbich C,Zeiher AM,et al.Role of Dicer and Drosha for endothelial microRNA expression and angiogenesis〔J〕.Circ Res,2007,101(1):59-68.

[17]沈魁,鐘守先,張圣道.胰腺外科〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:202.

[18]Jemal A,Siegel R,Ward E,et al.Cancer statistics,2008〔J〕.CA Cancer J Clio,2008,58(2):71-96.

[19]姚汝鋮,鄭軍,邢榮春.微小RNA在胰腺癌中的研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2012,19(8):911-915.

(編輯：吳小紅)

(收稿日期2014-07-10修回日期 2014-10-14)

中圖分類號(hào)：R735.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2015)03-0335-06

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.03.007

通訊作者：楊勇