乳腺癌患者血清HER-2/neu濃度與組織HER-2表達水平的相關性

周愛清　陳志軍　孫正魁　黃傳生

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乳腺癌患者血清HER-2/neu濃度與組織HER-2表達水平的相關性

周愛清陳志軍孫正魁黃傳生

作者單位:330029 江西省腫瘤醫(yī)院

【摘要】目的探討化學發(fā)光法檢測可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu ECD濃度與組織HER-2表達水平的相關性。方法采用西門子化學發(fā)光儀檢測2012年12月至2013年12月收治的84例可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu ECD水平，并采用同期的58例乳腺良性病變患者及56例健康體檢女性作為對照；同時對84例可手術乳腺癌患者進行組織HER-2表達的檢測。結果可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu ECD水平及陽性率分別為(15.56±6.79)ng/ml、19.05%，明顯高于乳腺良性病變患者的(6.21±3.21)ng/ml、0.00%，及健康體檢者的(5.13±2.25)ng/ml、0.00%，P均<0.05。34例組織HER-2表達陽性的可手術乳腺癌中有14例血清HER-2/neu陽性，陽性符合率為41.2%；50例組織HER-2表達陰性的可手術乳腺癌中有48例血清HER-2/neu陰性，陰性符合率為96.0%；血清HER-2/neu水平與組織HER-2表達狀態(tài)具有較好的一致性，(kappa=0.406，P<0.05)。結論化學發(fā)光法檢測可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu濃度與組織HER-2表達水平具有較好的一致性。因此，乳腺癌患者在系統(tǒng)治療期間，可通過化學發(fā)光法動態(tài)監(jiān)測患者血清HER-2/neu ECD水平，可彌補組織HER-2檢測的不足，在乳腺癌隨訪、療效監(jiān)測尤其是用Herceptin治療后的療效監(jiān)測中發(fā)揮其獨到作用。

【關鍵詞】乳腺癌；化學發(fā)光法；血清；HER-2/neu；免疫組化；熒光原位雜交

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:479～481)

人類表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)基因是一種原癌基因，由具有酪氨酸激酶活性的胞質(zhì)區(qū)、跨膜區(qū)及胞外域(extracellular domain,ECD)組成。目前臨床多采用免疫組化(IHC)和熒光原位雜交(FISH)判斷組織HER-2表達水平，但這些方法有流程繁瑣復雜、靈敏度及特異性較差等缺點，且對于晚期無法取得實體瘤樣本的患者，IHC和FISH均無法檢測。有研究表明，HER-2/neu的細胞外區(qū)(ECD)可脫離進入血清，形成游離的HER-2/neu蛋白，稱血清HER-2/neu[1]。血清HER-2/neu檢測具有簡單、方便、定量及動態(tài)觀察等優(yōu)點，可以監(jiān)控治療效果、預測復發(fā)或提供乳腺癌轉移時HER-2狀態(tài)的實時評估[2]。本研究通過化學發(fā)光法檢測可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu ECD水平，對其與組織HER-2表達水平的相關性進行探討，現(xiàn)報告如下。

1材料與方法

1.1一般資料

收集我院2012年12月至2013年12月可手術乳腺癌患者84例，所有病例均經(jīng)病理檢查證實為浸潤性導管癌，均為女性；年齡26～71歲，平均年齡52歲。另外收集健康體檢女性56例作為正常對照組，年齡21～53歲，平均年齡37歲。手術證實為乳腺良性病變患者58例，其中乳腺纖維瘤31例，小葉增生27例，年齡31～65歲，平均年齡39歲。受檢者抽空腹血3～5 ml，不抗凝，待血液凝固后分離血清置于無菌有蓋試管中，置于-25 ℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2儀器與方法

測量儀為西門子centaur XP化學發(fā)光儀，HER-2/neu試劑由西門子公司提供。

1.3結果判斷

血清HER-2/neu>15.2 ng/ml為陽性。組織HER-2陽性的判斷標準：IHC計分3+或IHC計分2+再經(jīng)熒光原位雜交(FISH)驗證陽性者視為陽性；組織HER-2陰性的判斷標準：IHC計分0+～1+或IHC計分2+再經(jīng)熒光原位雜交(FISH)驗證陰性者視為陰性。

1.4統(tǒng)計學處理

兩樣本均數(shù)比較用t檢驗，陽性率的比較采用χ2檢驗，采用Kappa檢驗來判斷2種檢測方法結果是否具有一致性，Kappa值的判斷[3]:k>0.75一致性好，0.40≤k≤0.75一致性較好，k<0.4一致性差。

2結果

2.1血清HER-2/neu ECD的水平和陽性率

可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu ECD水平均高于乳腺良性病變患者及健康體檢者(P均<0.05)，乳腺良性病變患者血清HER-2/neu ECD水平高于健康體檢者(P<0.05)；可手術乳腺癌血清HER-2/neu ECD陽性率均高于乳腺良性病變患者及健康體檢者(P均<0.05)，乳腺良性病變患者血清HER-2/neu ECD陽性率與正常對照組相比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；見表1。

表1　不同組別血清HER-2/neu水平及陽性率

注：△為乳腺癌患者血清HER-2/neu水平與乳腺良性病變及正常對照組相比，P均<0.05;▲為乳腺良性病變患者血清HER-2/neu水平與正常對照組相比，P<0.05。☆為乳腺癌患者血清HER-2/neu陽性率與乳腺良性病變及正常對照組相比，P均<0.05;★為乳腺良性病變患者血清HER-2/neu陽性率與正常對照組相比，P>0.05。

2.2血清HER-2/neu濃度與組織HER-2表達水平的關系

34例組織HER-2表達陽性的可手術乳腺癌中有14例血清HER-2/neu陽性，陽性符合率為41.2%；50例組織HER-2表達陰性的可手術乳腺癌中有48例血清HER-2/neu陰性，陰性符合率為96.0%。化學發(fā)光法檢測結果顯示血清HER-2/neu水平與組織HER-2表達水平差異無統(tǒng)計學意義，2種檢查方法具有較好的一致性，(kappa=0.406，P<0.05)；見表2。

表2　乳腺癌患者HER-2/neu水平與組織HER-2

3討論

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。20%～30%的乳腺癌患者呈HER-2過度表達或基因擴增，HER-2基因的擴增和蛋白的過度表達預示腫瘤的生物學行為惡性程度高，侵襲力強，無病生存期短，預后差[4]。組織HER-2和激素受體的表達是乳腺癌的內(nèi)分泌治療和靶向治療的唯一選擇依據(jù)，目前大多數(shù)乳腺癌患者的臨床治療仍然是根據(jù)初始評估，但HER-2的表達狀態(tài)隨疾病的進展會發(fā)生改變[5]。

目前國際上認可的篩選HER-2表達陽性乳腺癌的方法有免疫組化(immunohistochem istry，IHC)法和熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)法。IHC法由于蛋白在標本固定和處理過程中容易變形破壞，以及抗體不同批號產(chǎn)生的差異和結果判斷的主觀差異等，使假陽性和假陰性無法避免[6]；FISH技術是一種基因技術，具有敏感性高、穩(wěn)定性和重復性好等優(yōu)點，但檢測費用高，且兩者均需要實體瘤樣本；對于晚期乳腺癌或治療過程中出現(xiàn)肝、骨等轉移不能取得實體標本的患者，均不能做IHC和FISH檢測。因此，僅僅根據(jù)以往組織學檢測結果來判斷HER-2狀態(tài)并不科學，需要及時監(jiān)測HER-2表達狀態(tài)，否則可能會使部分組織HER-2假陰性的患者失去靶向治療和臨床獲益的機會。國家綜合癌癥網(wǎng)(NCCN)建議盡可能進行轉移灶的活檢，但很少得到關注，尤其當轉移灶難以活檢時。

在這種情況下，血清HER-2/neu胞外段(extracellular domain,ECD)可能可以作為乳腺癌患者治療的一個重要的依據(jù)。袁芃等[7]采用ELISA方法檢測可手術乳腺癌血清HER-2/neu ECD陽性率為19%，組織HER-2/neu陽性率為47%。而采用化學發(fā)光法檢測乳腺癌患者血清HER-2/neu水平的文獻至今還未見報道，本研究采用化學發(fā)光法檢測可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu ECD陽性率為19.05%(16/84)，組織HER-2/neu陽性率為40.5%(34/84)；可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu ECD水平和陽性率均高于乳腺良性病變患者及健康體檢者(P均<0.05)，與袁芃等報道一致。

總之，目前被廣泛采用的HIC和FISH存在諸多問題：由于活檢的創(chuàng)傷性和標本的局限性，HER-2的檢測無法動態(tài)隨訪，實時監(jiān)測；而且部分患者無法提供檢測所需的組織切片；腫瘤異質(zhì)性會導致假陰性結果，有些患者的HER-2表達水平在疾病的發(fā)展過程中可能發(fā)生轉變，有些可由陰性表達轉為陽性表達。因此，臨床需要持續(xù)了解患者機體HER-2的表達水平，而血清HER-2/neu ECD檢測作為“液體活檢”可隨時進行，做到量化、實時、動態(tài)監(jiān)測，從而有助于臨床醫(yī)生根據(jù)HER-2表達情況制定治療方案，以實現(xiàn)個體化治療。本研究顯示化學發(fā)光法檢測可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu濃度與組織HER-2表達水平具有較好的一致性(kappa=0.406，P<0.05)；化學發(fā)光法檢測可手術乳腺癌患者血清HER-2/neu ECD的敏感性不高(41.2%)，但特異性很好(96.0%)。因此，乳腺癌患者在系統(tǒng)治療期間，可通過化學發(fā)光法動態(tài)監(jiān)測患者血清HER-2/neu ECD水平，彌補組織HER-2檢測的不足，在乳腺癌隨訪、療效監(jiān)測尤其是用Herceptin治療后的療效監(jiān)測中發(fā)揮其獨到作用。

參考文獻

[1]Cook GB,Neaman IE,Goldblatt JL,et al.Clinical utility of serum HER-2/neu testing on the Bayer Immuno 1 automated system in breast cancer〔J〕.Anticancer Res,2001,21(2B):1465-1470.

[2]Leary AF,Hanna WM,van de Vijver MJ,et al.Value and limitations of measuring HER-2 extracellular domain in the serum of breast cancer patienta〔J〕.J Clin Oncol,2009,27(10):1694-1705.

[3]孫振球主編.醫(yī)學統(tǒng)計學(第三版)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：662-663.

[4]步宏，陳杰，丁華野，等.乳腺癌HER2檢測指南〔J〕.中華病理學雜志，2006,35(10):631.

[5]臧愛華,冉鳳鳴,張菁，等.乳腺癌生物標志物表達狀態(tài)的時間變異性〔J〕.腫瘤防治研究,2010,37(9):1031-1034,1039.

[6]萬美珍,凌揚,徐志毅，等.熒光原位雜交與免疫組化檢測乳腺癌組織HER-2基因擴增或蛋白表達情況的比較分析〔J〕.腫瘤基礎與臨床,2010,23(1):16-18.

[7]袁芃,徐兵河,齊軍.乳腺癌患者血清與腫瘤組織中Her-2/neu表達的相關性研究〔J〕.臨床腫瘤學雜志，2004,9(5):449-451.

(編輯：甘艷)

Correlation between Serum HER-2/neu Concentration of Breast Cancer Patients and HER-2 Expression Level

ZHOUAiqing,CHENZhijun,SUNZhengkui,etal.JiangxiCancerHospital,Nanchang,330029

【Abstract】ObjectiveTo explore the correlation between concentration of HER-2/neu ECD and HER-2 expression level in tissues by chemiluminescence.MethodsSiemens chemiluminescence apparatus was used to detect the serum HER-2/neu ECD level in 84 operable breast cancer patients.58 patients with breast benign lesions over the same period and 56 cases of healthy patients were selected as contrast.HER-2 expression level in tissues of 84 cases of breast cancer patients were detected.ResultsHER-2/neu ECD levels and serum positive rate of the breast cancer patients were 15.56±6.79 ng/ml and 19.05%,which were significantly higher than patients with breast benign lesions (6.21±3.21 ng/ml,0.00%) and healthy patients (5.13±2.25 ng/ml，0.00%)，P<0.05.There were 14 cases of positive serum HER-2/neu in 34 operable breast cancer patients with positive expression of HER-2,positive coincidence rate was 41.2%.There were 48 cases of negative serum HER-2/neu in 50 operable breast cancer patients with negative expression of HER-2,negative coincidence rate was 96%.The serum HER-2/neu level had good consistency with expression of HER-2(kappa=0.406，P<0.05).ConclusionSerum Her-2/neu concentration in operable breast cancer patients has good consistency with expression of HER-2 by chemiluminescence.During the system treatment for breast cancer patients,dynamic monitoring of serum HER-2/neu ECD level by chemiluminescence can make up for the insufficiency of HER-2 detection.It plays an unique role in the follow-up of breast cancer patients and monitoring of efficacy,especially monitoring of efficacy after treatment with Herceptin.

【Key words】Breast cancer;Chemiluminescence method;Serum;HER-2/neu;Lmmunohistochemical;Fluorescence in situ hybridization(FISH)

(收稿日期2014-12-04修回日期 2015-01-14)

中圖分類號：R737.9

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)04-0479-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.04.002

基金項目：江西省衛(wèi)生廳科技計劃(編號：20123106)