IL13Rα2 SNPs在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義

周碧燕　李友邕　趙麗萍　魏　威

IL13Rα2 SNPs在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義

周碧燕李友邕趙麗萍魏威

作者單位:530022 廣西南寧市第一人民醫院(周碧燕，李友邕，趙麗萍)；510515 南方醫科大學生物技術學院(魏威)

【摘要】目的檢測非小細胞肺癌(NSCLC)患者中IL13Rα2 SNPs(rs17095919)的多態性，并探討其臨床意義。方法收集NSCLC患者96例，另選取同期健康體檢者40例作為正常對照。SNPs多態性測定應用Real-Time PCR Taqman分析。結果NSCLC患者C/C、C/T和T/T基因型頻率分別為22.9%、51.1%和26.0%，對照組分別為32.5%、30.0%和37.5%，C/C、T/T基因型表達兩組間比較無顯著性差異(P>0.05)，而C/T基因型表達兩組間比較具有統計學差異(P<0.05)。C/T基因型表達與NSCLC患者有無吸煙、腫瘤分化程度無顯著相關(P>0.05)，而與有無淋巴結轉移、不同臨床病理分期顯著相關(P<0.05)。結論IL13RA2 SNPs(rs17095919)C/T基因型與NSCLC的易感性密切相關，在NSCLC的早期診斷以及預后評估等方面起一定的作用。

【關鍵詞】非小細胞肺癌；IL13α2受體；單核苷酸多態性

The Polymorphism of IL13Rα2 SNPs in Non-small Cell Lung Cancer and

Its Clinical Significance

ZHOUBiyan，LIYouyong，ZHAOLiping,etal.FirstPeople’sHospitalofNanning,Nanning,530022

【Abstract】ObjectiveTo investigate the polymorphism of IL13Rα2 SNPs(rs17095919)in non-small cell lung cancer(NSCLC)and its clinical significance.Methods96 patients with NSCLC were enrolled in our study.Another 40 healthy person were usded as a normal control.The genotypes of IL13Rα2 SNPs(rs17095919)was performed using the Real-Time PCR TaqMan assays.ResultsThe C/C,C/T,and T/T genotypes of IL13Rα2 SNPs(rs17095919)in NSCLC were 22.9%,51.1%,and 26.0%,respectively,and those of the control group were 32.5%,30.0%,and 37.5%,respectively.There had no significant difference in C/C and T/T genotypes between the 2 groups(P>0.05).However,there was significant difference in C/T genotype between the 2 groups(P<0.05).The C/T genotype was not significantly related with smoking and histological grade(P>0.05).However,it was significantly related with lymphatic metastasis,and clinical pathological stage in NSCLC patients(P<0.05).ConclusionIL13RA2 SNPs(rs17095919)C/T genotype may be a susceptibility genotype in NSCLC.The detection of C/T genotype might be used as a mark for diagnosis,estimating the degree of differentiation or prognosis in NSCLC patients.

【Key words】Non-small cell Lung Cancer(NSCLC)；IL13Rα2；Single nucleotide polymorphism(SNP)

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:0320～0322)

腫瘤是引起目前人類死亡的主要原因，肺癌(lung cancer)是全世界范圍內發病率和病死率居最高的惡性腫瘤，流行病學統計顯示其發病近年來呈現逐年增加和年輕化的趨勢[1-2]。非小細胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)是最常見的肺癌類型，占了肺癌病例的80%左右，具有治愈率低、易復發等特點，是威脅肺癌患者生存的最主要原因[3]。NSCLC的發生、發展是一個多因素共同參與、多階段的復雜生物學過程，其中癌基因激活或者抑癌基因失活參與了其中，因此個體的基因差異性對肺癌的易感性起了重要的作用[4-5]。IL-13Rα2基因是近幾年來在腎癌細胞中分離的一個癌基因[6]，本研究檢測了其第七外顯子上一個SNPs(rs17095919，C256T)位點在NSCLC患者中的多態性，為NSCLC早期診斷和腫瘤的防治提供理論依據。

1材料與方法

1.1　臨床資料

收集2010年1月至2012年6月本院胸外科手術切除的NSCLC組織標本96例，病例均經病理檢查證實為原發性NSCLC，其中男性62例，女性34例，年齡27～65歲，平均年齡(47.6±12.4)歲，相應病例另取外周靜脈血2 ml用于基因組DNA檢測。根據TNM分期標準分為：Ⅰ期22例、Ⅱ期28例、Ⅲ期25例、Ⅳ期21例。另選取同期體檢者40例作為健康正常對照，其中男性26例，女性14例，年齡26～64歲，平均年齡(46.1±11.4)歲。兩組在年齡、性別等方面無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2　主要試劑和儀器

外周血和組織DNA提取試劑盒購自大連寶生物公司，熒光定量檢測(Real-Time PCR)試劑盒購自美國ABI公司，引物以及Taqman探針的合成由深圳華大基因有限公司完成，熒光定量PCR儀(Prism 7900)為美國ABI公司產品。

1.3　SNPs(rs17095919)位點的C和T等位基因檢測

NSCLC患者的腫瘤組織和血液標本以及健康對照的血液標本使用DNA提取試劑盒，嚴格按照試劑盒說明書操作，提取基因組DNA，按照Real-time PCR試劑盒說明書檢測SNPs(rs17095919)位點C和T等位基因的表達情況，引物序列為：5'-ACCTTTGCCGCCAGTCTATCTTAC-3'(sense)，Antisence:5'-TGTCGGGT-TTCATTTGTTGTTTTC-3'(antisense)，反應條件：50 ℃，2 min，95 ℃預變性10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，擴增35個循環，最后72 ℃延伸10 min。參照Jung等[7]的方法觀察Real-time PCR的反應曲線，抬高的擴增曲線對應的Taqman探針。

1.4　統計學分析

應用SPSS 12.0統計軟件處理數據，數據資料采用χ2檢驗，P<0.05為統計學有顯著性差異。

2結果

2.1　NSCLC患者SNPs(rs17095919)位點的基因型多態性變化

Real-time PCR檢測結果顯示：NSCLC患者腫瘤組織和外周血液中SNPs(rs17095919)位點的等位基因型一致，其中C等位基因頻率為48.4%，T等位基因頻率為51.6%，健康對照組中C 、T等位基因的頻率分別為47.5%和52.5%，兩組間無顯著性差異(P>0.05)，基因型頻率符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，見表1。

NSCLC患者C/C、C/T和T/T基因型頻率分別為22.9%、51.1%和26.0%，對照組分別為32.5%、30.0%和37.5%，統計學分析顯示C/C、T/T基因型表達兩組間無顯著性差異(P>0.05)，而C/T基因型表達兩組間有統計學差異(P<0.05)，見表1。

表1　NSCLC組與對照組SNPs(rs17095919)位點的

注：*為與對照組比較，P<0.05。

2.2　NSCLC患者SNPs(rs17095919)C256T基因型多態性與其臨床病理指標的相關性分析

由表2可以看出，C256T基因型表達與NSCLC患者有無吸煙、腫瘤分化程度無顯著相關性(P>0.05)，而與有無淋巴結轉移、不同臨床病理分期存在顯著相關性(P<0.05)，見表2。

表2　C256T基因型表達與NSCLC臨床病理指標的關系

注：*為不同臨床指標兩組間比較，P<0.05。

3討論

NSCLC早期診斷困難，發現腫瘤時已有超過40%的患者出現遠處轉移，而且治療手段有限，生存率低，雖然近年來治療手段的不斷更新，其5年生存率也只有25%～30%[8]。吸煙是NSCLC發病的一個公認高風險因素，但流行病學統計發現只有約10%～15%的吸煙者會發展成為肺癌，可見從分子生物學特征研究肺癌的基因、表觀遺傳以及基因表達等將有助于從本質上認識腫瘤的發病機制和腫瘤的風險評估，同時也有利于早期診斷以及個體化治療的實施[9]。單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism，SNP)是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態性，它占了已知多態性的90%以上，一些與肺癌密切相關的SNP位點已經學者們陸續發現，例如EGFR、VEGFR等[10-11]。IL-13Rα2屬于促紅細胞生成素受體家族成員，其主要與配體IL-13結合調節機體的免疫能力[12-13]，近期的研究發現IL-13Rα2在一些實體腫瘤中高表達[6]，本研究發現了其第七外顯子上一個SNPs(rs17095919)位點C256T多態性變化在NSCLC患者與健康對照人群之間存在顯著性差異，提示了SNPs(rs17095919)位點的C256T基因型可能與NSCLC的易感性相關密切相關。

基于腫瘤的組織學類型和臨床表現進行的傳統分期對于判斷預后、預測復發和指導治療的效果往往并不理想，因此從外顯子基因水平來判斷患者的病變發展情況以及預后的評估正逐漸成為研究的熱點[3,11]。本研究的結果顯示了NSCLC患者SNPs(rs17095919)位點的C256T基因型隨淋巴結轉移和臨床分期的進展而逐漸的增加，提示C256T基因型的檢測還可以用于患者病情的評估和預后的評價。

綜上所述，本研究顯示檢測IL13RA2 SNPs在NSCLC的早期診斷和腫瘤的防治中起到一定的作用，對于患者的臨床分級以及預后評估等方面具有一定的臨床指導意義。

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(編輯：吳小紅)

(收稿日期2014-08-21修回日期 2014-10-10)

中圖分類號：R734.2

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)03-0320-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.03.002

基金項目：南寧市科學研究與技術開發計劃項目(編號：20103132)