DC-CIK聯合化療在晚期腎癌患者中的綜合應用價值

蔡艷榮

作者單位:610066 四川省成都新華醫院

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DC-CIK聯合化療在晚期腎癌患者中的綜合應用價值

蔡艷榮

作者單位:610066 四川省成都新華醫院

【摘要】目的探討DC-CIK聯合化療在治療晚期腎癌患者中的綜合應用價值。方法回顧性分析接受化療的46例晚期腎癌病例，其中21例聯合DC-CIK治療(DC-CIK組)，25例僅接受化療(化療組)。比較2組間腫瘤生長情況、患者長期生存情況、不良反應發生情況等差異；并對外周血淋巴細胞亞群和細胞因子水平進行檢測，比較組間差異。結果DC-CIK組實體瘤近期緩解情況顯著優于化療組；DC-CIK組中位總生存時間為20個月、1年生存率為90.48%，顯著高于化療組的17個月、84.00%，P<0.05。治療1、3個療程后DC-CIK組CD3+、CD4+、CD8+比例顯著高于化療組，IL-2、IL-12、IFN-γ含量顯著高于化療組，P<0.05。結論DC-CIK聯合化療能有效提高晚期腎癌患者的免疫能力，促進IL-2、IL-12、IFN-γ等細胞因子的表達，從而發揮殺死腫瘤細胞、緩解實體瘤、延長患者生存期的功效。

【關鍵詞】晚期腎癌；DC-CIK；化療；淋巴細胞亞群；細胞因子

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:559～562)

腎癌在泌尿系統腫瘤中的發病率僅次于膀胱癌，占全身惡性腫瘤的3%。局限性腎癌患者可以通過手術治療獲得痊愈，但是約有30%的腎癌患者發現時已經處于晚期。由于腎癌對放化療均不敏感，因此目前尚無有效的方法治療晚期腎癌[1]。近年來酪氨酸激酶抑制劑在晚期腎癌的治療中被逐漸推廣，其雖然能有效提高患者的生存率，但是效果仍不理想。最新研究表明細胞免疫CD8+T細胞(CTLs)在抑制腫瘤生長中具有重要作用，樹突狀細胞(dendritic cells，DC)則對CTLs的激活至關重要；細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokineinduced kill cell，CIK)在腎癌的治療中也表現出了很好的療效[2-3]。這幾年，不斷有研究發現DC-CIK能改善腎癌患者的免疫水平，延緩腫瘤的進展，但是也有人持懷疑態度。為了證實DC-CIK在晚期腎癌治療中的綜合應用價值，我們開展了以下研究。

1資料與方法

1.1臨床資料

回顧性分析2007年6月至2013年3月期間在我院接受化療的晚期腎癌病例46例，所有患者均經組織學或細胞學檢查確診為腎細胞癌，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期，KPS 評分>60分，預計生存期大于6個月；排除非原發性腎癌患者，排除接受腎切除后復發的病例，排除合并有傳染性疾病或者近3個月接受大手術的病例。根據是否接受DC-CIK治療，分為2組，其中DC-CIK組21例，化療組25例。DC-CIK組，男性16例，女性5例；年齡34～69歲，中位年齡52歲；TNM分期為Ⅲ期9例，Ⅳ期12例。化療組，男性18例，女性7例；年齡32～67歲，中位年齡53歲；TNM分期為Ⅲ期12例，Ⅳ期13例。經統計學分析，2組患者間性別、年齡及腫瘤分期等基線資料無統計學差異，具有可比性。

1.2治療方法

1.2.1DC-CIK制備方法CIK細胞制備：①采用血細胞分離機采集患者外周血單個核細胞，PBS洗滌3次，用RPMI1640培養基調節細胞密度至3×106個/ml，接種于6孔板，置于37 ℃、5%CO2培養箱培養過夜。②收集非貼壁細胞，加入IFN-γ(1 000 U/ml)，再次置于37 ℃、5%CO2培養箱培養過夜。③移入經CD3MeAb包被過的25 ml培養瓶中，加入CIK培養液(RPMI1640培養基加入10%的人血清，IL-1β、IL-2，終濃度為100 U/ml、300 U/ml)繼續培養48 h；④每3天更換新鮮CIK培養液，誘導產生CIK細胞。

DC體外培養：①同CIK制備①；②收集貼壁細胞，加入DC培養液(RPMI1640培養基加入10%的人血清，rhGM-CSF、rhIL-5，終濃度為100 ng/ml、50 ng/ml)置于37 ℃、5%CO2培養箱培養，于第3天更換新鮮DC培養液，第5天加入IL-1β、PGE2、TNF-α，終濃度分別為20 ng/ml、5 μg/ml、20 ng/ml，第7天即可收獲成熟的DC。

DC-CIK制備：收集培養成熟的DC以及CIK細胞，去培養液，加入CIK培養液，進行細胞計數。以DC∶CIK=1∶4的比例進行混合，繼續用CIK培養液培養，即得DC-CIK。

1.2.2化療方案所有患者均接受舒尼替尼口服治療，50 mg/次，頓服。每服藥4周后停藥2周。持續用藥至腫瘤進展或者出現不可耐受的不良反應。

1.2.3DC-CIK治療方案收集培養成功的且經檢測細胞存活率大于90%、無污染的DC-CIK細胞，5×108個左右，離心，生理鹽水洗滌3次后，加入含有10%患者自體血漿的生理鹽水重懸，經靜脈回輸給患者，5次1個療程。

1.3觀察指標

患者每8～12周接受CT檢查，由固定的影像診斷小組按照實體瘤療效評價標準(RECIST1.1)進行療效評價，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩定(SD)和疾病進展(PD)4個等級[4]，客觀反應率(ORR)=CR+PR。根據用藥時間，記錄患者的總生存時間。

于治療前及治療1、3個療程后，收集患者靜脈血，采用流式細胞儀技術檢測治療前后2組患者間外周血中淋巴細胞亞群百分比(CD3+、CD4+、CD8+、HLA-DR+T淋巴細胞)。采用ELISA試劑盒檢測血清中IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α的水平。

1.4統計學處理

2結果

2.12組臨床療效比較

DC-CIK組CR、PR、ORR分別為9.52%、38.10%和47.62%，顯著高于化療組的0.00%、16.00%和16.00%，P<0.05(見表1)。采用Kaplan-Meier法進行生存分析，DC-CIK組中位總生存時間為20個月，1年生存率為90.48%；化療組中位總生存時間為17個月，1年生存率為84.00%。DC-CIK組總生存時間及1年生存率均顯著優于化療組，P<0.05。

表1　2組間臨床療效比較(例，%)

注：*為與化療組比較，P<0.05。

2.2治療前后2組外周血中淋巴細胞亞群百分比比較

研究結果顯示治療前2組患者外周血中各項淋巴細胞亞群百分比無顯著差異，P>0.05。治療1、3個療程后DC-CIK組CD3+、CD4+、CD8+比例顯著高于化療組(P<0.05)。治療1、3個療程后，DC-CIK組CD3+、CD4+、CD8+比例較治療前顯著提高，化療組較化療前顯著降低，P<0.05。見表2。

±s，%)

注：*為與化療組同期比較，P<0.05；△為與治療前比較，P<0.05。

2.3治療前后2組間血清中炎癥因子水平比較

研究結果顯示治療前2組患者血清中炎癥因子水平無統計學差異，P>0.05。治療1、3個療程后DC-CIK組IL-2、IL-12、IFN-γ比例顯著高于化療組(P<0.05)。治療1、3個療程后，DC-CIK組IL-2、IL-12、IFN-γ比例較治療前顯著提高(P<0.05)；化療組與治療前相比，無明顯變化(P>0.05)。見表3。

±s，pg/ml)

注：*為與化療組同期比較，P<0.05；△為與治療前比較，P<0.05。

3討論

目前手術是治療原發性腎癌的首選有效方法，但其僅對局限性腎癌具有較好的作用。已經發生轉移的腎癌由于對放、化療均不敏感，因此臨床上缺乏有效的治療和預防腫瘤復發的治療方案[5]。腫瘤免疫學說認為腫瘤的發生、發展及轉移極有可能與腫瘤本身逃避免疫監視的機能有關，腫瘤患者體內缺少足夠的抗原提呈細胞來激發腫瘤免疫反應是導致腫瘤發生和遠處轉移的重要原因[6]。因此醫學界一直在尋找通過提高機體對腎癌細胞的免疫應答能力來抑制或殺死腎癌細胞的方法，免疫治療也被普遍接受為治療腎癌的有效方法[7-8]，DC-CIK治療腎癌的療效也被越來越多的學者所關注[9-10]。

已有研究證實DC的數量與腫瘤的臨床分期、周圍浸潤程度以及腫瘤轉移、患者預后等息息相關[11]，腫瘤細胞接觸DC細胞后會抑制DC細胞成熟，導致抗原無法呈遞給T細胞，最終導致免疫耐受和腫瘤的免疫逃逸。CIK則是一群異質細胞，同時具備NK細胞的MHC限制性殺瘤功能和T細胞的強大抗瘤活性。基礎研究證實DC細胞和CIK細胞聯合培養能起到協同抑制腫瘤細胞生長的作用。本研究采用自體DC-CIK細胞回輸聯合化療的方法治療晚期腎癌，結果顯示DC-CIK治療組患者實體瘤緩解情況顯著優于單純化療組，該組患者的中位總生存時間也有了明顯延長，證實DC-CIK治療在晚期腎癌中具有積極作用。

另外我們關注了DC-CIK對外周血中淋巴細胞亞群的影響。外周血CD3+、CD4+、CD8+水平是反映機體免疫狀況的重要指標。我們研究結果顯示化療組患者在接受化療后外周血CD3+、CD4+、CD8+百分比明顯下降；而DC-CIK組患者CD3+、CD4+、CD8+百分比則與治療前相比顯著提高，顯著高于同時期的化療組(P<0.05)。說明DC-CIK治療能改善晚期腎癌患者的免疫功能，與張亮等的研究報道一致[12]。我們還觀察了DC-CIK對血清中炎癥因子水平的影響，結果顯示治療1、3個療程后DC-CIK組IL-2、IL-12、IFN-γ比例顯著高于化療組(P<0.05)，與治療前相比也有顯著提高。DC的高表達能刺激細胞分泌IL-2、IL-12等Th1類細胞因子，Th1類細胞因子在機體的抗腫瘤免疫中具有重要作用，其通過誘導T 細胞和NK 細胞產生IFN-γ，激活NK 細胞的殺瘤活性來干擾腫瘤的正常生長和轉移[13-14]。已經有研究證實腫瘤患者體內IFN-γ與患者腫瘤進展時間和總生存時間呈正相關[15]。本研究結果可以推測DC-CIK治療晚期腎癌的機制可能與調節Th1類細胞因子的生成與分泌有關。

綜上所述，DC-CIK聯合化療能有效提高晚期腎癌患者的免疫能力，促進IL-2、IL-12、IFN-γ等細胞因子的表達，從而發揮殺死腫瘤細胞、緩解實體瘤、延長患者生存期的功效，DC-CIK聯合化療是治療晚期腎癌較為理想的方案。

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(編輯：甘艷)

Comprehensive Application Value of DC-CIK Combined with Chemotherapy for

Advanced Renal Cell Carcinoma

CAIYanrong.ChengduXinhuaHospital,Chengdu,610066

【Abstract】ObjectiveTo study the comprehensive application value of DC-CIK combined with chemotherapy for advanced renal cell carcinoma.MethodsRetrospective analysis of 46 cases of patients with advanced renal cell carcinoma was conducted,21 cases received DC-CIK therapy (DC-CIK group),25 cases received chemotherapy (chemotherapy group).Tumor growth,long-term survival and adverse reactions of the 2 groups were compared;and the levels of peripheral blood lymphocyte subsets and cytokine of the 2 groups were detected and compared.ResultsThe solid tumor remission in the DC-CIK group was better than that of the chemotherapy group,and the median overall survival time and the 1-year survival rate of the DC-CIK group were respectively 20 months and 90.48%,which were higher than those of the chemotherapy group 17 months,84.00%,P<0.05.After 1,3 courses of treatment,the percentages of CD3+,CD4+,CD8+ of the DC-CIK group were higher than that of the chemotherapy group;and the serum levels of IL-2,IL-12,IFN-γ of the DC-CIK group were higher than that of the chemotherapy group,allP<0.05.ConclusionDC-CIK combined with chemotherapy can effectively improve the immunity of patients with advanced renal cell carcinoma,promote the expression of cytokines such as IL-2,IL-12,IFN-γ and so on,so as to kill tumor cells,relieve solid tumor and improve survival of patients.

【Key words】Advanced renal cell carcinoma；DC-CIK；Chemotherapy；Lymphocyte subsets；Cytokines

(收稿日期2014-12-09修回日期 2015-03-10)

中圖分類號：R737.11

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)04-0559-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.04.028